考马斯亮兰法测蛋白质浓度.docx

Bradford法测蛋白质浓度一、 实验目的配制一组浓度分别为 0.10mg/ml , 0.08mg/ml, 0.06mg/ml , 0.04mg/ml , 0.02mg/ml, 0 mg/ml的牛血清蛋白（BSA）溶液，测定这组溶液的吸光度，得到 蛋白质浓度对吸光度的一条标准曲线测定未知蛋白质浓度样品的吸光度，根据 标准曲线得到蛋白质的浓度二、 实验原理考马斯亮蓝（CBB）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种考马斯亮蓝在 游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白 质一色素结合物在595nm波长下有最大光吸收其光吸收值与蛋白质含量成正 比，因此可用于蛋白质的定量测定蛋白质与考马斯亮蓝结合在2min左右的时 间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h内保持稳定该法试 剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可 测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0〜1 000pg/ml，是一种常用的 微量蛋白质快速测定方法三、 实验过程1. 准备所需的药品和仪器2. 计算所需配制的溶液的量先配制1 mg/ml的牛血清蛋白（BSA）母液，再往母液中加入水配制一组浓 度分别为 0.10mg/ml，0.08mg/ml，0.06mg/ml，0.04mg/ml，0.02mg/ml，的 BSA 溶液。

计算第一步稀释各组需要的BSA溶液及水的体积BSA体积(ul)10080604020100h2o体积(ul)9009209409609809901000BSA浓度 (mg/ml)0.10.080.060.040.020.010吸光值0.5630.4470.3340.2090.1030.0540四、实验数据及处理y = 5.5683xR2 = 0.99890.60.50.40.30.20.100 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1 0.12数据做得不是很好，做得好的话能达到3个9,不过这个值也差不多能用了。