饲料维生素B2水平对团头鲂幼鱼生长性能、体组成、.doc

饲料维生素B2水平对团头鲂幼鱼生长性能、体组成、 王菲++李向飞++李鹏飞摘要：研究了团头鲂幼鱼饲料中维生素B2的最适需求量及维生素B2水平对团头鲂幼鱼生长性能、体组成、抗氧化功能和肠道消化酶活性的影响试验采用单因子浓度梯度法，将鱼随机分为6组，投喂不同水平的维生素B2，分别为166、2.83、4.29、6.15、8.37、11.28 mg/kg的半纯合饲料，每日3次，饱食投喂12周结果表明，饲料中维生素B2水平对团头鲂幼鱼饵料系数、存活率和形体指标均无显著影响当饲料中维生素B2水平从1.66 mg/kg升至 6.15 mg/kg 时，团头鲂幼鱼的增质量率和特定生长率均显著增加；当维生素水平进一步升高时，则显著下降饲料中维生素B2水平对团头鲂幼鱼全鱼的水分、粗蛋白和粗灰分水平均无显著影响团头鲂幼鱼全鱼粗脂肪水平在饲料中维生素B2水平由1.66 mg/kg升至6.15 mg/kg时则显著升高；当维生素B2水平进一步升高时，则显著下降当饲料中维生素B2水平从1.66 mg/kg升至4.29 mg/kg时，团头鲂幼鱼肝脏中超氧化物歧化酶、过氧化氢酶活性和还原型谷胱甘肽的含量，以及肠道淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶活性均显著升高，当维生素B2水平进一步升高时，则显著下降；丙二醛含量变化趋势则与之相反。

根据团头鲂幼鱼增质量率、肝脏维生素B2沉积量和肝脏D-AAO活性进行回归分析结果，团头鲂幼鱼饲料中维生素B2最适添加量分别为5.21、4.65、6.02 mg/kg关键词：团头鲂；维生素B2；生长性能；体组成；抗氧化；肠道酶活性S963.73+1文献标志码： A：1002-1302（2016）05-0319-05维生素B2，又称核黄素，是动物必需的水溶性维生素之一，参与机体内氧化还原反应、细胞代谢和呼吸链反应[1]研究表明，鱼类缺乏维生素B2一般会呈现食欲减退和生长缓慢的症状[2]鲑属鱼类缺乏维生素B2时，除了生长缓慢，眼睛还会出现畏光、白内障、出血及角膜新生血管等症状[3-5]，大鳞大麻哈鱼（oncorhynchus tshawytscha）、虹鳟（Salmo gairdneri）还会出现体色变深和身体平衡失调等情况[4，6]；然而，Woodward在虹鳟幼鱼缺乏维生素B2试验中并未发现以上症状，但缺乏维生素B2的幼鱼却表现出严重的鳍部侵蚀、体色变浅和高死亡率的情况[7]此外，同种鱼类维生素B2的缺乏亦有不同表症例如，斑点叉尾（Ietalurus punetaus） 缺乏维生素B2时会出现单侧或2侧的白内障[8]，Murai等发现维生素B2的缺乏仅会导致斑点叉尾生长迟缓和体长变短[9]。

研究表明，维生素B2缺乏症具有明显的特异性，且与鱼类的种类、生长阶段、环境、食性等有着密切的联系鱼类饲料原料中的维生素B2水平并不能满足鱼类生长的需要，必须额外添加一定量的维生素B2进行补充[1-2]，充分说明维生素B2对鱼类生长的必要性Chen等发现，缺乏维生素B2会削弱草鱼（Ctenopharyngodon idella）幼鱼鳃部的抗氧化能力[10]；Yates等研究表明，维生素B2可提高大鼠（Rattus norvegicus）的胃肠道功能[11]；Li等也在对建鲤（Cyprinus carpio var. Jian）的研究中得出，饲料中添加维生素B2会促进其幼鱼消化能力的增强[12]前人研究指出，鱼类的生长和其抗氧化功能及肠道酶活性密切相关[10，13]，目前，尚未有文献直接指明饲料维生素B2水平与团头鲂（Megalobrama amblycephala）幼鱼抗氧化功能和肠道酶活性的关系，因此本试验开展团头鲂幼鱼营养需求相关方面的研究团头鲂是中国重要的草食性淡水经济鱼类[14]近年来，团头鲂的养殖量迅速增长[15]，但针对团头鲂营养需求的研究还很有限目前，团头鲂的营养需求研究主要集中在三大营养物质、氨基酸和脂溶性维生素等方面[16-20]，而水溶性维生素的研究尚较缺乏。

本试验着重探讨了团头鲂幼鱼的适宜维生素B2需求量及其对鱼体抗氧化功能和肠道酶活性的影响，以期为团头鲂维生素营养需求资料的完善提供理论基础，并为营养饲料配方提供科学依据1材料与方法1.1试验饲料本试验采用单因子设计，配制6组半纯合饲料，分别添加维生素B2水平为0、2、4、6、8、10 mg/kg[12]（饲料中维生素B2实际水平为1.66、2.83、4.29、6.15、8.37、11.28 mg/kg）试验饲料以进口的秘鲁鱼粉、酪蛋白和明胶为蛋白源，以豆油和鱼油为脂肪源（按照1 ∶1的比例添加），以玉米淀粉为糖源，以微晶纤维素作为填充物，以羧甲基纤维素钠为黏结剂[14]饲料原料先粉碎，按照配方称重后将各原料逐级均匀混合，充分混合后加入一定量的水再混合，然后用小型制粒机加工成粒径为2 mm左右的颗粒饲料，常温风干后置于4 ℃冰箱保存备用[14，16，18]饲料组成及营养成分见表11.2试验团头鲂及养殖管理试验鱼养殖于南京农业大学浦口试验基地室内流水系统中，驯化14 d，其间投喂不含维生素B2的基础饲料，驯化后挑选体格健壮、规格整齐、体质量为（41.520.15）g的幼鱼288尾，随机分成6组，每组4个重复，每个重复12尾。

每日饱食投喂3次（时间分别在07：30、11：30、16：30），养殖期为12周试验期间，全程微流水循环（1.5 L/min），水温控制在 25～30 ℃，pH值为7.0～7.5，全天24 h充氧1.3指标测定方法1.3.1生产性能统计和样本采集养殖结束后，将鱼饥饿24 h采样统计每缸的尾数并称总质量，从中随机取出6尾鱼逐尾称质量和测量体长，其中2尾鱼冰冻保存用以测定全鱼体组成，另外4尾鱼置于冰盘上解剖，取出内脏团称质量然后，分离出肝脏，用预冷的0.85%生理盐水清洗，用滤纸吸干并称质量，将其置于-70 ℃冷冻保存，用于抗氧化功能的测定；取肠道中段，并用生理盐水冲洗肠道内部清除内容物，将其置于-70 ℃冷冻保存，用于肠道酶活性的测定生产性能的计算公式如下：增质量率（WGR）=（mt-m0）/m0100%；特定生长率（%/d）=[ln（mt）-ln（m0）]/t100%；饵料系数（FCR）=F/（mt-m0）；肥满度（CF）=mt（g）/体长3（cm3）100%；肝体比（HSI）=肝脏质量（g）/全鱼质量（g）100%；脏体比（VSI）=内脏质量（g）/全鱼质量（g）100%；成活率（SR）=试验结束时总尾数/试验开始时总尾数100%。

式中：m0为鱼体初质量，g；mt为鱼体末质量，g；F为摄食量，g；t为饲养天数，d1.3.2样品测定饲料原料和团头鲂幼鱼全鱼概略养分测定参考AOAC的方法[21]将饲料和全鱼称质量后置于培养皿中，在（1052） ℃的烘箱中烘至恒质量测定水分水平粗蛋白（N6.25）水平采用全自动凯氏定氮仪（FOSS KT260，瑞士）测定；粗脂肪水平采用索氏抽提法测定（2050；FOSS Tector）；将样品置于电炉上炭化后，在马福炉中于（55020） ℃ 下灼烧5 h后测得饲料和全鱼中粗灰分水平；饲料总能采用氧弹测热仪（Parr 1281，美国）测定饲料及团头鲂幼鱼肝脏中维生素B2水平参考Callmer等的方法[22]测定肝脏组织匀浆液的制备及酶活性的测定：将肝脏准确称质量，以1 ∶4（组织 ∶生理盐水）的比例加入预冷的生理盐水后冰浴匀浆，然后于3 000 r/min离心10 min，收集上清液并存放于4 ℃冰箱待测肝脏D-氨基酸氧化酶（D-amino acid oxidation，D-AAO）活性参考Woodward的方法[23]进行测定肝脏超氧化物歧化酶（SOD）活性按照Jin等描述的方法[24]测定；还原型谷胱甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）水平参照Zhang等的方法测定[25]；过氧化氢酶（CAT）活性测定参考Jiang等的方法测定[26]。

肠道组织匀浆液的制备及酶活性的测定：将肠道准确称质量，按1 ∶9（组织 ∶生理盐水）加入预冷生理盐水后冰浴匀浆，制成20%组织匀浆，然后于3 000 r/min离心10 min，收集上清液并存放于4 ℃冰箱肠道蛋白酶采用福林-酚法[27]测定；淀粉酶和脂肪酶活性参考Furn等的方法[28]测定1.4数据统计与分析试验数据采用SPSS 19.0软件分析，结果以“平均值标准误”表示先进行单因素方差分析，采用Tukey氏法做多重比较分析组间差异显著程度，显著水平设定为P<0.052结果与分析2.1饲料维生素B2水平对团头鲂幼鱼生长性能和形体指标的影响饲料中维生素B2水平量对团头鲂幼鱼饵料系数、存活率和形体指标均无显著影响（表2）当饲料中维生素B2水平从1.66 mg/kg升至6.15 mg/kg时，团头鲂幼鱼的增质量率和特定生长率均显著增加；而当维生素水平进一步升高时，又显著下降以饲料中维生素B2水平为横坐标，团头鲂幼鱼增质量率为纵坐标进行双折线回归分析，得出y=4.032 7x+64.532（r=0.978 0）和y=-0.643 2x+88.905（r=0.943 2） 2个方程式对其求解，得出当饲料中维生素B2水平为 5.21 mg/kg 时，团头鲂幼鱼有最大增质量率（图1）。

2.2饲料维生素B2水平对团头鲂幼鱼肝脏维生素B2沉积量和D-氨基酸氧化酶活性的影响当饲料中维生素B2水平由1.66 mg/kg升至8.37 mg/kg时，团头鲂幼鱼肝脏中维生素B2沉积量显著增加；当维生素B2水平进一步升高时，则无显著差异饲料中维生素B2水平由1.66 mg/kg升至6.15 mg/kg时，团头鲂幼鱼肝脏D-AAO 活性显著增加；当维生素B2水平进一步升高时，则显著下降（表3）2.3饲料维生素B2水平对团头鲂幼鱼全鱼体组成的影响饲料中维生素B2水平对团头鲂幼鱼全鱼的水分、粗蛋白和粗灰分均无显著影响（表4）当饲料中维生素B2水平由1.66 mg/kg升至6.15 mg/kg时，团头鲂幼鱼全鱼粗脂肪含量显著增加；当维生素B2水平进一步增加时，则显著下降2.4饲料维生素B2水平对团头鲂幼鱼肝脏抗氧化功能的影响当饲料中维生素B2水平由1.66 mg/kg升至4.29 mg/kg时，团头鲂幼鱼肝脏中超氧化物歧化酶、还原型谷胱甘肽和过表4不同维生素B2水平对团头鲂幼鱼全鱼组成的影响维生素B2水平氧化氢酶都显著升高；当维生素B2水平进一步升高时，则显著下降饲料中维生素B2水平由1.66 mg/kg升至 2.83 mg/kg 时，团头鲂幼鱼肝脏丙二醛含量显著降低；当维生素B2水平进一步升高时，则差异不显著（表5）。

2.5饲料维生素B2水平对团头鲂幼鱼肠道消化酶活性的影响饲料中维生素B2水平由1.66 mg/kg升至4.29 mg/kg时，团头鲂幼鱼肠道蛋白酶活性显著升高，当维生素B2水平进一步升高时，则差异不显著；饲料中维生素B2水平由1.66 mg/kg 升至6.15 mg/kg时，团头鲂幼鱼肠道淀粉酶和脂肪酶活性显著升高，当维生素B2水平进一步升高时，淀粉酶活性则差异不显著，而脂肪酶活性显著下降（表6）3讨论与结论3.1饲料维生素B2最适需求量根据前人研究，有些鱼类缺乏维生素B2会出现眼球出血、畏光等情况[3-5]Deng等饲喂肉食性鱼类杂交鲈（Morone chrysops ♀ Morone saxatilis ♂） 8周试验中，出现上述缺乏症[1]而本试验中，团头鲂幼鱼却并未出现此种症状这可能是由于养殖试验环境、周期、鱼的种类和食性不同所致[1，12]鱼类缺乏维生素B2最为普遍的症状。