红细胞检验方法.ppt

红细胞检验的基本方法第一节 有关铁指标的检验 一、血清铁测定 【实验原理】血清（浆）铁测定的原理是：血淸铁以 Fe3+形式与转铁蛋白（transferrin, Tf)结合存在，降低介质的pH及加人还原剂 (如抗坏血酸、羟胺盐酸盐等）使Fe3+还原为Fe2+则转铁蛋白对铁离子的亲和力降低而解离，解离出的Fe2+与显色剂（如菲咯嗪和2，2'-联吡啶等）反应生成有色络合物，同时作标准对照，计算出血清铁的含量 【参考范围】成年男性ll.6〜31.3μmol/L，女性9.0〜 30.4μmol/L;均值为 20μmol/L, 1岁后小儿时期约 12μmol/L 【应用评价】 1.降低常见于生理性铁需要量增加、缺铁性贫血（IDA)、 慢性失血和感染等 2.增高常见于肝疾病、铁粒幼细胞贫血、再生障碍性贫血 、慢性溶血、巨幼细胞贫血和反复输血等 3.血淸铁经常在变化，单项检测意义不大 二、血清铁蛋白测定 【实验原理】血清铁蛋白测定（measurement of serum ferritin) —般采用固相放射免疫法先用兔抗人铁蛋白与人血淸铁蛋白相结合，再用125I标记抗人铁蛋白与固相上结合的铁蛋白相结合，洗脱未结合的过多的放免标记物，洗脱结合放免标记的铁蛋白，用计数器与标准曲线比较，计算出铁蛋白值。

 【参考范围】成年男性15〜200μg/L,成年女性2〜150μg/L，小儿低于成人; 青春期至中年，男性高于女性 【应用评价】血清铁蛋白（SF)含量也能准确反映体内储铁情况，与骨髄铁染 色结果有良好的相关性SF的减少是诊断缺铁性贫血敏感方法之一 1.降低常见于缺铁性贫血、失血、慢性贫血等 2.增高常见肝疾病、血色病、急性感染、铁代谢障碍性贫血及恶性肿瘤等 三、血清总铁结合力测定 【实验原理】血淸总铁结合力（total iron binding capacity, TIBC)是指血淸中转铁蛋白能与铁结合的总量 通常情况下，仅有1/3的转铁蛋白与铁结合在血淸中 加入已知过量的铁标准液，使血清中全部的Tf与铁结合达 到饱和状态，再用吸附剂 (轻质碳酸镁）除去多余的铁 再按上述血淸铁测定方法，测得的血清铁含童，即为 总 铁结合力，如再减去先测的血清铁，则为未饱和铁结合力 （UIBC) 【参考范围】TIBC:男性50〜77μmol/L,女性54〜77μmol/L; UIBC： 25.1 〜51.9；imol/L0 【应用评价】 1.增髙常见于缺铁性贫血和红细胞增多症等 2.降低或正常见于肝疾病、恶性肿瘤、溶血性贫血、慢性感 染和肾病综合征等。

 四、血清转铁蛋白测定 【实验原理】血淸转铁蛋白测定（measurement of serum transferrin)的测定方法有免疫散射比浊法、放射免疫法和电泳免疫扩散法免疫散射比浊法：利用抗人转铁蛋白血淸与待检测的转铁蛋白结合形成抗原抗体复合物，其光吸收和散射浊度增加，与标准曲线比较，可计算出转铁蛋白含量 【参考范围】免疫散射比浊法为28.6〜51.9μmol/L 【应用评价】 1.增髙常见于缺铁性贫血和妊娠 2.降低常见于肾病综合征、肝病综合征、肝硬化、恶性肿 瘤、炎症等 六、血清转铁蛋白受体测定 【实验原理】血清转铁蛋白受体测定（measurement of serum transferrin recep­tor) 一般采用酶联免疫双抗体 夹心法包被于固相上的血淸转铁蛋白受体（serum transferring receptor, s-TfR)特异的多克隆抗体，与 待测血淸中转铁蛋白受体结合， 形成抗原抗体复合物， 再加入酶标记的对转铁蛋白受体具有特异性的多克隆抗体 ，使之与抗原抗体复合物进行特异性结合，洗去未与酸标 记的多克隆抗体结合部分，加人底物和显色剂，其颜色的 深浅与转铁蛋白受体的量成正比。

 【参考范围】以不同浓度标准品的吸光度值绘制标准曲线 ，通过标准曲线查出未 知标本的转铁蛋白受体水平各 实验室应根据试剂说明书上的参考范围进行判断 【应用评价】 1.升髙常见缺铁性贫血和溶血性贫血 2.降低可见于再障、慢性病贫血、肾衰竭等 3.用于临床观察骨髄增生状况和治疗反应如肿瘤化疗后 骨髄受抑制和恢复情 况，骨髓移植后的骨髓重建情况， 以及用EPO治疗各类贫血过程中的疗效观察和剂量调整等  血淸铁、总铁结合力、铁蛋白测定及骨髄铁染色是小细胞低色素性贫血的实验鉴别诊断的重要手段第二节 叶酸和维生素B12的检验 一、血清和红细胞叶酸测定 【实验原理】叶酸测定（measurement of folacin)常用 放射免疫法（RIA)，核 素与叶酸结合，产生放射碘叶酸 化合物，其放射活性与血清或红细胞的叶酸含量 成比例 ，检测其放射活性，与已知标准对照，计算叶酸量 【参考范围】血淸叶酸：成年男性8. 61〜23. 8nmol/L, 女性7. 93〜20. 4nmol/L, 红细胞叶酸：成人340〜 1020nmol/L红细胞 【应用评价】红细胞与血淸的叶酸浓度相差几十倍，体内组织叶酸缺乏但当未发 生巨幼细胞贫血时，红细胞叶酸测定对判断叶酸缺乏尤其有价值。

叶酸减低有助于诊 断由于叶酸缺乏引起的巨幼细胞贫血，还可见于红细胞过度增生，叶酸利用增加（如 溶贫、骨髄增生性疾病) 一、血清维生素B12测定 【实验原理】维生素B12测定（measurement of vitamin B12)放射免疫法，用抗氧化剂和氰化钾在碱性环境下（pH>12),将人血淸中的维生素B12从载体蛋白中释放出来加人57Co标记的维生素B12，与固定在微晶纤维顆粒上纯化的维生素B12结合物竞争结合，检澜其放射活性，其量与受检血淸的维生素含量成反比，与标准管作对照，换算出维生素B12含量 【参考范围】187~1059ng/L,＜157ng/L时为维生素B12的 缺乏 【应用评价】 1.降低常见于巨幼细胞贫血，对巨幼细胞贫血诊断有重要 价值 2.增髙白血病患者血清维生素B12含量明显增髙；真性红 细胞增多症、某些恶 性肿瘤和肝细胞损伤时也可增加 三、血清维生素B12吸收试验 【实验原理】给受检者口服放射性核素57Co标记的维生素B^O.Spg，2小时后肌注未标记的维生素B121mg，收集24小时尿57Co测定排出量， 【参考范围】健康人>7% 【应用评价】巨幼细胞贫血阳性对照血清比值土0.10。

 【应用评价】内因子阻断抗体阳性：多见于由维生素B12 缺乏引起的巨幼细胞贫血、恶性贫血等第三节 溶血的检验 一、红细胞寿命测定 【实验原理】红细胞寿命测定（erythrocyte life span determination)将标记放射性核素（51Cr)的红细胞注入 血循环后，逐日观察其消失率，记录成活曲线，计算出 红细胞寿命 【参考范围】半寿期为25〜32天 【应用评价】 1.溶血性贫血红细胞寿命缩短，约为14天 2.再生障碍性贫血红细胞寿命缩短，约为15〜29天 二、血浆游离血红蛋白检测 【实验原理】利用血红蛋白亚铁血红素具有类过氧化物酶活性的特点，采用过氧化物酶法检测血浆游离血红蛋白（plasma free hemoglobin)0血红蛋白可催化Hz02释放新生态氧，使联苯氧化为蓝紫色根据显色深浅，与同时测定标准血红蛋白液对照，可测出血浆游离血红蛋白的暈 【参考范围】0〜40mg/L 【应用评价】正常情况，血浆中血红蛋白大部分与结合珠 蛋白结合，仅有微量游离血红蛋白测定血浆游离血红蛋 白可判断红细胞的破坏程度 1.游离血红蛋白明显增高是判断血管内溶血的指征。

蚕豆 病、PNH、阵发性寒冷性血红蛋白尿、冷凝集素综合征、 溶血性输血反应等明显增高；自身免疫性溶血性贫血、珠 蛋白生成障碍性贫血可轻到中度增高 2.血管外溶血、红细胞膜缺陷不增高 三、血清结合珠蛋白检测 【实验原理】血清结合珠蛋白测定（measurement of haptoglobin, Hp)是在待测血清中加入一定量的血红蛋白 液，使之与待测血清中的结合珠蛋白（Hp)形成 Hp~Hb复 合物通过电泳法将结合的Hp~Hb复合物与未结合的Hb分 开，测定Hp-Hb复合物的量，可测得血清中结合珠蛋白的 含量 【参考范围】0.5〜1. 5gHb/L 【应用评价】正常情况下，血浆中的血红蛋白与结合珠蛋 白结合形成复合物，在单核-吞噬细胞系统和肝内被消除 溶血时血浆中的血红蛋白与Hp结合增多，使血淸中结合 珠蛋白减少，测定血清中结合珠蛋白的含量可反映溶血的 情况 1.减低常见于各种溶血，尤其是血管内溶血严重肝病、 先天性无珠蛋白 血症、传染性单核细胞增多症等Hp也明 显减低，此时不能以此指标判断有无溶血 2.增髙常见于感染、创伤、SLE、恶性肿瘤、类固醇治疗 、.妊娠、胆道堵塞 等（Hp为急性期反应蛋白）。

此时如 Hp正常，不能排除合并溶血的可能 四、血浆高铁血红素白蛋白检测 【实验原理】血液中白蛋白和特异性的血红素结合蛋白（ hemopexin, Hx)均能结合血红素但血红素与Hx的亲和力 远髙于与白蛋白的亲和力所以当Hp耗尽后，血红素与Hx 结合成复合物运送到肝脏降解血浆中游离的血红蛋白可 被氧化为高铁血红蛋白，再分解为珠蛋白和高铁血红素， 后者先与血中的血红蛋白结合，血红 蛋白消耗完后，髙 铁血红素与白蛋白结合形成高铁血红素白蛋白（ methemalbumin)， 后者与硫化铵形成一个易识别的按血 色原（ammonium hemochromogen)，用光谱仪观察结果， 于绿光区558nm处冇一最佳吸收区带 【参考范围】健康人呈阴性 【应用评价】血管内溶血时，血浆中游离血红蛋白大量增加，血浆中可检测出髙铁血红素白蛋白血清中出现高铁血红素白蛋白是溶血严重的指标 五、尿含铁血黄素试验 【实验原理】尿含铁血黄素试验又称Rous试验当血红蛋白通过肾滤过时，部分铁离子以含铁血黄素的形式沉积于上皮细胞，并随尿液排出尿中含铁血黄素是不稳定的铁蛋白聚合体，其中的高铁离子与亚铁氰化钾作用，在酸性环境下产生 普鲁士蓝色的亚铁氰化铁沉淀。

尿沉渣肾小管细胞内可见直径1〜3μm的蓝色颗粒 【参考范围】健康人为阴性 【应用评价】Rous试验阳性提示慢性血管内溶血，尿中有铁排出无论有无血红蛋白尿，只要存在慢性血管内溶血如PNH，本试验即呈阳性，并可持续数周但在溶血初期，虽然有血红蛋白尿，上皮细胞内尚未形成可检出的含铁血黄素，此时本 验可呈阴性反应 六、尿外淋检测 【实验原理】尿中卟啉类物质在酸性条件下，经乙醚提取 ，于405nm处显红色 荧光，从而可对尿卟啉进行定性检测  【参考范围】健康人阴性 【应用评价】 1.增加主要见于先天性红细胞生成型卟啉病、迟发性皮肤 型卟啉病、肝红细 胞生成型卟啉病等 2.卟啉类化合物检测对研究血红素代谢障碍有重要意义， 除卟啉病外，对缺铁性贫血、铅中毒、铁粒幼细胞贫血和 珠蛋白生成障碍性贫血等的诊断有一定价值第四节 红细胞膜缺陷的检验 一、红细胞渗透脆性试验 【实验原理】渗透脆性试验（osmotic fragility test) 检测红细胞对不同浓度低渗盐溶液的抵抗力红细胞在低 渗盐溶液中，当水渗透至红细胞内部达一定程度时，红 细胞发生膨胀破裂根据不同浓度的低渗盐溶液中红细胞 溶血的情况反映红细胞其表 面积与容积的比值，反映对 低渗盐溶液的抵抗性。

比值愈小，红细胞抵抗力愈小，渗 透脆性增加；反之抵抗力增大，渗透脆性降低 【参考范围】简易半定量法 开始溶血：3.8〜4.6g/LNaCl溶液 完全溶血：2.8〜3.2g/LNacl溶液 【应用评价】 1.增加主要见遗传性球形红细胞增多症、椭圆形红细胞增 多症和部分。