就是先做一个菌液浓度与OD值的标准曲线(共3页).doc

精选优质文档-----倾情为你奉上就是先做一个菌液浓度与OD值的标准曲线，以后测OD值的话，直接根据标准曲线就知道菌液浓度了波长的确定，可以拿你的菌液扫个谱，找出吸收峰一般细菌600nm，但也不一定菌液浓度可以取一定体积的菌液，离心收集菌体，测菌体干重或者涂板计数，也可以用血球计数板计数（不提倡用）如果测细菌简单说来在细菌培养24小时内每4小时或者其他时间取样品，用LB平板测定活细菌数量，同时测定培养液的OD 值等细菌长出后根基细菌数量和相应OD知理论上就可以做成标准直线了在以后的试验中，你可以据此，直接得出细菌数，通过OD直线但不是所以的微生物都有这种对应关系原理：比浊法测菌体浓度：在菌体浓度小时，菌体量（g／L）与光密度OD值成正比用得最多的就是505nm测菌丝菌体、560nm测酵母、600nm测细菌具体的g/L和OD之间好像没有具体的数量对应关系，这个恐怕要凭感觉1， 测OD600以你所用的培养基为对照，取1毫升菌液稀释一下，取三组连续的剃度测；2，稀释涂平板法，取出1毫升菌液稀释一下，取三到五组连续的剃度，涂到相应的固体培养基上，12小时后数菌落数1. 使用OD600表示，则可以使用比浊法，使用分光光度计，波长600nm，参比可以是水也可以是无菌培养基。

2. 使用称量法，10000rpm 离心1min（in EP中 取1ml菌液），弃尽上清，称菌湿重，烘干后则称干重，单位是mg/ml3. 使用细菌计数板，显微镜镜检菌数，单位是个/ml1. 测OD600?每种菌的OD值不一样吧,可以用紫外分光仪全波段扫描一下你的菌的吸收峰,只用600是不是不太稳妥.2.最快的方法是:先做剃度稀释,再用细菌计数板显微镜,这是最快的方法.3.最传统的方法是剃度稀释涂平板法,这个周期较长24小时.PS:如果你的要测的较多,又没有细菌计数板的话,我教你个节省培养基,较准确的方法:做剃度稀释后,用微量加样器吸取20微升滴在平板上倾斜平板让它自然流成一条线,(也可以直接用加样器拉一直线),每个平板可以做3个样品(注意不要互相污染.也可以分离到单个菌落计数.你可以取一定体积的大肠杆菌培养液经过离心后经过几次洗涤后在离心，然后在将离心后的菌体放入一个称至恒重的称量瓶经过干燥后称至恒重即可大肠杆菌的菌体干重将一定量的菌液中的菌体通过离心或过滤分离出来,然后烘干(干燥温度可采用105℃、100℃或80℃)、称重一般干重为湿重的10%—20%，而一个细菌细胞一般重约10-12—10-13g。

该法适合菌浓较高的样品举例：大肠杆菌一个细胞一般重约10–12~10–13g，液体培养物中细胞浓度达到2109个/ml时，100ml培养物可得10~90mg干重的细胞研究对象的确定常以微生物的群体为研究单位来研究微生物的生长微生物的生长通常指细胞数目的增加，或细胞总重量的增加研究方法 以细菌为例细菌群体生长情况的测定方法：1测细菌的细胞数目 2测细菌的细胞总重量（干重或湿重）一、测生长量1、直接法：测湿重、体积（沉降量）或干重2、间接法(1)比浊法:测菌悬液稀释液的透光值（OD值）2)间接成分测定：测含氮量；测C或P量；测遗传物质量：DNA，RNA；(3)生理指标法：呼吸强度、耗氧、酶活性、生物热等二、计数法 1、直接计数 (1)计死活总菌数：显微镜下计数 (2)死活菌分别计数：酵母：美蓝染色，活细胞无色，死细胞蓝色; 细菌：丫啶橙染色，活细胞有橙色荧光，死细胞发绿色荧光2、间接计数法： 是一种活菌计数法(1)平板菌落计数：好氧菌、厌氧菌均可（实验）.菌样稀释→与培养基混匀浇注平板→倒置培养→统计菌落形 成单位cfu→乘以稀释倍数→菌样含菌数用活菌指示剂TTC(2,3,5-氯化三苯基四氮唑)可使菌落在短时间内形成玫瑰红色快速鉴定 (2)膜滤器法二微生物的生长规律（一）、微生物的个体生长与同步生长1、个体生长：一个微生物从小到大的生长过程。

2、同步生长：某一群体中所有个体细胞尽可能都处于分裂步调一致的生长状态二）、单细胞微生物的典型生长曲线（见下） 定量描述液体培养基中M群体生长规律的实验曲线称为生长曲线，M典型生长曲线4个阶段：1、延滞期：指细胞数目没有增加1)延滞期的特点： 5点(2)影响延滞期的因素：种龄、接种量、培养基成分、培养条件等 2、对数期：细胞数目以几何级数增长的时期1)对数期的特点： 3点(2)描述对数期生长的几个参数繁殖代数：n = lgx2 C lgx1 / lg2＝3.322(lgx2Clgx1) 生长速率常数：R = n / t2 C t1代时：G = 1 / R = t2 C t1 / n(3)影响指数期微生物代时的因素： i ) 菌种 ii ) 营养成分 iii ) 营养物浓度： iv ) 培养温度 3、稳定期：新繁殖的细胞数与衰亡的细胞数相等1)稳定期到来的原因: 4点 (2)稳定期的特点：3点 (3)稳定期的重要性：3点 4、衰亡期：微生物个体死亡速度超过新生速度1)衰亡期特征： (2)衰亡期出现的原因：微生物生长曲线的实践意义1处于对数期的细菌，生长繁殖速率快，代谢旺盛，生产上常用这个时期的细菌作为菌种，以缩短生产周期。

2进入稳定期后，抗生素等代谢产物逐渐增多如果适当补充营养物质，就有助于延长稳定期、提高代谢产物的产量 （三）微生物的连续培养1、概念 单批培养：按生长曲线描述的方式培养的方法 连续培养：将新鲜培养基连续加入均匀搅拌的培养物中，保持细胞浓度、比生长速率、培养环境不随时间变化，维持稳定状态的培养过程2、连续培养方法：恒化器法；恒浊器法三 影响微生物生长的环境因素 1、温度 微生物生长最旺盛时的温度叫最适生长温度；在最适生长温度范围内，微生物的生长速率随温度的上升而加快；超过最适生长温度以后，微生物的生长速率会急剧下降2 pH 每种微生物的最适pH不同：多数细菌：6.5～7.5；真菌：5.0～6.0；放线菌：7.5-8.5超过最适pH范围以后，影响酶的活性，细胞膜的稳定性等3,氧气 按照微生物与氧的关系，可分为： 专性好氧菌：氧分压0.2Pa(10ppm),呼吸产能 兼性厌氧菌：有氧无氧均可生长，有氧呼吸产能， 无氧发酵或无氧呼吸产能 微好氧菌:氧分压0.01--0.03Pa（0.11ppm）,呼吸产能 耐氧菌:生长不需要氧，但分子氧无毒害只能发酵产能 厌氧菌:需无氧或基本无氧条件，发酵、无氧呼吸、循环光磷酸化或甲烷发酵产能；氧剧毒专心---专注---专业。