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微柱凝胶法检测ABO疑难血型的临床应用.doc

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  • 上传时间:2022-04-25
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    • 微柱凝胶法检测ABO疑难血型的临床应用作者:肖倩等单位:百色市人民医院关键词:微柱凝胶法血型鉴定以往鉴定ABO、RhD血型常用试管法,山于该法在操作过程中使用试管较多,易出现差错, 给输血带来不安全因索微柱凝胶法(MGT)是近年来发展起来的一项免疫学检测技术,我院 自2008年采用MGT法进行ABO、RhD血型鉴定,同吋用试管法做对照,并对影响因索进行 了探讨1 材料和方法1. 1 材料 微柱凝胶测试卡(一卡六管)微管内含有中性凝胶,并已加入抗A1、抗B及抗 D血型定型试剂专用血型卡离心机和孵育箱,购自瑞丄达亚美公司单克隆抗A1、抗B定 型血淸(效价1 : 128)和ABO红细胞悬液购自上海血液医药有限公司,抗D定型血淸购自(台 湾)珠海贝索生物技术有限公司1.2 方法1.2. 1 试管法(复杏对照)检测ABO、RhD血型 对木院门诊和住院患者38 600例抗凝 的血标本置37 °C水浴15-30 min,离心分离血浆与红细胞正向定型:取试管3支标记并加 入抗A1、抗B及抗D试剂2滴,分别加入患者2%-4 %红细胞悬液1滴,以3 000 17 min离 心15 s,观察结果,凝集为阳性,不凝集为阴性。

      反向定型:取试管3支标以Ac、Be、Oc, 分别加入患者血浆2滴,再加入2%・4%AB O定型试剂红细胞1滴离心厉观察结果,凝集 为阳性,不凝集为阴性1. 2. 2 MGT法检测ABO、RhD血型 血标本处理同上,止定型:抗A1、抗B、抗D和 对照管各加患者的0.8%红细胞50μl o反定型:Ac管和Be管分别加入0.8%红细胞悬 液50μl和患者血浆50μl ,置血型专用离心机,以1 000 r/ min离心10 min后观察结 果如果红细胞沉积凝胶管底部,则表明红细胞未发生凝集(为阴性反应),若红细胞凝集在凝胶 带的上部,这表明红细胞发主凝集(为阳性反应)1. 2. 3 MGT法检测ABO血型止反定结果不一致的处理 ①假阳性的处理:将患者的血 标本置37 °C水浴30 min,以2 000 i7 min离心10 min,去除血标本中的纤维蛋白,川O型抗 体筛选细胞对患者的血浆进行不规则抗体筛选,如不规则抗体筛查阴性,MGT法检测仍有凝 集吋,将患者的血浆2ml加患者自身(或O型)压积红细胞1 ml混匀,置4 °C冰箱1 h吸收 冷凝集素后再进行检测;患者红细胞直接抗人球蛋白试验(DTA),用37 °C的生理盐水洗涤红 细胞3-5次,阳性者用抗IgG和抗C3鉴别免疫球蛋白的类型。

      ②假阴性的处理:如被检者的 血型抗原明显减弱或抗体效价降低,引起假阴性反应或正反定型结杲不一致时处理方法:血型 抗原减弱者町适当增加患者红细胞悬液的浓度(由0. 8 %增加到2 %),或将患者2 %的红细胞 悬液50μl与抗Al、抗B定空血清50μl混合,置37 £预先反应15・30 min撚后将 反应液全部加入Liss/ Coombs (Anti2IgG+ C3d)微柱凝胶卡上,置37 °C孵育15 min后,1000 r/ min离心10min后观察结果;抗体降低者可多加2・3滴患者血浆咸将患者血浆50μl 与ABO试剂红细胞50μl混合,然后将反应液全部加入到Liss Coombs (Anti2IgG+ C3d)微柱凝胶卡上,置37 °C孵育15 min后,1 ()00〃 min离心10 min后观察结果2 结果2. 1 MGT法与试管法检测患者ABO血型的结果MGT法与试管法检测一般患者ABO 血型时结果一致,但试管法在检测抗原明显减弱者的ABO血型时,正定型凝集非常微弱,仅川 肉眼难以判断结果,需在显微镜下才能见到很微弱的凝集块,选取4例(其中A型、B型、AB 型和B型各1例分别编号为No. 1 ,2 ,3 ,4)抗原明显减弱患者标本用MGT法(预先反应) 和试管法各检测两次ABO血型,相应均有对照,MGT法敏感性髙于试管法,正反定型结果一 致。

      见表lo2. 2 MGT法检测患者ABO血型正反定型不一致的相关因素我们在应用MGT法检测患者ABO血型时,发现止反定型不一致的标本共35例,对这35 例患者的血液标本同时进行不规则抗体筛杏和市接抗人球蛋白试验DTA,不规则抗体筛查均 为阴性,直接抗人球蛋H试验DTA除高效价冷凝集索5例为阳性外,其余均为阴性其中正 定型假阳性2例,假阴性8例,反定型假阳性16例,假阴性9例引起假阳性或假阴性的原因 为:患者的血浆中含有纤维蛋白9例(25.7%)、血清蛋白异常增高4例(11.4%)、高效价冷 凝集素5例(14. 3 %)、血型抗原明显减弱8例(22. 8 %)、血淸中抗休效价降低9例(25. 7%)3 讨论我们应用MGT法检测了 38 600例门诊和住院治疗的患者的ABO、RhD血型,并同时采用 试管法进行对照比较,检测结果显示,MGT法(尤其置37 °C预先反应)在检测患者的ABO 血型敏感性要窩于试管法试管法在检测白血病和恶性肿瘤等疾病引起患者红细胞抗原明显 减弱[2 ]或老人和小孩血清中抗体效价降低者的ABO血型时,可导致正反定型结果不一致, 容易引起血型误定,另外试管法还可因在加入定型血清或红细胞悬液时剂量不标准及不同操 作者判断结果的标准不同而产生误差。

      MGT法是利用分子筛技术、离心技术和特异性的免 疫反应技术原理,把血型血清学技术与凝胶分子筛技术右机的结合起来,可以非常灵敏的检测 出町能存在的微弱的血型抗原抗体反应,尤具是在检测不完全抗体方而的灵敏度明显高于凝 集胺法和抗人球蛋白法MGT法具有方法简便,易于批量和标准化操作,结果直观可靠,不受人 为因素的影响,容易保存为校对等诸多优点,因此在血型血淸学的检测中被逐渐推广应用在 MGT法的应用过程中,我们发现患者.血标木如含有纤维蛋口、血清蛋白异常增高、高效价冷 凝集素、血型抗原明显减弱、•血清中抗体效价降低等有关因素可干扰MGT法检测ABO血 型的结果,引起止反定型不一致,给血型判断带来困难整个定型中的假阳性主要市高效价冷 凝集素和血清蛋白异常增高所引起;假阴性主要由红细胞血型抗原明显减弱所引起由于微 柱凝胶管内的定型血淸只有15μl左右,而且定型血清的分布高度只有2・3 mm,故离心 时红细胞与微管内的定型血淸的接触时间极短,如果再加上微柱凝胶卡的保存不当,致使管内 定型血清减少或效价降低,在检测ABO血型抗原明显减弱者的ABO血型时,由于红细胞上 相应抗原位点减少,红细胞之间尚来不及搭桥就直接被离心到管底,易造成假阴性结果。

      反定 型中的假阳性主要山血浆标本未置37 °C或离心时间不够,血标本中含有纤维蛋白或者高效 价冷凝集素造成阳性假阴性主要山于老年人或小儿患者血清中的抗体效价降低所引起因 此应用MGT法血型抗原明显减弱或血清中抗体效价降低者ABO血型,出现正反定型结果 不一致时,应增加定型血清或患者血清剂量或预先将抗原抗体混合,置37 °C预先反应15・30 min,然后采用MGT法检测,可提高ABO血型坚定的准确性和输血安全川明:本论文版权归原刊发杂志社所有,我们转载的廿的是用于学术交流与讨论,仅供参考不构成任何学术建议。

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