第七章 线粒体与过氧化物酶体.doc

第七章 线粒体与过氧化物酶体1. 从线粒体的发现和功能鉴定的简史中，你有何体会?答: 1850 年，德国生物学家 Rudolph K?lliker 第一个发现在肌细胞的细胞质中存在着一种规则排列的颗粒，并且从肌细胞中分离到这些颗粒发现将分离的颗粒放置在水中能够膨胀，为此推测∶这种颗粒是由半透性的膜包被的1898 年，有人首次将这种颗粒命名为线粒体，意思是“类似线状的颗粒”(thread-like granule)，并很快被大家所接受1900 年，Leonor Michaelis 粒体的功能研究方面取得了突破性的进展他用染料 Janus green 对肝细胞进行染色，这种染料将线粒体染成绿色当细胞消耗氧之后，线粒体的颜色逐渐消失了，当时已经了解这种颜色的变化是颜料的氧化还原状态改变的结果，从而提示线粒体具有氧化还原反应的功能1913 年，Otto Warburg 从细胞匀浆质中分离了线粒体，并发现它能够消耗氧但是，这些发现当时并没有引起生物学家足够的重视，因为人们普遍认为线粒体的作用主要是参与分化细胞遗传特性的转变人们真正注意线粒体在能量代谢中的作用是分离纯化方法的发展和线粒体独立功能的研究。

在 20 世纪 40 年代早期，Arbert Claude 开创了细胞组分分离技术，能够将线粒体与其他细胞组分分开但他所用是盐法，而盐会破坏线粒体的作用，所以用这种方法分离的线粒体看不到有关 Krebs 循环以及呼吸链的成份 1948年，George Hogeboom、Walter Schneider 和 George Palade 等终于分离到具有生物活性的线粒体，他们采用的分离介质是蔗糖而不是盐，因此不会破坏线粒体分离方法上的突破，使得 Eugene Kenedy 和 Albert Lehninger 证明了线粒体具有 Krebs 循环、电子传递、氧化磷酸化的作用，从而证明了线粒体是真核生物进行能量转换的细胞器体会是四点:①关于膜结构的推测; ②功能的推测;③方法的发展; ④方法的革新2. 线粒体外膜的通透性差,又没有电子传递装置, 所以没有什么作用, 此说正确吗? 答: 不正确虽然外膜中外膜含有孔蛋白, 最大可允许 5,000 道尔顿的分子通过,由于 ATP、NAD、辅酶 A 等的相对分子质量都小于 1,000 道尔顿,因此这些分子都能自由通过外膜所以外膜的通透性非常高,使得膜间隙中的环境几乎与胞质溶胶相似。

但是它有两个重要的作用: 一是建立了膜间隙,有利于建立电化学梯度；第二是外膜含有一些特殊的酶类，如参与色氨酸降解、脂肪酸链延伸的酶,表明外膜不仅参与膜磷脂的合成，同时对那些将粒体基质中进行彻底氧化的物质先行初步分解外膜上含有单胺氧化酶(monoamine oxidase),该酶是外膜的标志酶,这种酶能够终止胺神经递质,如降肾上腺素和多巴胺的作用3. 比较线粒体外膜、内膜、膜间隙和基质的化学特性和功能的主要差别 答: 外膜是线粒体最外的一层全封闭的单位膜结构，是线粒体的界膜，厚6～7nm, 平整光滑外膜含有孔蛋白, 所以外膜的通透性非常高,使得膜间隙中的环境几乎与胞质溶胶相似外膜含有一些特殊的酶类，外膜上含有单胺氧化酶(monoamine oxidase),该酶是外膜的标志酶,这种酶能够终止胺神经递质,如降肾上腺素和多巴胺的作用外膜的主要作用是形成膜间隙， 帮助建立电化学梯度，同时能进行一些生化反应，协助线粒体内膜和基质完成能量转换功能内膜是位于外膜的内侧包裹线粒体基质的一层单位膜结构， 厚 5～6nm内膜的通透性较低，一般不允许离子和大多数带电的小分子通过内膜的蛋白与脂的比例相当高，并且含有大量的心磷脂(cardiolipin)，约占磷脂含量的 20%，心磷脂与离子的不可渗透性有关。

线粒体内膜通常要向基质折褶形成嵴(cristae)， 嵴的形成使内膜的表面积大大增加线粒体内膜的嵴上有许多排列规则的颗粒称为线粒体基粒(elementary particle)，即 ATP 合酶(ATP synthase)，又叫 F0 F1 ATP酶复合体， 是一个多组分的复合物内膜的酶类可以粗略地分为三个大类∶①运输酶类∶内膜上有许多运输酶类进行各种代谢产物和中间产物的运输；②合成酶类∶内膜是线粒体 DNA、RNA 和蛋白质合成的场所； ③电子传递和 ATP合成的酶类∶这是线粒体内膜的主要成分，参与电子传递和 ATP 的合成内膜的标志酶是细胞色素氧化酶内膜是线粒体进行电子传递和氧化磷酸化的主要部位，含有电子传递链中进行氧化反应的蛋白和酶在电子传递和氧化磷酸化过程中，线粒体将氧化过程中释放出来的能量转变成 ATP膜间隙是线粒体内膜和外膜之间的间隙，宽 6～8 nm， 其中充满无定形的液体，含有可溶性的酶、底物和辅助因子膜间隙中的化学成分很多，几乎接近胞质溶胶腺苷酸激酶是膜间隙的标志酶，它的功能是催化 ATP 分子的末端磷酸基团转移到 AMP，生成两分子 ADP膜间隙的功能是建立氢质子梯度。

线粒体基质是内膜和嵴包围着的线粒体内部空间是线粒体基质基质中的酶类最多，与三羧酸循环、脂肪酸氧化、氨基酸降解等有关的酶都存在于基质之中此外还含有DNA、tRNAs、rRNA、以及线粒体基因表达的各种酶和核糖体基质中的标志酶是苹果酸脱氢酶线粒体基质的功能是进行氧化反应，主要是三羧酸循环4. 线粒体内膜的通透性极低， 它是如何进行物质运输的?答: 由于线粒体对于大多数亲水物质的透性极低，所以它必须具备特殊的主动运输系统，完成下列运输作用:①糖酵解产生的 NADH 必须进入电子传递链参与有氧氧化；②线粒体产生的代谢物质如草酰辅酶 A 和乙酰辅酶 A 必须运输到细胞质中，它们分别是细胞质中葡萄糖和脂肪酸的前体物质;③线粒体产生的ATP 必须进入到胞质溶胶，以便供给细胞反应所需的能量，同时，ATP 水解形成的 ADP 和 Pi 又要被运入线粒体作为氧化磷酸化的底物粒体内膜上具有完善的运输系统，主要是运输蛋白和一些起促进运输作用的脂类(如心磷脂)运输系统也包括参与电子传递和氢质子传递的复合物，内膜上有运输丙酮酸、脂肪酸和特殊氨基酸的运输蛋白，其中某些运输蛋白(包括同向和逆向)是靠质子梯度驱动的线粒体氧化磷酸化作用所需无机磷(Pi)输入是与线粒体中 OH-的输出同时逆向进行的(二者间输入与输出的比值为 1:1)。

线粒体中由 ADP+Pi 生成的 ATP 向细胞质的运送是通过另一种运输蛋白与细胞质中的 ADP 进行交换完成的，其结果，ATP 被运输到胞质溶胶供细胞代谢需要， ADP 被运进线粒体基质，与运进的 Pi 一起参与 ATP 的合成这两种逆向运输泵共同维持线粒体基质中高 ADP 和 Pi 的浓度5. 线粒体内膜是如何进行 Ca2+运输的? 对细胞质中 Ca2+浓度调节有何意义? 答: 线粒体内膜上有两种类型的 Ca2+运输系统，能够将 Ca2+输入到线粒体基质中，或将 Ca2+从线粒体基质运输到膜间隙系统 1 是由膜动力势引起的Ca2+离子流向线粒体基质 ;系统 2 是通过与 Na+离子的交换将 Ca2+离子输出到胞质溶胶Ca2+从线粒体膜间隙输入到线粒体基质是由内膜上的膜动力势驱动的(内膜内侧带负电，能吸引正电离子)Ca2+输入的速率随着外部 Ca2+浓度的变化而变化在心脏、脑和骨骼肌等组织中，Ca2+的输出是由 Na+梯度驱动的，即与 Na+进行逆向协同运输在正常情况下，这种交换运输的速度非常之快因此，线粒体、内质网和肌质网都能作为细胞质中 Ca2+调节的缓冲区域如果胞质溶胶中 Ca2+浓度升高， Ca2+输入线粒体的速率提高，而 Ca2+输出的速率维持不变，这样导致线粒体基质 Ca2+浓度的升高而胞质溶胶中 Ca2+浓度下降到原始的浓度水平。

反之，胞质溶胶中 Ca2+浓度的下降，促使线粒体对 Ca2+输入速率的下降，而只有线粒体 Ca2+的输出速率不变，最后导致胞质溶胶中Ca2+浓度恢复到一个设定点 (set-point)6. 比较引导序列与信号序列有什么不同? 答: 无论是在游离核糖体合成的蛋白质还是在膜结合核糖体合成的蛋白质，它们的转运都是由信号引导的，这种信号一般存在于蛋白质的 N-端，这就是蛋白质的定位信号由于游离核糖体合成的蛋白质与膜结合核糖体合成的蛋白质的运输信号不同导致运输机制的不同，为了便于区别它们，将游离核糖体上合成的蛋白质的 N-端信号统称为导向信号(targeting signal)，或导向序列(targeting sequence)，由于这一段序列是氨基酸组成的肽，所以又称为转运肽(transit peptide)，或导肽(leading peptide)将膜结合核糖体上合成的蛋白质的 N-端的序列称为信号序列(signal sequence)，将组成该序列的肽称为信号肽（signal peptide） 在不需要特别区分时，可将它们统称为信号序列或信号肽虽然转运到细胞核中的蛋白质也是在游离核糖体上合成的，由于此类蛋白的运输机制特别，所以将这些蛋白中的定位引导序列称为核定位信号(nuclear localization signal， NLS)。

7. 线粒体基质蛋白是如何定位的? 答: 定位过程是: 前体蛋白在游离核糖体合成释放之后，在细胞质分子伴侣Hsp70 的帮助下解折叠,然后通过 N-端的转运肽同线粒体外膜上的受体蛋白识别,并在受体(或附近) 的内外膜接触点(contact site)处利用 ATP 水解产生的能量驱动前体蛋白进入转运蛋白(protein translocator)的运输通道,然后由电化学梯度驱动穿过内膜,进入线粒体基质在基质中, 由线粒体分子伴侣 Hsp70(mHsp70)继续维持前体蛋白的解折叠状态接着在 Hsp60 的帮助下,前体蛋白进行正确折叠,最后由转运肽酶切除导向序列,成为成熟的线粒体基质蛋白8. 从线粒体基质蛋白质的定位,可看出导肽在转运蛋白时具有哪些特点? 答: 线粒体转运肽转运蛋白质时，具有以下特点: ①需要受体由于被转运的蛋白质需要穿过(或插入) 线粒体膜,转运肽首先需要与线粒体膜上的受体识别,然后才能进行转运②从接触点进入 线粒体的内外膜要局部融合形成被运输蛋白进入的接触点(contact site)③蛋白质要解折叠 蛋白质在合成时为了防止降解，需要立即折叠形成空间结构，但是在转运时，必须解折叠，运入线粒体之后再重新折叠，④需要能量 转运肽引导的蛋白质转运是一个耗能过程，既要消耗ATP，又要膜电位的驱动。

⑤需要转运肽酶由于转运肽只是起蛋白质转运的引导作用，而非蛋白质的永久结构，所以，当蛋白质到达目的地后，转运肽要被切除，是由转运肽酶(transit peptidase)催化的⑥需要分子伴侣的帮助粒体蛋白的转运过程中,至少需要两种类型的分子伴侣的参与,一种是帮助转运的蛋白质解折叠,另一种是将转运的蛋白质重新折叠9. 葡萄糖在胞质溶胶中进行糖酵解时形成的 1 分子 NADH 是怎样被氧化的? 答: 葡萄糖在胞质溶胶中进行糖酵解时形成 1 分子 NADH, 由于胞质溶胶中形成的 NADH 自身不能进入线粒体,但可通过另外的方式将其电子转移到线粒体并参与电子传递:将电子还原那些小分子的代谢物, 这些小分子的代谢物能够: ①通过苹果酸-天冬氨酸穿梭(malate-aspartate shuttle)进入线粒体,然后将线粒体中NAD+还原成 NADH；②通过甘油磷酸穿梭(glycerol-phosphate shuttle),将电子传递给线粒体的 FAD,使其还原形成 FADH2这些被还原的辅酶通过线粒体内膜的电子传递链最后被传给氧如在甘油-磷酸穿梭过程中,电子从 NADH 转移给二羟丙酮磷酸（DHAP）生成甘油-3-磷酸, 甘油-3- 磷酸进入线粒体膜间隙后被线粒体内膜中的甘油 3-磷酸脱氢酶脱氢,将内膜中 F。