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细胞染色专题之一：台盼蓝台盼蓝（Trypan Blue，也称Direct blue 14）： 一种死细胞染色用色素 化学名：3,3'-{[3,3'-Dimethyl（1,1'-biphenyl）-4,4'-diyl]bis（azo）}bis（5-amin o-4-hydroxy-2,7-naphthalenedisulfonic acid）, tetrasodiumsalt3,3' -{[3,3'-二甲基-（1,1'-二苯基）-4,4'-二基]双（偶氮）}-双（5-氨 基-4-羟基-2,7-萘二磺酸），四钠盐分子式：C34H24N6Na4014S4 分子量：960.81CAS Number： 72-57-1 外观：黑褐色结晶粉末摩尔吸光度：＞69,000（在606nm附近）染色原理：细胞损伤或死亡时，台盼蓝可穿透变性的细胞膜，与解体的 DNA 结合，使 其着色而活细胞能阻止染料进入细胞内故可以鉴别死细胞与活细胞严格来 说，台盼蓝染色检测的是细胞膜的完整性， 通常认为细胞膜丧失完整性，即可 认为细胞已经死亡这被称为染料排除测试（dye exclusion），ErythrosinB（红 色）、negrosine、eosin Y、AO和EB也用于此目的。

通过显微镜很容易就能识 别出死亡的被台盼蓝染色的细胞，并可使用细胞计数器进行计数溶于水，可以配制成10mg/ml的水溶液，水溶液呈深蓝色台盼蓝主要用来鉴定原代培养细胞时,细胞分离后的存活情况，用0.4%台盼 蓝直接染色5-10分钟，在显微镜下观察即可应用于细胞凋亡：如果细胞膜不完整、破裂，台盼蓝染料进入细胞，细胞变蓝，即为坏死如 果细胞膜完整，细胞不为台盼蓝染色，则为正常细胞或凋亡细胞尽管在凋亡的 早期到中期检测是很困难的，此方法对反映细胞膜的完整性，区别坏死细胞有一 定的帮助储存条件：常温保存注意事项：1. 台盼蓝对人体有毒2. 台盼蓝染细胞时，时间不宜过长否则，部分活细胞也会着色，会干扰计数3. 台盼蓝染色法对于悬浮细胞来说，还比较方便，对贴壁细胞来说，较为繁琐 因为要消化，有时，96 孔板不一定能消化干净而且，该法是测定细胞浓度的 方法，与细胞悬液的体积有关，加入的胰蛋白酶或1640要计入终体积可以说， 该法相对准确，可能有一些人为因素的干扰细胞染色专题之二：美蓝美蓝英文名： Methylene blue，Swiss blue 中文名：亚甲基蓝、次甲基蓝、品蓝、美蓝、亚甲蓝、四甲基蓝、盐基湖蓝、碱 性亚甲天蓝等。

分子式：C16H18ClN3S分子量：319.85 g/molCAS Number：61-73-4EINECS Number： 200-515-2熔点：100 °C沸点：分解吸收峰：668nm和609nm染色原理：美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色用美蓝对酵母 活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能 使 美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原 能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色因此，不仅用此法可观察酵 母 细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞细胞染色专题之三：吖啶橙吖丫啶橙：N,N,N',N'-tetramethylacridine-3,6-diamine 中文名：3,6-双（二甲基氨基）吖啶英文名： AcridineOrange（ AO），Euchrysine，3,6-Acridinediamine，Waxoline Orange A，Acridine Orange Base，Solvent Orange 15，Rhoduline Orange， Rhoduline Orange N，Acridine Orange NO，Rhoduline Orange NO，Basic Orange 分子式：C17H19N3分子量：265.35 g/molCAS number：10127-02-3 外观：橙色、红棕色粉末 染色原理：吖丫啶橙（AO）与双链DNA形成发绿色荧光的复合物。

AO还可与单链DAN或 RNA形成发红色荧光 的复合物一个AO分子嵌入双链DNA的三个碱基对并发出 最大波长为526nm （激发502nm）的绿色荧光一个AO分子与单链DNA或RNA 的一个磷 酸基相互作用形成聚集或堆叠的结构，此结构发出最大波长为 650nm （激发460nm）的红色荧光因此，AO用于被利用来检测双链DNA和单链DNA 或RNA它使得用氩激光激发器或流式细胞仪同时测定DNA和RNA成为可能 光谱数据：与DNA作用时和荧光素相似，激发最大波长502nm,发射最大525nm（绿光） 于RNA作用时，激发最大波长移动到460nm （蓝光）,发射最大移动到650nm （红 光）染色程序：1. 用PBS或合适缓冲液制备10-50 口 M AO溶液a）2. 将1/10细胞培养基体积的AO溶液加入细胞培养基中b）3. 37C下孵育细胞10-20分钟4. 用PBS或合适缓冲液洗涤细胞2次5. 用带有500nm激发和530nm发射滤光片的荧光显微镜观察细胞a) 由于AO可能具有致癌性，因此操作过程中须格外小心b) 可以用1/10浓度的AO缓冲液代替培养基 储存条件：避光, 冷藏保存细胞染色专题之四：碘化丙啶碘化丙啶 英文名： Propidium iodide, Propidium diiodide; PI 分子式：C27H34I2N4分子量：668.39 外观：红棕色粉末 应用：DNA染色 染色原理：碘化丙啶(PI)是一种溴化乙啶的类似物，它在嵌入双链DNA后释放红色荧 光。

尽管PI不能通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色PI经常 被用 来与Calcein-AM或者FDA等荧光化合物一起使用，能同时对活细胞和死细 胞染色光谱性质：PI-DNA复合物的激发和发射波长分别为535nm和615nm 染色过程：1. 用PBS或适当的缓冲液制备10〜50 口 M的PI溶液a)2. 将1/10培养基体积的PI溶液加入到细胞培养基中b)3. 在37°C培养细胞10-20分钟4. 用PBS或合适的缓冲液洗涤细胞两次5. 用535nm激发波长，615nm发射波长的滤光器的荧光显微镜观察细胞a) 由于PI可能具有致癌性，请小心操作b) 也可以用1/10浓度的PI缓冲液代替培养基 保存条件：4C避光保存对人体有刺激性，请注意适当防护细胞染色专题之五：罗丹明123罗丹明 123： Rhodamine 123 分子式：C21H17C1N2O3 分子量：381外观：橙红色、红棕色固体/粉末溶解性：可溶于DMS0CAS Number：62669-70-9 染色原理：Rh 123是一种细胞通透性的、阳离子的荧光探针，容易被有活性的线粒体 摄取，没有细胞毒性°Rhl23透过细胞膜在活细胞的线粒体内聚集，发出黄绿色 荧光，可用于对许多种细胞进行染色，包括植物细胞和细菌。

由于细胞内 ATP 的量与Rhl23的荧光强度之间有相关性，此化合物被应用于检测细胞内的ATP Rhl23还用于癌症研究光谱性质：lex\l em (MeOH) = 505nm\534nm. e (505 nm, MeOH) = 97,000. 染色步骤：1. 将 0.4mg Rh123 溶解到 1ml DMSO 中制备成 1mM Rhl23-DMSO 溶液2. 用载玻片准备细胞细胞数目应为5X10e4 - 5X10e5个/ml3•孵育该载玻片，用PBS或Hank's液洗涤细胞4. 用培养基稀释1mM Rh123溶液以制备1-20 口 M Rh123缓冲液5. 将Rh123缓冲液a)加入载玻片并在37°C下孵育30分钟至1小时6. 去除Rh123缓冲液并用培养基洗涤细胞b)7. 用带有荧光素滤光片的荧光显微镜观察细胞a) 加入细胞前将Rh123缓冲液放在37C下孵育b) 洗涤细胞后为了固定，加入10%福尔马林缓冲液并孵育15-20分钟，接着用 PBS洗涤储存条件：避光冷藏保存细胞染色专题之六：溴乙锭溴乙锭：Ethidium bromide 化学名：溴化3,8-二氨基-5-乙基-6-苯基啡啶 英文名： 2,7-Diamino-10-ethyl-6-phenylphenanthridinium bromide ，2.7- Diamino-10-ethyl-9-phenylphenanthridinium bromide ，3.8- Diamino-1-ethyl-6-phenylphenantridinium bromide ，3.8- Diamino-5-ethyl-6-phenylphenanthridiniumbromide，Homidiumbromide， EB，EtBr别名：胡溴胺;溴乙胺菲啶;溴乙菲啶分子式：C21H20BrN3 分子量：394.31 g/molCAS number：1239-45-8熔点：260 - 262C(from wiki)性质：从酒精中结晶的是具苦味的深红晶体，熔点238〜240°C； 20°C时溶于20份 水和750份氯仿。

染色原理：EB不能穿过活细胞的细胞膜，然而可以通过死细胞破损的细胞膜而对细胞 核DNA染色EB含有一个可以嵌入的堆积碱基之间的一个平面基团，这个基团 的固定位置及其与碱基的密切接近，导致染料与 DNA 结合并呈现荧光，由于 EB-DNA复合物的荧光产率远大于未结合染料的荧光产率，所以当电泳凝胶中含 有游离EB时，也可检测出少量DNA它是一种高灵敏的荧光试剂，也是一种重 要的荧光染料，常用于检测DNA和RNAEB与DNA结合后 抑制DNA的复制和转 录光谱性质：EB-DNA复合物的激发波长和发射波长分别为518nm和605nm 染色过程：1. 用PBS或合适的缓冲液制备10-50 口 M EB溶液a)2. 将1/10培养基体积的EB溶液加入细胞培养基中b)3. 37C下孵育细胞10-20分钟4. 用PBS或合适的缓冲液洗涤细胞两次5. 用带有515nm激发波长和600nm发射波长的滤光片的荧光显微镜观察细胞a) 由于EB可能有致癌性，操作时须十分小心b) 可以用1/10浓度的EB缓冲液代替培养基储存条件：避光, 冷冻保存细胞染色专题之七：曙红Y曙红： Eosin Y 中文名：水溶伊红；四溴荧光黄；朝红；四溴荧光素钠；曙红钠盐；曙红,水溶 性；黄光曙红英文名： Eosine Yellowish，Bromoeosine，Tetrabromofluorescein C.I. name： Acid red 87分子式： C20H6O5Br4Na2分子量： 691.9，性质：以AgNO3滴定Br-，I-，SCN-等时用作吸附指示剂。

CAS Number: 17372-87-1MDL number：MFCD00005040Colour Index Number：45380光谱性质：最大吸收524.8 nm；最大激发490 nm染色原理：Eosin Y 为酸性染料，将胞质染成粉红色（嗜酸性），是组织和细胞化学常 用染色试剂之一，常与苏木精（hematoxylin,为碱性染料，将核染成紫蓝色（嗜 碱性））联合使用（HE染色法）在免疫组织化学实验中，常作为衬染试剂以便 于组织和细胞结构的观察存储条件：室温避光保存细胞染色专题之八：苏木精苏木精 Hema。