猪支原体肺炎MP酶联免疫分析.docx

猪支原体肺炎（MP）酶联免疫分析试剂盒使用说明书96T本试剂盒仅供研究使用检测范围：6.0pg/ml-160pg/ml使用目的：本试剂盒用于测定猪血清、血浆及相关液体样本中支原体肺炎 （MP）含量实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中猪支原体肺炎 （MP）水平用纯化的猪支原体肺炎（MP）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入支原体肺炎 （MP）,再与HRP标记的支原体肺炎 （MP）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗 涤后加底物TMB显色TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终 的黄色颜色的深浅和样品中的支原体肺炎 （MP）呈正相关用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中猪支原体肺炎 （MP）浓度试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml X 1 瓶7终止液6ml X 1 瓶2酶标试剂6ml X 1 瓶8标准品（320pg/ml ）0.5ml X 1 瓶3酶标包被板12孔X 8条9标准品稀释液1.5ml X 1 瓶4样品稀释液6ml X 1 瓶10说明书1份5显色剂A液6ml X 1 瓶11封板膜2张6显色剂B液6ml X 1/瓶12密封袋1个标本要求1 •标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

若不能 马上进行试验，可将标本放于 -20 °C保存，但应避免反复冻融2•不能检测含 NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（ HRP ）活性操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释160pg/ml5号标准品150 ul的原倍标准品加入150 ul标准品稀释液80pg/ml4号标准品150 ul的5号标准品加入150 ul标准品稀释液40pg/ml3号标准品150 ul的4号标准品加入150 ul标准品稀释液20pg/ml2号标准品150 ul的3号标准品加入150 ul标准品稀释液10pg/ml1号标准品150 ul的2号标准品加入150 ul标准品稀释液2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂， 其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔在酶标包被板上标准品准确加样50 u 1，待测样品孔中先加样品稀释液40 u 1，然后再加待测样品10卩1 （样品最终稀释度为5倍）加样将样品加于酶标板孔底部，尽 量不触及孔壁，轻轻晃动混匀3. 温育：用封板膜封板后置 37°C温育30分钟4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50 ul,空白孔除外7. 温育：操作同38. 洗涤：操作同59. 显色：每孔先加入显色剂 A50 ul，再加入显色剂B50 ul，轻轻震荡混匀，37 C避光显色 10分钟.10. 终止：每孔加终止液50 ul，终止反应（此时蓝色立转黄色）11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（ OD值）测定应在加终止 液后15分钟以内进行操作程序总结：焉备丽）丽和箱准品加入准备好的样品和标准品■ 3厂C反应30分钟加入准备好的样品和标准品■ 3厂C反应30分钟洗板5次，加入酶标试剂，37C反应3分钏洼板5次，加入显色液厂區師诙钟加入终止液 15分钟之内读0D值计算I计算以标准物的浓度为横坐标， OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的 直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差一次加样时间最好控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值大于标准 品孔第一孔的 OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（ n 倍）后再测定，计算时请最后乘以 总稀释倍数（x n X 5 ）5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染6．底物请避光保存7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准 .8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理9．本试剂不同批号组分不得混用保存条件及有效期1 •试剂盒保存：；2-8 °C2．有效期： 6 个月。