第四章-脂质和脂蛋白代谢紊乱的生物化学检验（第二节）.ppt

第二节 脂蛋白代谢紊乱的主要检测指标,二、甘油三酯,三、血浆脂蛋白测定,一、总胆固醇,七、过氧化脂质测定,八、脂蛋白-X测定,四、 ApoB/ApoA-I 、TC／HDL-C、Tg/HDL-C、LDL-C/HDL-C比值,五、磷脂检测,六、游离脂肪酸测定,九、卵磷脂胆固醇转移酶测定,十、脂蛋白代谢相关基因检测,十一、脂肪酸结合蛋白,十二、其他,血浆脂蛋白和脂质测定是临床检验的常规测定项目，其临床意义主要是： 早期发现与诊断高脂蛋白血症 协助诊断动脉粥样硬化症 评价动脉粥样硬化疾病的危险度 检测评价饮食与药物治疗效果等,一、总胆固醇（total cholesterol,TC） 是血液中各脂蛋白所含胆固醇之总和，分为酯化型胆固醇（CE）和游离型胆固醇（FC），其中CE占60%～70%，FC占30%～40%，两种类型的比例在健康个体或个体之间是恒定的 【测定方法】 化学法和酶法 化学法：抽提；皂化；洋地黄皂苷纯化；显色，比色 酶法：氧化酶法 目前常规应用酶法测定，快速准确胆固醇氧化酶法 实验原理： 胆固醇酯酶（CEH）先将胆固醇酯水解为胆固醇和游离脂肪酸（FFA），胆固醇在胆固醇氧化酶（COD）的作用下氧化生成Δ­4­-胆甾烯酮和过氧化氢。

后者经过氧化物酶（POD）催化氢与4-氨基安替比林（4-AAP）和酚反应，生成红色的醌亚胺，其颜色深浅与胆固醇的含量呈正比，在500nm波长处测定吸光度，与标准管比较可计算出血清胆固醇的含量反应式如下：,参考范围： 2007年《中国成人血脂异常防治指南》规定成人TC水平： 在5.18mmol/L（200mg/dl）以下为合适范围； 在5.18～6.19mmol/L（200～239mg/dl）范围属于边缘升高； 在6.22mmol/L（240mg/dl）以上为TC升高 临床意义： TC浓度增高，冠心病等心血管疾病发生的危险性增高影响TC水平的因素： (1)年龄与性别：新生儿TC很低，哺乳后很快接近成人水平，之后常随年龄而上升，但到70岁后不再上升甚或有所下降中青年期女性低于男性，女性绝经后TC水平较同年龄男性高 (2)饮食习惯：长期高胆固醇、高饱和脂肪酸摄入可造成TC升高 ⑶ 种族：黑人的总胆固醇水平要高于白人 ⑷ 遗传因素但是，血清胆固醇水平低一定有益吗？ 细胞膜的重要成分，维持正常的细胞功能 胆固醇是维持人体正常新陈代谢不可缺少的原料，是抗老防衰、延年益寿的重要物质 是体内多种激素的重要原料，如类固醇激素、维生素D、胆汁酸的重要原料。

May HT和Nasim Afsarmanesh的研究显示TC水平降低时增加心衰时的死亡率，而增高时可增加生存率； Renzhe.Cui等研究发现在冠心病中，低血总胆固醇会增加死亡率； Alessia D Introno等认为TC水平升高可能可以防止痴呆二、甘油三酯(triglyceride,TG) 甘油三酯构成脂肪组织,参与TC,CE合成及血栓形成 是一项重要的临床血脂常规测定指标，特别是随着对其致动脉粥样硬化(AS)作用研究的深入，TG作为冠心病的一项独立的危险因素日益受到重视 但是目前血清TG测定及其临床应用尚存在很多问题，如生物学变异、游离甘油对测定的影响等 测定方法： 物理法：总脂质与胆固醇和磷脂之差估算 化学法：用有机溶剂抽提标本中的TG，去除抽提液中磷脂等干扰物后，用碱水解(皂化)TG，以过碘酸氧化甘油生成甲醛，然后用显色反应测甲醛比较准确的是二氯甲烷-硅酸-变色酸法(Van Handel-Caslson法)，此法抽提完全、能去除磷脂及甘油干扰、变色酸显色灵敏度高、显色稳定，至今还是美国疾病控制与预防中心(CDC)的内部参考方法但因操作步骤繁多、技术要求高而不适于常规工作应用。

建议酶法（如GPO-PAP法）作为临床实验室测定血清Tc的常规方法GPO-PAP法测定甘油三酯 【实验原理】 血清中三酰甘油经脂蛋白酯酶作用，水解为甘油和游离脂肪酸，甘油在三磷酸腺苷和甘油激酶的作用下，生成3-磷酸甘油，经磷酸甘油氧化酶作用生成磷酸二羟丙酮和过氧化氢，过氧化氢与4-氨基安替比林及氯酚在过氧化物酶作用下生成红色醌类化合物参考范围】 目前《中国成人血脂异常防治指南》仍沿用1997年《血脂异 常防治建议》的标准规定我国成人TG水平： 在1.7mmol/L（150mg/dl）以下为合适范围； 1.7～2.25mmol/L（150～199mg/dl）为边缘升高； 2.26mmol/L（200mg/dl）以上为升高 【临床意义】 1、生理性改变： 2、病理性改变： 轻至中度升高2.26-5.63mmol/l 患冠心病危险性增加 重度升高≥5.63mmol/l 可伴发急性胰腺炎 3、低TG血症：＜0.56mmol/l,三、血浆脂蛋白测定 方法：超速离心法、电泳法、血浆静置实验、血浆脂蛋白胆固醇测定 （一）高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C) 高密度脂蛋白是血清中颗粒最小密度最大的一组脂蛋白,被视为人体内具有抗动脉粥样硬化的脂蛋白，同时大量的流行病资料表明，血清HDL-C水平与冠心病发病成负相关,因而HDL-C被称为“好的胆固醇”。

【测定方法】 直接均相法测定法实验原理】 利用多聚体和聚阴离子在表面活性剂的作用下，对低密度、 极低密度脂蛋白选择性遮蔽的原理，从而达到仅血清高密度 脂蛋白中的胆固醇参与显色反应的方法 【参考范围】 合适范围为：1.55mmol/L（60mg/dl）-1.04mmol/L（40mg/dl） 升高：＞1.55mmol/L（60mg/dl） 降低：＜1.04mmol/L（40mg/dl） 2001年NCEP ATP III报告【10】认为： HDL-C的合适范围为1.04mmol/L （40mg/dl）临床意义】 随着HDL-C水平降低，缺血性心血管病发病危险增加， HDL-C＜1.04mmol/L的人群与HDL-C≥1.55mmol/L的人群相比， 缺血性心血管病危险增加50% 【评价】 影响血浆（清）HDL-C水平的因素很多，主要有： ①年龄和性别②种族③饮食④肥胖⑤饮酒与吸烟 ⑥运动⑦药物⑧疾病,（二）低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C） 【测定方法】 参考方法为超速离心法 临床检验科采用直接匀相法：清除法(SUR法)，透射比浊法、，环芳烃法(CAL法)，可溶性反应法(SOL法)和保护性试剂法(PRO法) 【原理】 表面活性剂清除法：试剂Ⅰ（表面活性剂Ⅰ）能改变并解离除LDL以外的脂蛋白结构，释放出胆固醇与酶试剂反应产生H2O2但缺乏偶联剂被消耗而不显色，此时LDL是完整的，加入试剂Ⅱ（含表面活性剂2和偶联剂）可使LDL释放胆固醇反应而显色，因其他脂蛋白的胆固醇已除去，显色深浅与LDL-C量成正比。

参考范围】 合适范围为：4.14mmol/L（160mg/dl） NCEP ATP Ⅲ：高脂血症患者血LDL-C的治疗目标值定为2.6mmol/L（100mg/dl）以下临床意义】 与缺血性心血管病发生相对危险及绝对危险上升趋势及程度与TC相似 增高见于家族性高胆固醇血症（TC增高，LDL-C增高，伴有HDL-C减低），Ⅱa型高脂蛋白血症（TC增高，LDL-C增高，TG正常或轻度增高） 【评价】 和HDL测定相同，高脂血症对LDL检测可产生干扰 生理条件下LDL-C水平随年龄增高而上升，青年与中年男性高于女性，老年前期与老年期女性高于男性三）小而密低密度脂蛋白（sd LDL） 小而密低密度脂蛋白为LDL脂蛋白B型 【测定方法】 密度梯度超速离心法（金标准）、梯度凝胶电泳法（常用）、 肝素-镁沉淀法（研究热点） 【原理】 肝素-镁沉淀法：肝素-镁可选择性沉淀密度小于1.044g/L的脂蛋 白，分离可得到含有SD-LDL和HDL的上清液，通过自动化分析仪 可选择性测定SD-LDL，进而实现对其的定量临床意义】 临床上常将高TG、低HDL-C及sdLDL增多三者同时存在合称为致动脉粥样硬化脂蛋白表型或脂质三联症。

sdLDL-C水平是冠心病患者检测代谢综合征的有效指标 【评价】 SD-LDL可促进AS的发生、发展，是心脑血管事件发生的独立危险因素之一，比LDL更具有致AS作用，检测LDL亚型比测定LDL价值更高，定量检测SD-LDL水平更为重要四）脂蛋白（a）[Lp（a）] 是含有特定的载脂蛋白[Apo（a）]的脂蛋白，其脂质组成结构与LDL及其相识，其一级结构与纤维蛋白酶原部分结构相同，作为脂类和凝血因子关联的事实引起关注1988年被国际Lp（a）专题会议公认为动脉硬化的独立危险因子 【测定方法】 免疫浊度法和ELISA 【参考范围】 健康成人血清Lp（a）300mg/L临床意义】 1.生理性改变 一般认为Lp（a）对同一个体相当恒定，但个体间差异很大，波动范围在0～1.0mg/LLp（a）水平高低主要有遗传因素决定，基本不受性别、年龄、饮食、营养和环境影响； 2.病理性增高 缺血性心脑血管疾病 、心肌梗死、外科手术 、急性创伤、急性炎症 、糖尿病肾病等 3.病理性减低 肝脏疾病（慢性肝炎除外）,（五）脂蛋白电泳分型 【测定方法】琼脂糖凝胶电泳 【参考范围】电泳法：α-脂蛋白占26%～45%，β-脂蛋白占43%～58%，前β-脂蛋白占6%～22%。

【临床意义】用于高脂蛋白血症的诊断分型的参考前β脂蛋白,α脂蛋白,四、载脂蛋白测定 （一）载脂蛋白AⅠ 载脂蛋白AⅠ主要存在于HDL中，在CM、VLDL、LDL也有少量，主要功能是维持脂蛋白结构的稳定和完整性已证实ApoAⅠ是通过激活LCAT来催化胆固醇酯化 【测定方法】 氨基酸分析-决定性方法 免疫透射比浊法-常规方法,【参考区间】 正常人空腹102-1.60g/L 危险水平临界值1.20g/L 【实验原理】 血清ApoAⅠ与试剂中的相应抗体结合，在一定条件下形成不溶性免疫复合物，使反应液产生浑浊，浊度与其含量成正比 【临床意义】 于HDL-C正相关，于冠心病发生危险因素呈负相关 可反映HDL的颗粒数，缺乏可引起低HDL-C血症二）载脂蛋白B 载脂蛋白B可分为两个亚类，即ApoB48、ApoB100，前者存在于CM中，参与外源性脂质的消化、吸收和运输；后者存在于、LDL中，参与VLDL的装配和分泌 【测定方法】 免疫透射比浊法-常规方法 【参考区间】 正常人群0.80-1.10g/L 中国人危险临界值1.00-1.10g/L,【实验原理】 血清ApoB与试剂中的相应抗体结合，在一定条件下形成不溶性免疫复合物，使反应液产生浑浊，浊度与其含量成正比。

【临床意义】 反应血液中LDL的数量 与冠心病发病危险性呈负相关 【评价】 P73,（二）载脂蛋白E 载脂蛋白E存在于多种脂蛋白颗粒中，是正常人血浆脂蛋白中重要的Apo成分,主要功能为运输并介导某些脂蛋白与相应的受体主要由肝脏产生 【测定方法】 免疫透射比浊法-常规方法 【参考区间】 健康人0.03-0.06g/L 【临床意义】 与血浆TG含量正相关四）ApoB/ApoA-I 、TC／HDL-C、Tg/HDL-C、LDL-C/HDL-C比值 研究发现： TC／HDL-C比值比非HDL-C更能预示冠心病的危险 Tg/HDL-C比值有效测量血脂异常、高血压和代谢综合征 TC／HDL-C、Tg/HDL-C、ApoB/ApoA-I、LDL-C/HDL-C比值可能比单项血脂检测更具临床意义，而ApoB/ApoA-I可能是其中最具说服力的指标五、磷脂 是含有磷酸基和多种脂类的一类物质的总称 【测定方法】 化学法和酶法 【参考区间】 1.3-3.2mmol/L 【临床意义】 与胆固醇密切相关，但磷脂的升高可能落后于胆固醇 增高常见于胆汁淤积、原发性胆汁淤积性肝硬化、高脂血症、脂肪肝、LCAT缺乏症、肾病综合症。

六、游离脂肪酸 是含有C10以上的脂肪酸主要由脂肪中的TG分解释放入血，正常情况下含量。