羊球虫病诊断技术规程.doc

羊球虫病诊断技术规程1范围本标准规定了羊球虫病的病原检杏、病理检杏与结果判定本标准适用于我省羊球虫病的诊断2病原检查2.1材料准备2. 1. 1饱和食盐水溶液、0. 01mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.4）o2.1.2显微镜、麦克马斯特计数板、离心机、电子天平、50mL离心管、玻璃棒、60冃铜筛、尼龙网、 50讥烧杯、100 mL量杯、载玻片、盖玻片、吸管、手术刀、解剖刀等2.2粪样检查2. 2.1清辰从疑似球虫感染的待检羊直肠中采取新鲜粪样（10〜30） g,放干净容器内冷藏备用每份 粪样应附送粪卡，送粪卡应记录羊场名称、畜别、畜号、性别、年龄、有无孕、采粪日期等送检验室 待检2.2.2取粪样3g,置于50mL的烧杯中，加入少量清水，用玻璃棒将粪样捣碎，加入约为粪样10倍聚 的清水，搅拌均匀，用60 口铜筛过滤于另一干净烧杯内，将过滤好的滤液分别加入50mL离心管中， 2000r/min离心lOmin,倾去上清液,在沉淀物中加入饱和食盐水溶液至45mL,混匀,2000r/min离心 lOmino将上清液分装至四个（10〜15） mL的试管中，加饱和食盐水溶液至液面微高出管口，取盖玻片 轻压于液面，静置10 mine将盖玻片垂直提起，放在载玻片上，置于显微镜下检查。

2.3病变部位检查解剖疑似球虫感染的病、死羊，分别对羊的皱胃、肠道、肝脏及胆管等冇明显病变的部位取样，进 行裂殖子或卵囊检查2. 3. 1裂殖子检查取皱胃、肠道、胆管病变部位，用0.01mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.4）轻轻洗去表层朵物用解剖 刀或手术刀刮取少许病变处粘膜，置丁•干净载玻片上，滴（1〜2）滴0. 01mol/L磷酸盐缓冲液（pH7. 4）, 加盖玻片，置于显微镜F检查2. 3. 2卵囊检查2.3.2. 1将病变的皴胃、肠道、胆管或胆囊，纵向剪开取少量内容物，置于载玻片上，滴（1〜2） 滴0.01mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.4）,加盖玻片，轻轻将内容物压散，置显微镜下检查；从冇黄白色坏 死灶的肝脏上，剪取少量病变组织，放研钵内，加适量0.01mol/L磷酸盐缓冲液（PH7.4）,充分研磨 取1滴研磨液滴在载玻片上，加盖玻片，在显微镜下检查DB43/T 904—20142. 3. 2. 2羊球虫卵囊形态特征参见附录A2. 4卵囊计数对检查发现羊球虫的粪样，应进行定量检查取待检粪样2g,放入50 mL烧杯加入少量清水搅 匀，经60目铜筛或尼龙网过滤,并用清水冲洗几次滤网。

滤液经2 000 r/min离心10 min倾去上清液，用少量饱和食盐水溶液将沉淀物搅匀，移入100皿量杯，加饱和食盐水溶液至50 mL 处，充分混匀用吸管吸取混悬液注满麦克马斯特计数板，静置5 min,在显微镜下检查，数出每个计 数室内的所有卵囊数，计算出平均值A对压线的卵囊，按左、上压线计，右、下压线不计处理2.4. 1每克粪样卵囊数(0PG)按公式计算:0PG =(A4-0. 15 )X60*2二AX2002. 4. 2对卵囊数较多的粪样，可在50mL的基础上，用饱和食盐水溶液再稀释B倍后计数，则OPG按公 式计算：0PG = AX200XB2.5检查结果在显微镜下观察是否有球虫卵囊、裂殖体和裂殖子3病理检查3. 1病变检查3.1.1切开腹腔，分别对羊的皴胃、小肠两端用实线进行双重结扎，取出全部小肠及皱胃用剪刀纵 向剪开小肠及皱胃，除去内容物，用0.01mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.4)冲洗肠壁和胃壁观察胃壁及 肠壁病变情况，并做好记录3.1.2切开腹腔，切断肝叶周围韧带，结扎血管取出完整肝脏及胆囊剪开胆囊壁及胆管，用 0.01mol/L磷酸盐缓冲液5II7.4)清洗肝脏表面及胆囊，观察病变情况并做好记录。

3.2检查结果3.3.1 皱胃病变：皱胃胃壁呈弥漫性增厚并伴有水肿，胃粘膜表面有口色结节和红黑色出血斑3.3.2 肠道病变：十二指肠和回肠冇卡他性炎症，冇点状或带状出血，小肠及大肠的浆膜和粘膜上冇 溃疡灶，并伴有黄白色结节突出于粘膜表面3.3.3 肝脏及胆囊、胆管病变：肝脏表而有大量不规则黃白色坏死灶，胆囊壁增厚，胆管明显可见, 管壁增厚4结果判定4. 1病原检杏如见有人量球虫卵囊、裂殖体、裂殖了，病理检杏出现一处或多处相应病变即判可为羊球虫病阳性当0P010X104,判定为严重感染;当10 X104M0PGM1X104,判定为中度感 染；当0PGV1X104,判定为轻度感染4.2粪样一样3检，均未发现球虫卵囊；肠道、肝脏、胆囊及胆管检查未发现球虫卵囊、裂殖了，各 部位均未出现相应病变，即可判定为羊球虫病阴性附录A（资料性附录）羊球虫卵囊形态特征羊球虫卵囊具有以下主要形态特征：a） 球虫卵囊呈椭圆形、圆形、卵圆形或梨形等形态，均有卵囊壁b） 未发育成熟的卵囊，其颗粒状的原牛质多呈圆形，位于卵囊中间c） 发育成熟的卵囊因属不同，而内含的他子囊和子抱子数不相同d） 艾美耳属（Eimeria ）球虫卵囊内有4个砲子囊，每个砲子囊含2个子孑包子。