实验6小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象观察.docx

实验6小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象观察姓名：李思露学号：131140040一、 实验目的1. 通过对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞活动的观察加深理解细胞吞噬作用的过程;2. 了解巨噬细胞吞噬能力检测的形态学方法二、 实验原理吞噬作用也称为胞吞作用(cellular eating)，指细胞通过质膜内陷形成内吞泡的方 式吞入不能渗透过膜的较大固体物质(直径一般大于250mm)的过程许多原生动物 通过吞噬作用摄取营养；高等动物体内的巨噬细胞和嗜中性粒细胞的吞噬作用成为动 物体非特异性免疫的重要组成部分不同动物来源的巨噬细胞或同一动物来源的不同 巨噬细胞吞噬功能强弱不同，个体吞噬细胞的平均吞噬能力是机体非特异性免疫功能 强弱的重要反映吞噬细胞细胞膜上有识别某些病原体相关分子及凋亡细胞磷脂酰丝氨酸等配体的 受体，可以使巨噬细胞识别结合病原体、凋亡细胞及其它异物，引起受体胞内区活化， 进而导致与其相连的细胞骨架重排引发吞噬作用内吞彳PhagosomeJ—Lysosome Pha^oiysos<内吞 I..

f 厂 / t I1 r ■厂.XCytwiiw；吞噬功能一般用吞噬百分率和吞噬指数两个指标反映吞噬百分率=吞噬有鸡红细胞的巨噬细胞数/巨噬细胞总数X100% 吞噬指数=吞噬的鸡红细胞总麴吞噬有鸡红细胞的巨噬细胞数三、 实验材料、试剂及器材（一） 材料：1. 健康小白鼠：6-8周龄健康小白鼠，实验前1~2天，每只腹腔注射4%淀粉肉汤1mL2. 抗凝鸡血（二） 试剂：1. 4%淀粉肉汤2. D-Hanks 液3. 0.85%生理盐水4. 180IU/mL肝素钠生理盐水溶液（三） 用品普通光学显微镜、10mL低速离心机、托盘天平、水浴箱（37°C）、5mL 一次性注射器、10mL玻璃离心管、试管架、胶头滴管等四、 实验操作1. 巨噬细胞收集：脱颈处死小鼠；腹腔注入2mL生理盐水，揉匀；剪开腹部皮肤， 暴露腹膜；用带针头的注射器插进腹腔吸取腹腔液2. 体外吞噬0.3mL腹腔液+0.3mL鸡红细胞悬液，37C吞噬3. 制片及观察分别在0min、15min、30min、45min制备细胞混合液临时装片，观 察现象并作图五、实验结果巨噬细胞吞噬物的变化亦具有与时间相关的特点，巨噬细胞吞噬物在形态上易于 观察和检测，这些特征使得巨噬细胞在损伤时间推断过程中具有重要的法医学意义。

六、作业与思考题1. 画图显示巨噬细胞吞噬鸡红细胞过程各个阶段答：如表1.2. 在体外吞噬实验中，为什么随着吞噬时间延长，制片中出现的巨噬细胞数量减少？ 答：巨噬细胞(Macrophages)能够吞没、破坏受损伤组织，有助于启动康复过程虽 然它们在损伤位点发挥关键作用，但一旦任务完成，就需要尽快撤离，结束炎症反应， 为再生过程开路继续存在的巨噬细胞不利于组织恢复3. 如不预先洗涤鸡红细胞会影响实验结果吗？为什么？答：会D-hanks液是一种平衡盐溶液，用于洗涤鸡血红细胞，如果不洗涤则鸡血红细 胞含有钙镁离子，会破坏巨噬细胞溶酶体水解酶的活性，影响吞噬过程的进行七、反思与改进1. 注射时注意不要注入皮下或将针头插进小鼠内脏进针部位选在下腹部，距离生殖 器约1cm处腹中线两侧，针头与皮肤保持约30度到45度角，针头进入皮肤约1cm； 可用一只手的拇指和食指将下腹部皮肤及腹膜夹起，然后将针头插入空腔2. 要注意计时，不同阶段细胞的形态不同。