生物化学实验五——醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白 山东大学实验报告
3页1、实验五 醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白13生物基地 201300140059 刘洋 2015-04-29同组者:张奕一、实验目的掌握醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白的原理和方法。 二、实验原理蛋白质是两性电解质。在pH值小于其等电点的溶液中,蛋白质为正离子,在电场中向阴极移动;在pH值大于其等电点的溶液中,蛋白质为负离子,在电场中向阳极移动。血清中含有数种蛋白质,它们所具有的可解离基团不同,在同一pH的溶液中,所带净电荷不同,故可利用电泳法将它们分离。血清中含有清蛋白、-球蛋白、-球蛋白、-球蛋白等,各种蛋白质由于氨基酸祖坟、立体构象、相对分子质量、等电点及形状不同,在电场中迁移速度不同。由表可知,血清中5种蛋白质的等电点大部分低于pH值7.0,所以在pH8.6的缓冲液中,它们都电离成负离子,在电场中向阳极移动。蛋白质名称等电点相对分子质量白蛋白4.88690001-球蛋白5.062000002-球蛋白5.06300000-球蛋白5.1290000150000-球蛋白6.857.50156000300000在一定范围内,蛋白质的含量与结合的燃染料量成正比,故可将蛋白质区带剪下,分别用
2、0.4mol/L NaOH溶液浸洗下来,进行比色,测定其相对含量。也可以将染色后的薄膜直接用光密度计扫描,测定其相对含量。肾病、弥漫性肝损害、肝硬化、原发性肝癌、多发性骨髓瘤、慢性炎症、妊娠等都可以使白蛋白下降。肾病时1、2、球蛋白升高,-球蛋白降低。肝硬化时2、-球蛋白降低,而1、-球蛋白升高。三、实验器材1.醋酸纤维薄膜(2cm*8cm)2.人血清;3.烧杯及培养皿数只;4.点样器;5.镊子;6.玻璃棒;7.电吹风;8.恒温水浴锅;9.电泳槽;10.直流稳压电泳仪;11.剪刀 四、实验试剂1.巴比妥-巴比妥钠缓冲液2.染色液(可重复使用,使用后回收)3.漂洗液(100ml每组):95%乙醇45ml,冰醋酸5ml,水50ml4.透明液(20ml每组):无水乙醇14ml,冰醋酸6ml5.健康人血清(新鲜,无溶血现象)五、实验步骤1.薄膜浸泡:提前将醋酸纤维薄膜浸泡30min以上;2.电泳仪检查:水平检查,电源检查;3.电泳槽的准备:在两个电极槽中,各倒入等体积的电极缓冲液。将滤纸条对折,翻过来,用电极缓冲液完全浸湿,架在电泳槽的四个膜支架上,使滤纸一端的长边与支架前沿对齐,另一端浸入电
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