sars-covn蛋白与细胞色素p450(cyp4f3)相互作用的研究
26页1、军事预防医学专业优秀论文军事预防医学专业优秀论文 SARS-CoVSARS-CoV N N 蛋白与细胞色素蛋白与细胞色素P450P450(CYP4F3CYP4F3)相互作用的研究)相互作用的研究关键词:细胞色素关键词:细胞色素 冠状病毒冠状病毒 细胞免疫细胞免疫 体液免疫体液免疫 致病机理致病机理 非典型性肺炎非典型性肺炎 抗抗 原分子原分子摘要:N 蛋白是 SARS 冠状病毒(SARSCoV)的主要结构蛋白之一,与病毒 RNA 结合形成核衣壳,能够诱导强烈的细胞免疫和体液免疫,是 SARS 冠状病毒主要 的抗原分子,在 SARS 的诊断和预防上具有重要的应用。已有的研究表明, SARS-CoV N 蛋白参与 SARS 冠状病毒 RNA 合成的调控以及核衣壳的形成,并能 结合人亲环素(hCypA)解离病毒核心,激活 AP-1 信号转导途径,导致蛋白质类 泛素化,从而干扰宿主细胞分裂,在生长因子缺乏的情况下诱导细胞凋亡。在 我们的前期工作中,发现将表达 N 蛋白的质粒和表达 S 蛋白的质粒共同免疫家 兔后,家兔的 SARS 样炎症反应比单注射表达 S 蛋白质粒明显加重,提示 N 蛋白 在
2、 SARS 的发病中有增强炎症反应的作用。 为了研究 N 蛋白参与炎症反应的 分子机理,以全长 SARS-CoY N 蛋白为诱饵蛋白,利用酵母双杂交筛选人胎肝 cDNA 文库时,发现细胞色素 P450(CYP4F3)有可能与 SARS-CoV N 蛋白相互作用。 本研究通过一系列免疫沉淀、免疫印迹以及体外结合、BIACORE 等实验证明, CYP4F3 与 SARS-CoV N 蛋白在体内外均能直接结合形成复合物,CYP4F3 与 SAPS-CoVN 蛋白的 N 端和 C 端均有结合,两种蛋白的亲和常数 Klt;,Dgt;=4.310lt;#39;-11gt;,大于抗原一抗 体的亲和力(抗原-抗体的亲和常数大约为 10lt;#39;-10gt;)。 进一步的研究发现,SARS-CoY N 蛋白与 CYP4F3 结合可以抑制 CYP4F3 的 -羟 化酶活性,从而抑制炎症因子 LTBlt;,4gt;的降解。另外,还对临 床 SARS 病例血清样本 LTBlt;,4gt;进行了检测,结果发现,SARS 病 人早期血清 LTBlt;,4gt;水平明显高于发病 10 天以后,而且 SARS 病
3、人的 LTBlt;,4gt;水平远远高于普通肺炎病人。 本研究为 SARS 致病机理的进一步研究提供了重要线索。正文内容正文内容N 蛋白是 SARS 冠状病毒(SARSCoV)的主要结构蛋白之一,与病毒 RNA 结 合形成核衣壳,能够诱导强烈的细胞免疫和体液免疫,是 SARS 冠状病毒主要的 抗原分子,在 SARS 的诊断和预防上具有重要的应用。已有的研究表明,SARS- CoV N 蛋白参与 SARS 冠状病毒 RNA 合成的调控以及核衣壳的形成,并能结合人 亲环素(hCypA)解离病毒核心,激活 AP-1 信号转导途径,导致蛋白质类泛素化, 从而干扰宿主细胞分裂,在生长因子缺乏的情况下诱导细胞凋亡。在我们的前 期工作中,发现将表达 N 蛋白的质粒和表达 S 蛋白的质粒共同免疫家兔后,家 兔的 SARS 样炎症反应比单注射表达 S 蛋白质粒明显加重,提示 N 蛋白在 SARS 的发病中有增强炎症反应的作用。 为了研究 N 蛋白参与炎症反应的分子机理, 以全长 SARS-CoY N 蛋白为诱饵蛋白,利用酵母双杂交筛选人胎肝 cDNA 文库时, 发现细胞色素 P450(CYP4F3)有可
4、能与 SARS-CoV N 蛋白相互作用。本研究通过 一系列免疫沉淀、免疫印迹以及体外结合、BIACORE 等实验证明,CYP4F3 与 SARS-CoV N 蛋白在体内外均能直接结合形成复合物,CYP4F3 与 SAPS-CoVN 蛋白 的 N 端和 C 端均有结合,两种蛋白的亲和常数 Klt;,Dgt;=4.310lt;#39;-11gt;,大于抗原一抗 体的亲和力(抗原-抗体的亲和常数大约为 10lt;#39;-10gt;)。 进一步的研究发现,SARS-CoY N 蛋白与 CYP4F3 结合可以抑制 CYP4F3 的 -羟 化酶活性,从而抑制炎症因子 LTBlt;,4gt;的降解。另外,还对临 床 SARS 病例血清样本 LTBlt;,4gt;进行了检测,结果发现,SARS 病 人早期血清 LTBlt;,4gt;水平明显高于发病 10 天以后,而且 SARS 病人的 LTBlt;,4gt;水平远远高于普通肺炎病人。 本研究为 SARS 致病机理的进一步研究提供了重要线索。 N 蛋白是 SARS 冠状病毒(SARSCoV)的主要结构蛋白之一,与病毒 RNA 结合形 成核衣壳,能够
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