黑鲷（acanthopagrus+schlegeli）幼鱼对氨氮胁迫的生理响应及其维生素c的营养需求研究.pdf

华东师范大学 硕士学位论文 黑鲷（Acanthopagrus schlegeli）幼鱼对氨氮胁迫的生理响应 及其维生素C的营养需求研究 姓名：龙章强 申请学位级别：硕士 专业：动物学 指导教师：陈立侨 20080501 学位论文独创性声明 本人所呈交的学位论文是我在导师的指导下进行的研究工作及 取得的研究成果据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文 不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果对本文的研究做出重 要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确说明并表示谢意． 作者戥学 学位论文授权使用声明 本人完全了解华东师范大学有关保留、使用学位论文的规定，学 校有权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电 子版和纸质版有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论 文进入学校图书馆被查阅有权将学位论文的内容编入有关数据库进 行检索有权将学位论文的标题和摘要汇编出版．保密的学位论文在 解密后适用本规定． 学位论文作者签名：麟骸 日期：婴星丝 导师 日期： 姊：∞’ 力怜n QfI ，一 ～ p ’l j 华东师范大学2 0 0 8 届硕士学位论文 黑鲷( A c a n t h o p a g r u ss c h l e g e l i ) 幼鱼对氨氮胁迫的生理响应 及其维生素C 的营养需求研究 中文摘要 1 氨氮对黑鲷稚鱼、幼鱼的急性毒性研究 在水温2 5 ℃，盐度2 8 ，p H8 ．1 的室内养殖水体中分别对黑鲷( A c a n t h o p a g r u s s c h l e g e l O 稚鱼( 1 ．0 - a = 0 ．2 9 ) 和幼鱼( 3 0 ．0 士2 ．0 9 ) 进行了氨氮的急性毒性试验，试验用 N H 4 C 1 来调节氨氮浓度，正式试验前分别对黑鲷稚鱼和幼鱼进行了毒性预试验， 分别以2 4 小时未见死亡组和全部死亡组的浓度为最小浓度和最大浓度，随后以 等对数间距设计正式试验的氨氮浓度。

对稚鱼的氨氮浓度设定为：0 ，2 0 ．0m g ／L ， 2 6 ．0m g m ，3 3 ．8m g m ，4 3 ．9 4m g ／L ，5 7 ．1 2r a g ／L ：幼鱼的氨氮浓度为：0 ，3 0 ．0m g ／L ， 3 4 ．5m g ／L ，3 9 ．7m g ／L ，4 5 ．6m g ／L ，5 2 ．5m g ／L 结果表明，稚鱼的2 4 h L C s o 、4 8 h L C 5 0 、 7 2 h L C s o 、9 6 h L C s o 分别为：2 ．4 3 m g ／L 、2 ．0 9 m g ／L 、1 ．9 0 m g ／L 、1 ．7 4 m g ／L 非离子氨 ( N H 3 - N ) ，安全浓度为O ．1 7 4 m g ／LN H 3 - N 幼鱼的2 4 h L C 5 0 、4 8 h L C s o 、7 2 h L C 5 0 、 9 6 h L C 5 0 分别为：3 ．1 0 m g ／L 、2 ．4 7 m g ／L 、2 ．1 5 m g ／L 、1 ．9 9 m g ／L ；l l z 离子( N H 3 - N ) ，安 全浓度为O ．1 9 9 m g ／L N H 3 - N 。

结论，从氨氮对黑鲷稚鱼、幼鱼的L C s o 来分析，黑 鲷稚鱼、幼鱼对氨氮有较高的耐受性 2 急性氨氮胁迫对黑鲷幼鱼皮质醇、血糖及乳酸含量的影响 在水温为2 5 ℃，设计了0 、1 0 、2 0 m g ／L 总氨( 即非离子氨为0 、0 ．6 7 、1 ．3 3 m g ／L ) 的三个氨氮处理，对黑鲷( 体重为2 8 ．0 士2 ．0 9 ) 进行9 6 h 的急性胁迫试验，分别 于0 、6 、1 2 、2 4 、4 8 和9 6 h 取血样，离心取血清进行测定皮质醇、血糖及乳酸 水平的变化结果显示，对照组在9 6 h 内无明显上升或下降的趋势，1 0 m g ／L 和 2 0 m g ／L 氨氮组的皮质醇均在6 h 时出现最大值，分别为6 5 ．0 7 n g ／m l 和7 0 ．9 7 n g ／m l ， 均与对照组有显著性差异( 尹 0 ．0 5 ) 从试验的结果来看，9 6 h 时，各氨氮处理组基本恢复到 正常水平 毛 羞 蟋 划 8 0 ．0 0 061 22 44 8 9 6 氨氮暴露时间∞ A n m o n i ae x p o a r et k n e ’ 图1 氨氮胁迫对黑鲷幼鱼血清中皮质醇水平的影响 F 逗．1T h ee f f e c t so f a m m o n i as 仃e s s0 1 1 $ e F U l l le o r t i s o ll e v e lo f j u v e n i l eb l a c ks e a b r e a m ‘ 注：图上同一氨氮水平下不同的小写字母表示有显著性差异( 尸 7 m g ／L ，每曰换水1 0 0 ％，按体重的 3 ％g 于每天8 ：0 0 和1 6 ：0 0 投喂饲料，1 小时后进行吸污换水。

1 ．4 样品采集 养殖试验结束后，每个组进行全部称重，以便计算饲料系数等，每个组取6 条经M S ．2 2 2 麻醉后做为全鱼样品分析另外，每个组取1 2 条鱼以M S ．2 2 2 麻醉 后，进行个体称重，并测量体长，然后进行解剖，取肝脏，并对肝脏称重样品 保存于．7 0 ℃冰箱以待分析 1 ．5 生长指标与样品分析 黑鲷的生长指标按以下公式计算： 特定生长率S G R = 1 0 0 ( I n W t ．1 n W i ) ／t 增重率W G R = ( W t ．w i ) ／V i i 10 0 ％ 成活率( 哟= 未尾数／初尾数1 0 0 ％ 鱼体肝体指数H S I = 肝脏重量／鱼体重l o o ％ 饲料系数F C R = 饲料消耗量／增重 天后各组鱼总重( g ) W i 一初始各组鱼总重( g ) t 一饲养天数( d ) I H 天后鱼的总数 全鱼的组织常规成分粗蛋白、粗脂肪、水分及灰分的测定参照A O A C ( 1 9 9 5 ) 规定的方法水分在1 0 5 “ C 烘箱中烘至恒重：粗蛋白质采用凯氏定氮法( 6 ．2 5 如： 粗脂肪采用索氏抽提法进行测定；灰分是在电炉上完全碳化后，5 5 0 ℃马福炉中 灼烧1 2 h 后测定。

饲料中V C 的测定根据周玉岩( 2 0 0 4 ) 进行，其原理是：饲料中的维生素C 被提取后，与固兰盐B ( F a s tB l u eS a l tB ，F B S B ) 反应生成黄色的草酰肼一2 0 ．羟基丁 酰内酯衍生物，共存的脱氧抗坏血酸，糖类，有机酸，醇类，饲料添加剂，蛋白 质，氨基酸，肌醇和多种维生素增色无干扰，如色素影响可用减差法消除( 张文 德，王阶标，1 9 9 6 ) 肝脏中V C 的采用剂盒( 南京建成) 进行测定，其原理是为，用F e 3 + 与还原型 华东师范大学2 0 0 8 届硕士学位论文 抗坏血酸迅速作用生成F e 2 + ，后者再与啡罗啉显色反应，可以测定组织中维生素 C 的含量 超氧化物歧化酶( S O D ) 活性测定采用丁秀云等( 1 9 9 6 ) 的连苯三酚自氧化 法内径l c m 比色杯中分别加入1 0 I - t L 反应液( 连苯三酚2 0 m M ) ，1 0 I _ t L 粗酶液和 磷酸缓冲液( 0 ．0 5 Mp H 8 ．3 2 ) ，在3 2 0 r i m 下每隔1 5 s 记录吸光值，连续读数9 0 s 并以l O p ．L 反应液混合磷酸缓冲液测定连苯三酚自氧化速率，自氧化速率控制在 0 ．0 6 0 Am i n “ 1 左右。

酶活单位定义：每毫克蛋白每分钟抑制连苯三酚自氧化速率达5 0 ％的酶量定 义为一个酶活单位，以U 表示 S O D 活力( U ) = [ ( O D 0 - - O D l ) ／O D 0 ／5 0 ％] x 1 0 0 ％x R ／( S x V O 式中，O D 0 为连苯三酚自氧化1 r a i n 内下降的吸光度；O D l 为待测样l m i n 内下降的吸光度；R 为反应总体积( 止) ；S 为待测样品体积( 皿) ；W 为蛋白质含 量( m g ) 过氧化氢酶( C A T ) 活力的测定依据M a r k s 等的方法进行．酶活力单位定义：每 克蛋白质每秒钟分解底物过氧化氢的相对量定义为1 个酶活力单位( I 功酶活力 按下式计算：C A T 酶活力= I n ( O D I ／O D 2 ) ( 2 ．3 0 3 x 样液稀释倍数／( 6 0 样液蛋白 质含量) 1 ．6 数据分析 数据结果以平均值4 - 标准误( m e a n 士S E ) 表示，试验结果用S P S S l l ．0 软件包进 行统计与分析，采用单因素方差分析，用D u n c a n 检验进行多重比较，P 0 ．0 5 ) 。

对照组的黑鲷幼鱼增重率( W G R ) 中最低，为1 8 2 ．5 1 ％随着维生素C 含量 的增加，黑鲷幼鱼的W G R 呈上升趋势，各组与对照组呈显著性差异俨 0 ．0 5 ) 黑鲷的特殊生长率( S G R ) 的趋势与W G R 相似，即对照组的黑鲷幼鱼的S G R 最低，随着饲料中维生素C 的增加，黑鲷幼鱼的S G R 也增加，然后趋于稳定， 当饲料中的维生素C 的添加为2 0 0 m g ／k g 时，黑鲷的S G R 达到最大值1 ．9 4 ％，与 对照组呈显著性差异( P 0 ．0 5 ) 饲料系数的变化趋势与W G R 与S G R 相反，最小的饲料系数出现在 2 0 0 m g ／k g 饲料组 黑鲷幼鱼的肝体指数( H S I ) 随着饲料中维生素C 的增加有先下降后上升的 华东师范大学2 0 0 8 届硕士学位论文 趋势但各饲料黑鲷幼体之间的肝体指数无显著性差异 黑鲷的肥满度并没有随维生素C 含量的增加而有规律地变化，但对照组的肥 满度( C F ) 最小，而其它的添加组均比对照组高，与对照组呈显著性差异 ( 砌．0 5 ) 但有添加了维生素C 的各组之间没有显有显著性差异。

表8 维生素C 对黑鲷幼鱼成活率、增重率、特定生长率、肝体指数及饲料系数的影响 T a b e l8t h eE f f e c to f V i t a m i nC o ns u r v i v a l ，W G R , S G R , H I Sa n di c eo f j u v e n i l eb l a c ks e a b r e a m 注：同一列数字上标识的不同字母表示有显著性差异妒 0 ．0 5 ) ． N o t e ．．W i t h i nt h es 锄ec o l u m n ，v a l u e sw i t hd i f f e r e n ts u p e r s c r i p t sa r es i g n i f i c a n t l yd i f f e r e n t ( P 0 ．0 5 ) ． 2 ．3 维生素C 对黑鲷幼鱼全鱼常规营养成分含量的影响 表9 是维生素C 对黑鲷幼鱼全鱼常规营养成分含量的影响，投喂8 周后的各 试验组黑鲷的全鱼常规成分粗蛋白、粗脂肪、粗灰分及水分在各饲料组之间均无 显著性差异粗蛋白的含量在1 2 ．8 3 ％, - - 1 3 ．6 1 ％之间，粗脂肪含量在4 ．2 4 ％- - - 4 ．5 0 ％ 之间，水分含量在7 5 ．3 7 ％, - - - 7 6 ．8 1 ％之间，粗灰分含量在5 ．0 5 ％- - , 5 ．2 7 ％之间。

表9 维生素C 对黑鲷幼鱼全鱼常规营养成分含量的影响( ％，湿重) T a b ．9E 胁o fv i t a m i nCo np r o。