弓形虫gra6蛋白和p30蛋白的融合表达、纯化及抗原性分析.pdf

卷 # 期 $%%)：);?-@弓形虫 !“#$ 蛋白和 %7 公司产品， KD4A、 J44 为 D0(.-L7 公司产品其它试剂为进口或国产分析纯试剂)()L.7 公司产品其它材料为酶联反应的常规材料)*方法()*)(DEB 引物的合成：由大连 47R7B7 公司帮助合成弓形虫 !“# 的纯化： 取小鼠培养的弓形虫$%%! 水浴 ’%;冻存备用基因克隆方法：!“# 的酶切、 连接、 电泳； 质 粒的提取、 转化； 蛋白的 ?!?2@#A) 分析等一般分子克隆方法按常规方法进行其它按试剂盒说明书进行操作 序列分析： 用 BC#A)“ 公司质粒纯化试 剂盒纯化质粒， 用 !“# 全自动测序仪测序QRK .T )?4L ENE>AK=)O !“#$ N=J= K （2EWE“E %94777）!“(表达融合蛋白重组质粒的构建 用 !“#!和 )“#“!双酶切质粒 /P245E （ X ） ，!“#!和 $%QRIAJ A=QA@.IJEJR /BEK@ID =:/>=KKIJNRS= QSI@=>IQ />AR=IJ AC@IJ ） * @IJ，取上清（内有质粒） 4“9 用作 ’(“ 模板。

用引物 !“#$’) 和引物 ’37’+ 组成引物对， 以提取的质粒为模板进行’(“ 鉴定， 含有弓形虫 !“#$ 基因片段与 ’37 蛋白 基因片段串联基因的重组质粒， 应扩增出一条$,$生物工程学报)8 卷!!“#$% 基因片段 取 蛋白基因片段图 );;）!“#表达融合蛋白工程菌的筛选鉴定 将上述 4 个转化子， 分别接种至含 “ F* *O 培养基 （含卡那毒素 4;!.PF*） 的试管内， “QR振荡培养 “E， 加 ?+) FF1IS*， 继续振荡培养诱导 4 E， 离心收集菌体进行 TKTU;; 的融合蛋白， 表达量约为#),， 而对照菌和 # 个 蛋白基因片段融合蛋白的工程菌图 4表达弓形虫 :(-4 和 融合蛋白重组菌的!#,TKTU 基因片段的 KL- 序列完全正确， 结果如下：-7: :’- :’- :-’ -:’ ::7 ::7 :77 --: ’-: -’’ ’’77’: :-- -’’ ::7 7’: -:’ ::7 ::- ’-: ’-- :-- :’-:7: ::: -’’ -’7 :-- :-’ 7-7 :7’ --’ 7’7 7’: :’:-7: ::’ ::7 ::’ ’-- ::’ :-’ 7’: 77- :’7 :-- :-7:-7 -’- -’’ 7’’ :-- :’: :’: :-: ::’ :-’ :77 :-’’’7 777 ’’’ :7: ’7: :’: --7 :-: ::: --: 7’: :-::’: ’:7 ::’ ’’: 7’: ’7’ :-: :-- -:- -7’ :-- :--’-: ::’ -’- -:- ’:- ’:7 7-’ 7’’ 7’7 :77 ’-- :--’’- ’-- :’: --: :7: ’’7 -:’ --- ’:- -’- ’-: ---’:’ ’-’ -:- ::- 7’’ ’-- :77 :7’ -’’ 7:’ ’’- ’-7--- --- 7’: -’- :’’ :’: :7’ -77 ’7’ -’- ’’: -’::-: --’ ’-’ 77’ -’7 ’7’ --: 7:’ ’’7 --- -’- :’:’7’ -’- :-: ’’7 ’’’ -’7 ’77 :’: 7-’ 7’- ’’’ --’-:: ’-- -7’ 7:’ ’’- :’: ::7 -’7 -’- -:7 -:’ 7:7-’- 7’- --: :’7 :7- -’- 77: -:’ 7’’ 77: -77 ’’7:-- :’- :-- :-7 -:’ 7:: 7:: -’: ::: :-7 7’7 :’7-:7 ’7: :-’ -’: :’- ::’ -7’ --- ’7’ -’- :77 ’’--7’ :-: --: 77’ ’’’ :7: -’- -’: ’-: -’: 777 :7::7’ ::7 7:’ -7’ --: ::- :-’ :-’ :’- ’-: -:’ 7:7-7: :7’ -’: :-: -’- :7- ’-- :’’ -:- :’’ 7’- 7’::7’ :7’ --7 --7 :7’ :’- -:: 7:’ 7’’ 7-’ ::7 :’-:-’ -:’ -’7 ’77 ::7 ’’7 :7’ --: :7: 7’7 :’: :--:-- ’’’ -’7 -’- -7: -’’ ’7’ :7: 7:’ ::: --- :-7::- :7’ --- :77 ’’7 ’-- :-’ --’ --7 ’-: 7-’ 7:77’’ ::: -’: -’: ’7: -’7 ::7 7:’ --’ :-: --- 7’:77’ --- :-7 -77 77: ’’- --- 77- -’7 :-: --’ ’’:7:: ’-: ::7 --’ :’7 7’: -:7 :-7 --: ::7 :’’ -’:’7- -’: -7’ --: --: :-- :’- 777 ’’- :’’ :-: 7’---- -:’ :7’ -77 -77 ::- 7:’ -’- ::: ::- 7’: ’’7:-: --: ’-7 ’-’ 7:7 -’’ :7: --- ’7: :-: 777 :’’::: :’7 :’- ::: 7’- :’- --- 7’: :’7 :’: ::- 7--!“(%)’)*+,-./012, 33 阴离子柱纯化弓形虫融 合蛋白将 K6-6UT3%E/0123 ? @A1B>=1@ ;=9C>14 D7 )*+ ,-,.=>88142 @A1B>=1@ ;=9C>14*3/6? ;=9C>14 L1CA )(( BB96MI N5G6’3/6? ;=9C>14 L1CA *(( BB96MI N5G6O3/6? ;=9C>14 L1CA ’(( BB96MI N5G6 和 ) 份正常人血清， 结果显示 （见表 )） ，融合蛋白能与抗弓形虫 P2E 阳性血清反应， 不与正常人血清反应， 初步说明该融合蛋白有较好的抗原性和特异性。

表 !融合蛋白的 “#$%G95C>? @A1B>=1@ ;=9C>14)QR(()Q)((()Q*((()QO((()QS((( $4C1.981C1T> 8>==25C1T> 8>=5，! X )*：% 54C1.981C1T> 8>=5>讨论弓形虫感染的实验室检测方法主要包括活体组织检查和动物接种、 5-?,2A 4A2A2A /G 6 /G 6 H+ @W6 -7.0-C-1?A-.0-C-1 6 6.[420-1%> !2;:，6 ./5UF-5- G/0 1-?C-.C2/ C/ -7U0-AA CE- .E25-02. U0/C-2 D- 2CA 6 6 6=2 6 \-0- 2 \6A 6B/4C ()* /G C/C6F U0/C-2 \6A \6AE-1 / D0612-A2A，CE- 0-./5B2 W;$;?P-UE60/A- 33 .6C2/ 2:Q> 4A25-?F2 （;,NP$） ，CE- 0-./5B2 \2CE 2554 66 G/0 1-C-.C2/72d+%!^<-CVI%% 期李越希等： 弓形虫 “#$% 蛋白和 &!’ 蛋白的融合表达、 纯化及抗原性分析。