病毒中和试验测定法.docx

病毒中和试验测定法1 .固定病毒稀释血清法（a法）本法用于抗血清的中和价试验需先滴定病毒 毒价，试验时将其稀释成每一单位剂量含 200个TCI心,再将待检血清倍比稀释 加等量200个TCIQo/ml的病毒液，混匀后37 C1h,每一稀释度接种24孔细胞 培养板4孔，每孔5%C0®养箱培养一定时间后，记录出现 CPE孔数，以不出 现CPE>和接种数的比为中和比值按 Karber法计算中和价其公式如下：Log TCID50=L+d （）（TCID50用对数计算，L为病毒最低稀释度的对数 d为组距，即稀释系数，在 10倍系列稀释则为-1 , S为各组CPE与接种数比值之和）50%中和试验举例血清稀释稀释度对数1/10-11/201/401/801/1601/320廿接种剂量含病毒100TCID50 或100LD50 或 100EID50 或 100ID50中和比值4/44/44/44/42/40/4L=-1 , d=, S=4/4+4/4+4/4+4/4+2/4=代入Karber公式：LogND0= -1 —*该抗血清ND0（半数中和单位）为，即1/160, 则其中和价为160 ND50/ml ,可以简写成160。

2 .固定血清稀释病毒法（B法）本法用于测定抗血清的中和指数将病毒原液 10倍系列稀释，分列于2排无菌管，第一排加等量正常血清（对照组）；第二排 加待检血清（中和组），混匀后，置37C1h,分别接种细胞板孔（或鸡胚、实验 动物）进行培养，记录 CPE（鸡胚、动物死亡数），计算TCID50 （或LD50）,按下 式计算中和指数中和组TCID50 （或LD5中和指数=对照组TCID50 （或LD5查反对数，即得该待检血清的中和指数通常中和指数 >50者判为阳性,10-49 为可疑， <10 者为阴性例如：对照组滴度的 LD50=中和组滴度的 LD50=中和指数 =10 中和指数的对数 Log=Log100=一般来说，以10倍稀释进行滴度测定，Log10=1因此小于10 (1 则是有意义的 . 。