除菌过滤与无菌工艺验证的解读-无菌模拟部分.pdf

2017/3/301无菌工艺验证&除菌过滤 技术指南解读2107年3月28日 北京 顿昕提纲•指南背景 – 目的与范围 – 起草过程 – 修订意见 •无菌工艺验证指南 – 无菌制剂 – 无菌原料 •除菌过滤技术指南 – 液体过滤 – 气体过滤2017/3/302指南背景•目的及定位： – 企业实施 • 如何进行干预模拟 – 检查督导 • 如何判断假阴性 – 国际接轨 • PDA TR22 • PDA TR26 • PDA TR28起草过程介绍– 2016年1月12日启动，建立邮件与群 – 1月19日首次会议 – 3月22日首次见面会议在审核查验中心召开 – 5月11，12日第二次见面会议 – 7月25日‐9月，药监系统内讨论稿，征求意见 – 其间23次会议， – 原料药修改了5版，制剂修改了8版，除菌过滤修改了 12版 – 9月28‐29日，第三次讨论会 – 2016年12月上网征求意见2017/3/303编写与审核人员• 领导小组 – 国家审核查验中心 • 主起草人– 华瑞，华药，天士力，默克，正大天晴，海正，睿知而行 • 审核小组– 天津，福建，江苏，浙江，上海，广东，河北，辽宁，江西省药监代表 – 华瑞，华药，天士力，默克，正大天晴，海正，睿知而行 – 常州四药，齐鲁 – 网上其他药监机构和企业的审核意见2017/3/304讨论过程问题•问题： – 关于指南的定位 – 指南的命名 – 验证？灌装？ – 为什么将无菌制剂和原料药指南分开“无菌工艺模拟试验‐制剂部分”2017/3/305原则• 在对无菌生产工艺充分认知和生产经验累积的基础上，应 结合工艺、设备、人员和环境等要素定期开展无菌工艺模 拟试验，以确认无菌生产过程的可靠性，同时也为企业及 时识别风险，进而改进无菌控制措施提供数据支持。

开展 无菌工艺模拟试验应遵循以下原则：– 对无菌生产过程实施风险评估，识别生产过程风险点，评估结果 应在试验方案设计时给予考虑– 应充分考虑硬件装备水平与无菌风险的关联性，结合无菌生产过 程所涉及到的工艺、设备、人员以及操作时限等因素针对性开展 模拟试验尽可能模拟实际无菌生产全过程应特别关注“开放” 操作、人工干预等高风险过程– 如在同一生产线生产不同剂型和容器规格的产品，应考虑模拟试 验方案对各产品无菌工艺过程的适用性应对有显著差异的无菌 工艺过程开展模拟试验无菌制剂生产工艺及模拟范围无菌制剂生产工艺及模拟范围• 无菌生产工艺通常包含：经除菌过滤或其他方法获取无菌 药液或无菌粉末，在无菌条件下进行液体灌装或粉末分装， 容器密封冻干制剂在液体灌装的基础上增加了冷冻干燥 过程 •无菌工艺模拟试验应从无菌操作的第一步开始，直至无 菌产品完全密封结束如果在产品制备阶段采用了无菌工 艺，此部分工艺也应作为模拟验证的一部分对于全过程 无菌生产（如配制后不能除菌过滤）的产品，无菌工艺模 拟还应涵盖原液配制、半成品配制等无菌操作过程企业 应根据风险评估确定无菌工艺模拟试验的起始工序2017/3/306药品非无菌无菌（检验项目）无菌原料药无菌制剂最终灭菌冻干原料药结晶法原料药非终端灭菌滴眼剂冻干粉水针 Fo<8,如TCM无菌粉针大容量注射剂小水针F0〉=8特殊大容量无菌药品的分类无菌药品的分类产品过滤除菌容器胶塞辅料灭菌除热 源湿热灭菌过滤除菌无菌胶塞无菌辅料无菌灌装无菌产品无菌容器冻干或 非冻干扎盖无菌药品的生产（最终不可灭菌生产工艺无菌药品的生产（最终不可灭菌生产工艺--无菌工艺）无菌工艺）2017/3/307•无菌工艺模拟试验应从无菌操作的第一步开始，直至无菌产品完全密 封结束。

如果在产品制备阶段采用了无菌工艺，此部分工艺也应作为 模拟验证的一部分对于全过程无菌生产（如配制后不能除菌过滤） 的产品，无菌工艺模拟还应涵盖原液配制、半成品配制等无菌操作过 程企业应根据风险评估确定无菌工艺模拟试验的起始工序轧 盖轧 盖外检外检外包外包灌装灌装培养基模拟灌装验证的范围？培养基模拟灌装验证的范围？冻 干冻 干2017/3/308无菌工艺模拟试验的前提条件• 在无菌工艺模拟实验之前应确认与无菌工艺相关的支持性 系统和灭菌系统的验证已完成，并达到了可接受的标准• 工艺设备、公用系统和辅助设施已按照预期完成了安装确认、运行确认 及与无菌生产有关的性能确认• 已对工艺设备、公用系统、辅助设施的灭菌方法完成了相应的验证物 料及厂房、设施所使用消毒剂及消毒方式完成了相关的验证• 已经完成了药液及与产品接触的气体、设备组件及容器的灭菌（除菌） 方法验证 • 无菌生产区域的气流及环境达到了设计要求，并能稳定运行 • 根据无菌生产工艺要求建立了相关受控操作文件 • 参与无菌工艺模拟试验的人员接受了药品GMP、无菌操作、微生物知识 以及实施模拟试验的培训• 进入无菌洁净区的全部人员通过了更衣程序的确认，并采用文件或其他 措施，确认了每位参与者可进入的区域和其所允许的无菌操作项目。

基于风险的方案设计• 无菌生产工艺的风险评估– 无菌生产工艺的设计基于对产品特性、工艺技术和无菌保证措施 的认知和经验的累积设计模拟试验方案前应对无菌生产过程开 展系统性风险评估，以充分识别无菌生产过程中潜在风险点– 模拟试验方案设计时，应重点考察和评估高风险的无菌操作过程 无菌生产工艺的暴露操作是影响最终产品无菌特性的重要环节， 如设备（或管道）的无菌连接、无菌容器的转运和更换、灌装等 关键操作模拟试验方案设计应考察以上过程无菌保证措施的有 效性– 证实无菌操作人员能满足无菌生产要求，是实施模拟试验的目的 之一进行模拟试验方案设计时，应结合工艺过程中的“开放” 环节，重点考察有人员参与的关键操作，评价人员无菌操作素养 和防护措施的可靠性2017/3/309模拟介质的选择附录1：第四十七条 -2应根据产品的附录1：第四十七条 -2应根据产品的剂型剂型以及培养基的以及培养基的选择性选择性、、澄清度澄清度、、浓度浓度和和灭菌适用性灭菌适用性选择选择培养基应尽可能模拟常规的无菌生产工艺培养基应尽可能模拟常规的无菌生产工艺本指南：应结合被模拟产品的特点以及模拟介质的可过滤性、澄清度、灭菌方式等选择合适的模拟介质。

不应选择明显具有抑菌性的模拟介质，以确保模拟试验结果的可信度通常可采用的模拟介质包括促进微生物生长的培养基和安慰剂1721:336.3.2.4 对于包含动物来源成分的培养基，应考虑培养基引入 外源性病毒污染的风险如BSE（可传染性海绵脑病）/TSE （疯牛病）的风险 微生物 引入微生物，如果培养基中含有动物源性成分，可能导致朊蛋白污染 那么很重要的是，培养基供应商能够提供证明，确认相关物质来源于没有牛海绵状脑病（BSE‐free）的国家 培养基，环境监控，人员，不合适的着装和咳嗽， 粒子 人员，不合适的着装和压差， 化学 来自消毒剂的污染，1821:332017/3/3010•胰酪大豆胨液体培养基（TSB）是一种广谱性培养基，特别对无菌工 艺环境中源自人体的细菌、芽孢和真菌有良好的促生长效果，是无菌 工艺模拟试验常用的培养基•如果产品需充入惰性气体、储存在无氧条件，无菌操作在严格的厌氧 环境中进行时（即氧气浓度低于0.1%），应考虑采用厌氧培养基，如 硫乙醇酸盐液体培养基（FTM）在厌氧的无菌工艺环境监控中反复 发现厌氧微生物或在产品无菌检查中发现厌氧微生物时，需评估增加 厌氧培养基。

培养基的配制•模拟试验的培养基应在控制区域进行准备需注意培养基粉尘在环境中的扩散，以及设备表面的残留引发的微生物滋生通常按照最终培养浓度3%的要求配制培养基配制后的培养基应尽快灭菌或除菌过滤•培养基在模拟试验前应恢复至室温，即用型无菌液体培养基储存条件和使用条件可遵循生产商要求2017/3/3011培养基的除菌与灭菌•在培养基选择阶段应考虑其过滤性由于培养基的特性与药液有差异，培养基除菌过滤的滤器型号可与产品使用的过滤器不同如因颗粒或生物负载较大等原因引起除菌过滤器的堵塞时，可增加预过滤步骤•需考虑降低非无菌培养基中细菌和霉菌生长的风险，以避免微生物生长导致培养基过滤性能降低•针对以上情况应进行风险评估并采取合理应对措施湿热灭菌&辐照灭菌•采用灭菌或灭菌釜湿热灭菌方式时，应考虑避免受热不均匀或灭 菌不充分现象应对该灭菌方式进行风险评估和验证•灭菌过程应遵循生产商推荐的灭菌时间和温度的建议，并对灭菌过程 予以确认确保灭菌后培养基的促生长能力，避免过度灭菌使培养基 碳化造成其促生长性能的降低为避免过度加热可采用湿热灭菌与除 菌过滤联合使用的方式，但均应进行促生长能力试验•使用辐照灭菌的培养基粉末，应在无菌环境下进行无菌配制等操作。

辐照灭菌过程应经验证，并在产品质量报告中体现验证中所用的菌种 和剂量等信息2017/3/3012适用性/灵敏度试验/促生长试验/阳性对照检查什么时间做？用什么微生物？结果如何判定?2321:33• 培养基促生长能力试验 – 应在无菌工艺模拟试验前及14天培养后按照现行中国药典方法对 培养基进行促生长能力试验 – 促生长能力试验使用的菌种包括：白色念珠菌（CMCC98001）、 黑曲霉（CMCC98003）、枯草芽孢杆菌（CMCC63501）、金黄色 葡萄球菌（CMCC26003）、铜绿假单胞菌（CMCC10104）和生孢 梭菌（CMCC64941）等除标准菌株之外，还应考虑加入环境和 无菌检查中发现的典型微生物促生长试验接种量应不大于 100CFU，按照中国药典要求培养，以证明培养基能够支持微生物 的生长2017/3/3013Presentation title in footer | 00 Month 000025 Aspergillus niger (ATCC 16404 黑曲霉菌黑曲霉菌)Candida albicans (ATCC 10231白色念珠菌白色念珠菌)Growth/Turbidity within 120 hours at 20 - 25°°CCandida albicans (ATCC 2091白色念珠菌白色念珠菌)Bacillus subtilis (ATCC 6633 枯草芽孢杆菌）枯草芽孢杆菌）Staphylococcus epidermidis (ATCC 12228表皮葡萄球菌表皮葡萄球菌)Staphylococcus aureus (ATCC 25923)金黄色葡萄球菌）金黄色葡萄球菌）Growth/Turbidity within 72 hours at 20 - 25°°CStaphylococcus aureus (ATCC 6538金黄色葡萄球菌）金黄色葡萄球菌）Salmonella typhimurium (ATCC 14028鼠伤寒鼠伤寒沙门沙门氏菌氏菌)Pseudomonas aeruginosa (ATCC 9027)铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌Bacillus subtilus (ATCC 6633 枯草芽孢杆菌）枯草芽孢杆菌）(Streptococcus pneumoniae 肺炎链球菌肺炎链球菌ATCC 6301)Staphylococcus aureus (ATCC 6538金黄色葡萄球菌）金黄色葡萄球菌）Growth/Turbidity within 24 hours at 30 - 35°°CEscherichia coli (ATCC 8739)埃希大肠杆菌）埃希大肠杆菌）Growth ResponsePresentation title in footer | 00 Month 000026[Days][Optical Density]1.2 x 107CFU/mL2.5 x 107CFU/mL11 x 107CFU/mL5.7 x 106CFU/mLNon-Animal TSBIrradiated Non-Animal TSBTSBIrradiated TSBFina。