孙老师--药品质量标准分析方法验证.ppt

药品质量标准分析方法验证天津市药品检验所化学室 孙悦 2012.12l概述l方法验证的一般原则l涉及的三个主要方面l方法验证具体内容l方法再验证l方法验证的评价l应用实例概述l分析方法验证的目的Ø对药品进行质量控制是保证药品安全、有效 的基础和前提Ø多角度多层面来控制药品质量Ø保证用药安全、有效、质量可控概述l分析方法验证的作用Ø分析方法验证是质量研究和质量控制的重要 组成部分Ø分析方法验证的本质-证明自己概述l需要进行验证的情况Ø建立药品质量标准时Ø药品生产工艺变更Ø制剂组分变更方法验证的一般原则l原则上每个检验项目均需要进行方法验证l实际操作上应根据检测项目的要求，结合所 采用的分析方法的特点确定l同一分析方法用于不同的检验项目会有不同的验证要求方法验证涉及的三个主要方面l需要验证的检测项目Ø检测项目定义：为控制药品质量，保证药品 安全有效而设定的测试项目 分类 鉴别杂质检查（限度试验、定量试验）定量测定（含量测定、溶出度、释放度等）其他特定检测项目：粒径分布、旋光度等方法验证涉及的三个主要方面l分析方法Ø分析方法原理Ø仪器及仪器参数、试剂、系统适用性试验等Ø供试品溶液制备、对照品溶液制备、测定、计算。

Ø测试结果的报告方法验证涉及的三个主要方面l验证内容Ø专属性Ø线形、范围、准确度、精密度Ø检测限、定量限、耐用性Ø系统适用性试验等方法验证的具体内容l专属性Ø定义：系指在其他成分（如杂质、降解物、 辅料等）可能存在下，采用的分析方法能够正 确鉴定、检出被分析物质的特性Ø需要考察专属性的的项目：鉴别杂质检查含量测定方法验证的具体内容l专属性 鉴别反应鉴别试验应确证被分析物符合其特征专属性 试验要求证明能与可能共存的物质或结构相似 化合物区分，需确证含被分析物的供试品呈正 反应，而不含被测成分的阴性对照呈负反应， 结构相似或组分中的有关化合物也应呈负反应 方法验证的具体内容l专属性 杂质检查Ø为何要作专属性-作为纯度检查，所采用的分析方法应确保可检出被 分析物中杂质的含量Ø试验方法 杂质可获得的情况下-向供试品中加入一定量的杂质在杂质不能获得的情况下 - 采用另一种合理但分离或检测原理不同的方法将供试品破坏后与破坏前比较方法验证的具体内容l专属性 含量测定Ø含量测定目的-得到供试品中被分析物的含量或效价的准确结果。

Ø试验方法 杂质可获得的情况下-向供试品中加入一定量的杂质在杂质不能获得的情况下 - 采用另一种合理但分离或检测原理不同 的方法将供试品破坏后与破坏前比较，必要时进行色谱纯度检查方法验证的具体内容l线性Ø定义：系指在设计的测量范围内，检品结果与供试品 中被分析物的浓度（量）直接呈线性关系的程度Ø特点：线性是定量测定的基础，凡涉及定量测定的项 目均需要验证线性Ø试验方法：应在设计的 测定范围 内测定线性 关系分别精密称样，制备一系列被测物质浓度系列进行测定至少制备5个浓度以测得的响应信号作为被测物浓度的函数作图，观察是否呈线性用最小二乘法进行线性回归方法验证的具体内容l范围Ø定义：系指能够达到一定的准确度、精密度和线性，测 试方法适用的试样中被分析物高低限浓度或量的区间Ø特点：范围是规定值，在试验研究开始前应确定验证的 范围和试验方法Ø试验方法：可采用符合要求的原料药配制成不同的浓度 ，按照相应的测定方法进行试验方法验证的具体内容Ø不同项目范围的确定-原则上应根据分析方法的具体应用和 线性、准确度、精密度结果和要求确定•含量测定：应为测试浓度的80%～120%•制剂含量均匀度：应为测试浓度的70%～130%。

•溶出度：范围为限度的±20%，如规定限度范围，则应为下限 的-20%至上限的+20%•释放度：如规定限度范围为，从1小时后为20%至24小时后为 90%，则验证范围为 0%～110%•杂质：范围应根据初步实测结果，拟定出规定限度的+20%方法验证的具体内容l准确度Ø定义：系指用该方法测定的结果与真实值或认可的参 考值之间的接近程度，有时也称真实度一般用回收率 （%）表示Ø特点：是定量测定的必要条件，因此涉及到定量测定 的检测项目均需要验证准确度Ø试验方法：一般制备3个不同浓度的试样，各测定3 次，共9次，报告已知加入量的回收率或测定结果平均 值与真实值之差及其可信限方法验证的具体内容l需要进行准确度验证的项目Ø含量测定： 原料药：使用已知纯度的对照品或符 合要求的原料药 进行测定；或用本法测定结果与已建立准确度的另一方 法的测定结果进行比较制剂：可用含已知量被测物的各组分混合物进行测定 如不能得到制剂的全部组分，可向制剂中加入已知量的 被测物进行测定，必要时与已建立准确度的方法比较结 果方法验证的具体内容Ø杂质定量试验可向原料药或制剂中加入已知量杂质进行测定 与另一成熟的方法进行比较。

相对响应因子问题：如果不能得到，可采用二极管阵列 检测器测定紫外光谱，当杂质的光谱与主成分相似，则 可采用原料药的响应因子近似计算杂质含量（自身对照 法）应明确表明单个杂质和杂质总量相当于主成分的重量比 或面积比方法验证的具体内容l精密度Ø定义：系指在规定的测试条件下，同一均质供试品， 经多次取样进行一系列检测所得结果之间的接近程度（ 离散程度）Ø表示方式：偏差、标准偏差、相对标准偏差Ø三个考察层次：重复性、中间精密度、重现性方法验证的具体内容Ø重复性Ø定义：系指在同样的操作条件下，在较短时间间隔内 ，由同一分析人员测定所得结果的精密度Ø测定方法：在规定范围内，至少用9次测定结果进行 评价，如制备3个不同浓度的试样，各测定3次，或 100%的浓度水平，用至少测定6次的结果进行评价方法验证的具体内容Ø中间精密度Ø定义：系指在同一实验室，由于实验室内部条件改变 ，如时间、分析人员、仪器设备、测定结果的精密度Ø变动因素：验证设计方案中的变动因素一般为日期 、分析人员、设备方法验证的具体内容Ø重现性Ø定义：系指不同实验室之间不同分析人员测定结果的 精密度Ø变动因素：验证设计方案中的变动因素一般为日期、 分析人员、设备。

方法验证的具体内容l检测限：Ø定义：系指试样中的被分析物能够被检测到的最低量（但不一定要准确定量）Ø验证意义：考察方法是否具备灵敏的检测能力因 此对杂质限度试验，需证明方法具有足够低的检测限， 以保证检出需控制的杂质Ø两种方法：直观法、信噪比法方法验证的具体内容l直观法直观评价可以用于非仪器分析方法，也可用于仪器分 析方法检测限的测定是通过对一系列已知浓度被测物 的试样进行分析，并以能准确、可靠检测被测物的最小 量或最低浓度来建立方法验证的具体内容l信噪比法用于能显示基线噪音的分析方法，即把已知浓度试样 测出的信号与噪声信号进行比较，计算可检出的最低浓 度或量一般以信噪比为3：1时相应的浓度或注入仪器 的量确定检测限l其他方法：基于工作曲线的斜率和响应的标准偏差 进行计算的方法等l注意事项：无论用何种方法，均应用一定数量的试 样，其浓度为近于或等于检测限，进行分析，以可靠地 测定检测限l数据要求：应附测试图谱，说明测试过程和检测限 结果方法验证的具体内容l定量限Ø定义：系指试样中的被分析物能够被定量测定的最低 量，其测定结果应具有一定的准确度和精密度Ø特点：定量限体现了分析方法是否具备灵敏的定量检 测能力。

杂质定量试验，需考察方法的定量限，以保 证含量很少的杂质能够被准确检出一般以信噪比10 ：1时相应的浓度或注入仪器的量进行确定方法验证的具体内容l方法Ø直观法：可用于非仪器分析方法，也可用于仪器分 析方法定量限一般同过对一系列含有已知浓度被测物 的试样进行分析，在准确度和精密度都符合要求的情况 下，来确定被测物能被定量的最小量方法验证的具体内容Ø信噪比法：用于能显示基线噪音的分析方法，即把 已知浓度试样测出的信号与噪声信号进行比较，计算可 检出的最低浓度或量一般以信噪比为10：1 Ø其他方法：基于工作曲线的斜率和响应的标准偏差进 行计算的方法等Ø注意事项：无论用何种方法，均应用一定数量的试样 ，其浓度为近于或等于定量限，进行分析，以可靠地测 定定量限方法验证的具体内容l耐用性Ø定义：系指测定条件发生小的变动时，测定结果不受 影响的承受程度Ø特点：耐用性主要考察方法本身对于可变试验因素的 抗干扰能力（如测试条件要求苛刻，则建议在方法中予 以说明）Ø典型变动因素：液相色谱的流动相组成、流速、pH 值、色谱柱、柱温等；气相色谱中载气及流速、色谱柱 、固定相、担体、柱温、进样口和检测器温度方法验证的具体内容l系统使用性试验Ø定义：对一些仪器分析方法，在进行方法验证时，有 必要将分析设备、电子仪器与实验操作、测试样品等一 起当作完整的系统进行评估。

系统适用性便是对整个系 统进行评估的指标Ø特点：系统适用性试验参数的设置需根据被验证方法 类型而定色谱方法对分析设备、电子仪器的依赖程度 较高，因此所有色谱方法均应进行该指标验证，并将系 统适用性作为分析方法的组成部分具体验证参数和方 法参考中国药典有关规定 方法再验证l定义：在某些情况下，如原料药合成工艺改变、制 剂处方改变、分析方法发生部分改变等，均有必要对分 析方法再次进行全面或部分验证，以保证分析方法可靠 ，这一过程称为方法再验证 l原则：根据改变的程度进行相应的再验证，从而保证 所采用的分析方法能够控制药品的内在质量 方法再验证l需要进行再验证的情况Ø当原料药合成工艺发生改变时Ø当制剂的处方组成改变、辅料变更时Ø当质量标准中某一项目分析方法发生部分改 变时Ø其他：例：已有国家标准的药品质量研究中，基于申 报的原料药合成工艺、制剂处方中的辅料等一般无法保 证与已上市药品的一致性，需对质量标准中部分项目进 行方法的再验证 方法再验证的评价l有关方法验证评价的一般考虑 l方法验证的整体性和系统性 。