实验六色谱法.ppt

色 谱 法 （Chromatography） 有机化学与药物化学教研室 色谱分析法（简称色谱法或层析法） 色谱分析法简称色谱法或层析法1906年， 俄国植物学家Tsweet将CaCO3放在竖立的玻璃柱中 ，从顶端倒入植物色素的石油醚浸取液，并用石 油醚冲洗在柱的不同部位形成色带，因而命名 为色谱管内填充物称为固定相，冲洗剂称为流 动相现在的色谱法不仅可分离有色物质，还可 分离无色物质，不局限于“色”的意义 分离原理 色谱法就是利用混合物中各组分在 固定相和移动相中进行反复的吸附或分 配作用，达到各组分分开的目的 分 类 n按照被分离物质在固定相中的作用原理 不同，色谱法可分为吸附色谱、分配色 谱、离子交换色谱等 n按照操作方式不同，又可分为柱色谱、 薄层色谱、纸色谱、气相色谱、和高效 液相色谱等 本次实验内容 1、柱层析 2、纸层析 一、柱色谱 将固定相装于柱管内构成色谱柱， 色谱过程在色谱柱内进行按色谱柱的 粗细差别，可分为填充柱色谱法、毛细 管柱色谱法及微填充柱色谱法等 实验目的 1. 掌握柱色谱的原理和基本操作 2. 利用柱色谱的方法分离和提纯有机物 实验原理 柱色谱是利用混合物中各组分受吸 附作用的不同以及各组分在溶剂中溶解 度的差别，将各组分分离。

可分为吸附 柱层析和分配柱层析 吸附柱层析 预分离的混合物随着流动相通过色谱柱 ，在固定相上反复发生吸附－洗脱－再吸附 －再洗脱由于各组分吸附能力不同，经过 一段时间，按对吸附剂亲和力大小，形成不 同色带而分离 影响因素 n吸附剂 柱色谱常用的吸附剂是氧化铝和硅胶吸附 剂应进行纯化和活化处理 n物质的结构和吸附能力 吸附性与分子极性成正比 n洗脱剂 先用极性小的溶剂洗脱，后改用极性强的溶 剂洗脱使化合物按极性与小道大顺序出柱 仪器和药品 n色谱柱、玻璃漏斗、滴液漏斗、100ml烧杯一个 、150ml锥形瓶二个、滴定台（或铁架台）、剪 刀、玻棒 n 0.05%甲基橙和0.25%亚甲基蓝混合乙醇溶液[1]、 100～200目中性色谱用氧化铝、无水乙醇、 0.1mol/L盐酸溶液、蒸馏水、脱脂棉、滤纸 [1] 称取110mg甲基橙和550mg亚甲基蓝于250ml 95%乙醇中溶解 实验步骤 1、装柱 取清洁干燥的色谱柱，管底垫少许棉花倾入 无水乙醇20ml，称取8g柱用氧化铝，经漏斗缓慢 倒入管中，同时轻轻拍打色谱柱，用无水乙醇清洗 沾在管内壁上的氧化铝打开活塞，氧化铝随着溶 剂流动继续下沉，直至沉降停止。

在氧化铝表面平 整紧贴地覆盖一张略小于色谱柱内径的滤纸，打开 活塞使氧化铝表面仅留一薄层的溶剂 实验步骤 2、加样 在色谱柱表面小心加入样品溶液0.5 亳升（注意勿使样品沾在色谱柱的内壁 上） 实验步骤 3、洗脱 打开活塞，使样品液全部进入吸附剂（勿使流 干）加入无水乙醇0.5ml，打开活塞使蓝色谱带完 全进入吸附剂，关闭活塞；重复二次，蓝色谱带逐 渐下移继续加无水乙醇，使亚甲基蓝完全洗脱， 收集于第1个三角锥瓶改用25g/LNaOH溶液作洗脱 剂（操作步骤与以无水乙醇作洗脱剂相同），使甲 基橙完全洗脱，收集于第2个三角锥瓶 思考题 1．装柱过程应注意什么事项？ 2．加样、洗脱过程应注意什么事项？ 二、纸色谱 纸色谱为分配色谱，色谱过程在固 定相构成的平面状层下进行滤纸为载 体，固定相为滤纸上的水，流动相（展 开剂）为用水饱和过的有机溶剂 实验目的 1、掌握纸层析分离氨基酸的方法 2、掌握纸层析基本原理 实验原理 纸色谱属于分配色谱 衡量物质向上移动的物理量是比移值（Rf） 例:大黄中游离蒽醌的纸色谱图 溶剂前沿 大黄素甲醚 芦荟大黄素 大黄素 大黄酸 点样点 仪器和药品 干燥大试管及配套软木塞、喷雾器、电热吹 风器、刻度尺（20cm）、滤纸条（长160mm，宽 15mm）、铅笔、木框（22×40cm）、大头针、毛 细管长6~7cm、棉线 氨基酸混合液、饱和苯酚水溶液、0.2%茚三 酮乙醇溶液 实验步骤 1．在滤纸条上端边缘约1厘米的中央剪一小孔。

2．将滤纸条平放于洁净的纸上，在距离滤纸下端 1cm处用铅笔轻画一横线，并在横线的中央画一直 径为2mm的小圆圈 3．用毛细管吸取氨基酸混合液，在滤纸条下端的 小圆圈内点样 实验步骤 4. 取干燥大试管，加入被水饱和的酚溶液10ml，注 意勿使溶液沾到试管壁上，将试管垂直固定 5. 在距滤纸条下端0.5cm处穿大头针从滤纸条上 端小孔处穿棉线并左右分开，调节线的高度使滤纸 垂直悬于试管内且下湍浸入溶液0.5cm，注意勿使 点样点浸入溶液中，亦勿使滤纸条接触试管壁 实验步骤 6. 此时即可看到溶剂向上移动，溶剂升到一定 高度时，小心将纸条取出，以铅笔标出溶剂上升 的前沿 7. 将滤纸条两端，用大头针钉在小木框上，吹 干后用喷雾器均匀地喷一层0.2%茚三酮乙醇溶液 ，然后再将滤纸条吹干，即可看到纸上显出三色 点，每个色点代表一种氨基酸 实验步骤 8. 分别测量并计算三种氨基酸的Rf，再根据教 师供给的值确定此三个色点各为何种氨基酸 9. 留在试管内的酚溶剂切勿弃去，塞紧塞子。