组织dna提取原理和步骤 详细
35页1、http:/ DNA Extraction,上海交通大学医学院,实验目的 学习从生物组织中提取DNA,为研究DNA的理化性质与结构功能打好基础。,上海交通大学医学院,提取DNA总的原则:,1 保证核酸一级结构的完整性; 2 其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到最低程度; 3 核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子; 4 其他核酸分子,如RNA,也应尽量去除。,上海交通大学医学院,粉碎组织DNP 裂解液 裂解细胞膜、核膜 DNP 苯酚、氯仿 DNA(RNA) RNA酶 Protase 苯酚、乙醇 纯DNA 紫外定量,原理:,上海交通大学医学院,各种组织细胞破碎方法,上海交通大学医学院,破裂细胞 、释放核酸,上海交通大学医学院,DNA酚抽提法示意图,上海交通大学医学院,DNA鉴定(DNA identification),浓度鉴定(concentration) 纯度鉴定(purity) 完整性鉴定(integrity),上海交通大学医学院,浓度鉴定 (concentration identification),1)紫外分光光度法(ultraviolet
2、 spectrophotometery) 测定DNA在A260nm的光吸收值。 A260稀释倍数50 g/ml 紫外分光光度法只用于测定浓度大于0.25ug/ml的核酸溶液。,(A值等于1时,相当于50g/ml双链DNA, 40g/ml单链DNA或RNA,20g/ml单链寡核苷酸),上海交通大学医学院,各种碱基的紫外吸收光谱,上海交通大学医学院,2)荧光光度法 荧光染料溴化乙锭(ethidium bromide,EB),可嵌入到碱基平面,而发出荧光,且荧光强度与核酸含量呈正比。 适用于低浓度核酸溶液的定量分析。(1-5ng),上海交通大学医学院,EB与DNA的结合,上海交通大学医学院,500l全血提取的基因组DNA电泳,动物组织提取基因组DNA,上海交通大学医学院,纯度鉴定(purity identification),紫外分光光度法: 在260nm和280nm处测定DNA溶液的光吸收,纯的DNA, A260与A280之比应在1.80;低于此值表明制备物中留有蛋白质成份。高于此值表明有RNA的残留量。 纯的RNA A260与A280之比应在2.0。 A260/A280比值是纯度检测的重
3、要指标。,上海交通大学医学院,完整性鉴定(integrity identification),凝胶电泳法: 基因组DNA电泳,在电场中泳动慢,如果发生降解,可出现电泳图谱脱尾现象; 总RNA电泳,观测各条带的含量,提示是否存在RNA降解;如加样槽中存在条带,可能是DNA污染。,上海交通大学医学院,核酸的贮存DNA保存 (storage),1)短期贮存: 4或-20存放于TE(tris和EDTA)缓冲液中。 TE缓冲液的pH与DNA 贮存有关,pH为8时,可减少DNA脱氨反应,pH低于7.0时DNA容易变性。 2)长期贮存: TE缓冲液中-70保存数年;在DNA溶液中加一滴氯仿可有效防止细菌和核酸的污染。,上海交通大学医学院,每克组织 + ml裂解液 组织匀浆器,匀浆 取2.0ml匀浆,加等体积苯酚-氯仿,摇匀5min, 2,500rpm 10min 取水相 加等体积氯仿-异戊醇,摇匀5min, 2,500rpm 10min,方法:,上海交通大学医学院,取水相 加5M NaCl至终浓度0.3M NaCl, 加2.5倍体积 冰无水乙醇 ,摇匀 见白色沉淀,玻棒挑起 DNA 70%乙醇洗涤一
《组织dna提取原理和步骤 详细》由会员suns****4568分享,可在线阅读,更多相关《组织dna提取原理和步骤 详细》请在金锄头文库上搜索。
土地管理与地籍测量---第八章界址点测量
人机工程学案例分析(2)
工程安全培训_201303
第9章房地产投资决策分析
第2章房地产经纪制度
ACM程序设计-东北林业大学acm05
《亲爱的汉修先生》读书交流会
中原_深圳新世界尖岗山项目市场汇报_40P_2012年_别墅_项目分析_量价走势
五年级数学质量分析演示文稿
人工智能小镇-智慧小镇建设20180525
景观基本知识及发展历程
建设工程信息管理(2)
机电驱动技术第二章步进驱动技术
工程力学-第9章圆轴扭转时的应力变形分析与强度刚度设计
第一章第二节幼儿园文化环境建设的原则
第一章检测技术的基础知识
第一章__现代表面工程技术
第六章钢结构工程
第9节项目试运行管理
班主任工作经验交流课件(4)
2023-12-11 28页
2023-12-11 28页
2023-12-11 27页
2023-12-11 31页
2023-12-11 27页
2023-12-11 27页
2023-12-11 33页
2023-12-11 28页
2023-12-11 26页
2023-12-11 29页