临床微生物基础操作规程

1、Ellen Jo Baron 教授美国斯坦福大学临床微生物室主任 “Manual of Clincal Microbiology“细菌学卷主编 ASM“Blood Culture“联合主编临床微生物基础操作规程血培养痰标本真茵培养厌氧培养药敏试验Urine Culture尿培养咽部标本培养脑脊液培养粪便培养生殖道标本培养脓，吸取物或组织标本标本类型运输培养基备注血直接将标本注入含 SPS 的血培养基从两个不同的部位采集足量的两 份血（每份血最少 10ml）脑脊液无室温保存大于 1ml 需要离心粪便如果运输时间超过 2 小时，使用 Cary-Blair 培养基（培养沙门菌 Use with proper attribution1脑脊液（脑脊液（CSF)培养培养主要病原菌：主要病原菌：B群溶血链球菌（新生儿），流感嗜血杆菌（2月-2岁儿童）， 肺炎链球菌，脑膜炎奈瑟氏菌最少群溶血链球菌（新生儿），流感嗜血杆菌（2月-2岁儿童）， 肺炎链球菌，脑膜炎奈瑟氏菌最少1ml，最佳，最佳5ml医生通过无菌皮肤 穿刺采集脑脊液 （腰椎穿刺）于无 菌管中。第二管和 第三管用于微生物 学检测。医生通过无菌

2、皮肤 穿刺采集脑脊液 （腰椎穿刺）于无 菌管中。第二管和 第三管用于微生物 学检测。# 11500g离心离心15分钟 （可能的话）分钟 （可能的话）# 2# 3 用吸管吸去用吸管吸去 上清，留下上清，留下 1cc的脑脊液沉淀的脑脊液沉淀注意：不要倾倒注意：不要倾倒# 4滴一滴沉淀滴一滴沉淀 于巧克力平皿和于巧克力平皿和 血平皿血平皿上下吸取上下吸取 10次以上次以上 混匀沉淀混匀沉淀# 5CO2中孵中孵 育育72小时小时# 6将一大滴沉淀将一大滴沉淀 滴在玻片上。滴在玻片上。 不要涂开。不要涂开。 自然干燥并进行革兰染色。自然干燥并进行革兰染色。 如见到大量多形核白细胞则如见到大量多形核白细胞则 强烈支持感染强烈支持感染# 7Ellen Jo Baron 2007; Use with proper attribution2#1 #2#3接种血平皿，麦康凯平皿，接种血平皿，麦康凯平皿，Hektoen 或或DCA，若怀疑弧菌则还接种，若怀疑弧菌则还接种TCBS 平皿。平皿。37 C 空气孵育空气孵育48h粪便标本采集后粪便标本采集后30 分钟内进行接种或分钟内进行接种或 置于置于cary-

3、blair运输运输 培养基中培养基中#4粪便培养粪便培养 重要的病原菌：沙门菌、志贺菌、弯曲杆菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌、产毒性大肠杆菌重要的病原菌：沙门菌、志贺菌、弯曲杆菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌、产毒性大肠杆菌 Use with proper attribution#5将菌落接种至将菌落接种至Campy琼脂琼脂 或使用滤纸法。微需氧环或使用滤纸法。微需氧环 境下境下37-42C孵育孵育72 h3CO2孵育孵育72h TM培培养养基基上上寻找淋寻找淋球菌球菌， 血血平皿上平皿上寻找寻找酵母菌酵母菌# 2血平皿血平皿 Use with proper attribution4脓，吸取物或组织标本脓，吸取物或组织标本 主要病原菌：金黄色葡萄球菌，化脓链球菌，其他溶血链球菌，铜绿假单胞菌，其他革兰阴性杆 菌。主要病原菌：金黄色葡萄球菌，化脓链球菌，其他溶血链球菌，铜绿假单胞菌，其他革兰阴性杆 菌。 非病原菌：凝固酶阴性葡萄球菌，少量的棒状革兰阳性杆菌非病原菌：凝固酶阴性葡萄球菌，少量的棒状革兰阳性杆菌用酒精消毒伤口 周围皮肤用酒精消毒伤口 周围皮肤 最好的标本是吸取物和组织最好的标本是吸取物和组

4、织 最差的标本是拭子最差的标本是拭子#1接种血平皿和麦康凯平皿接种血平皿和麦康凯平皿 如果是吸取物或组织，进行 革兰染色，将重要结果通知 临床医生如果是吸取物或组织，进行 革兰染色，将重要结果通知 临床医生#2#3铜绿假单 胞菌铜绿假单 胞菌中孵育中孵育48小 时小 时#4 对对1或或2种 重要病原菌进行鉴定种 重要病原菌进行鉴定 Use with proper attribution#55痰标本痰标本主要病原菌：肺炎链球菌，克雷伯菌属，流感嗜血杆菌，金黄色葡萄球菌，铜绿假单胞菌。主要病原菌：肺炎链球菌，克雷伯菌属，流感嗜血杆菌，金黄色葡萄球菌，铜绿假单胞菌。非病原菌：酵母菌，草绿色链球菌，凝固酶阴性葡萄球菌非病原菌：酵母菌，草绿色链球菌，凝固酶阴性葡萄球菌病人需用水清洁口腔， 深咳肺部痰， 不要唾液病人需用水清洁口腔， 深咳肺部痰， 不要唾液#1 进行革兰染色以评价标本是否适于接 种。进行革兰染色以评价标本是否适于接 种。 向临床医生尽快报告重要的革兰染色 结果向临床医生尽快报告重要的革兰染色 结果#2#3好：很少扁平 上皮细胞好：很少扁平 上皮细胞奥普托欣纸片奥普托欣纸片CO2中孵

5、育中孵育 48小时小时#4接种巧克力平皿，血接种巧克力平皿，血 平皿和麦康凯平皿平皿和麦康凯平皿#5拒绝：大量拒绝：大量 扁平扁平 上皮细胞上皮细胞肺炎克雷伯菌肺炎克雷伯菌对重要病原菌进行对重要病原菌进行 鉴定鉴定 Use with proper attribution奥普托欣奥普托欣流感嗜血杆菌流感嗜血杆菌 6咽部标本培养咽部标本培养 主要病原菌：主要病原菌：A群溶血链球菌。 选择性报告：溶血隐秘杆菌群溶血链球菌。 选择性报告：溶血隐秘杆菌拭子擦取咽部和 扁桃体。不要碰 触舌头和面颊。拭子擦取咽部和 扁桃体。不要碰 触舌头和面颊。将拭子擦拭血平皿（羊血 或马血）的将拭子擦拭血平皿（羊血 或马血）的1/5区域区域在第一区贴相邻的两纸片：复 方磺胺和杆菌肽在第一区贴相邻的两纸片：复 方磺胺和杆菌肽# 1拭子拭子# 2在烛缸中在烛缸中37 C孵育过夜并检查 平板；若阴性，继续孵育 过夜总孵育时间孵育过夜并检查 平板；若阴性，继续孵育 过夜总孵育时间48小时小时# 5# 3分区画线分区画线3或或4区区接种环接种环溶血菌落，溶血菌落， 0.5 mm, 对复方磺 胺耐药，对杆菌肽敏感对复方磺 胺

6、耐药，对杆菌肽敏感A群链球 菌（触酶阴性）群链球 菌（触酶阴性）# 4# 6杆菌肽杆菌肽Use with proper attribution不要报告不要报告 咽炎中非致病菌：咽炎中非致病菌：金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 肺炎链球菌肺炎链球菌 流感嗜血杆菌流感嗜血杆菌 卡他莫拉菌卡他莫拉菌 溶血链球菌溶血链球菌 所有革兰阴性杆菌所有革兰阴性杆菌 所有酵母菌所有酵母菌报告结果：报告结果：1+ to 4+ A群群溶血链球菌溶血链球菌 或 1+ to 4+ 非非A群群溶血链球菌溶血链球菌 或 未检出未检出溶血链球菌溶血链球菌# 8# 97#1ab bUrine Culture尿培养尿培养 主要病原菌：大肠埃希菌，变形杆菌，克雷伯菌，其他革兰阴性杆菌，肠球菌，腐主要病原菌：大肠埃希菌，变形杆菌，克雷伯菌，其他革兰阴性杆菌，肠球菌，腐 生葡萄球菌，纯的金黄色葡萄球菌生葡萄球菌，纯的金黄色葡萄球菌#2接种血平皿和麦康凯平 皿#3 空气孵育空气孵育24小时小时 收集中段尿收集中段尿a#4 菌落计数菌落计数0.001ml接种环接种环尿 尿培培养养的的评评估估标标准准 病病人人 标标本本类类型型 有有意

7、意义义的的病病原原菌菌 CFUCFU/ml/ml 无症无症状状 清清洁洁留留取取或留或留置管置管留留 取 取 100100,00,000 0 有症有症状状但但不不需需 卧床卧床 清洁清洁留取 留取 1 1- -2 2 种病种病原菌。原菌。 2 2 种视为种视为污污染染有症有症状状，性性生生 活活活活跃跃的的女女性性清洁清洁留取 留取 1 10 00 0纯培纯培养的肠养的肠杆菌科杆菌科菌菌 男性男性 清清洁留洁留取取 1 10 00 00 0潜潜在在病病原菌原菌 所所有有 从从导导尿尿管中管中直接直接留取 留取 1 10 00 0个所个所有种类有种类的潜在的潜在病原菌病原菌 所所有有 外外科科或或膀胱膀胱吸取吸取 任任何数何数量（肉量（肉汤增菌汤增菌，厌，厌氧菌）氧菌） 所所有有 有有争争议议 任任何酵何酵母菌 母菌 若若 2 种菌生长，对种菌生长，对 每种菌进行鉴定和药每种菌进行鉴定和药 敏试验；敏试验；若若2种菌生长，报种菌生长，报 告告“混合菌群混合菌群”#5注意注意: 革兰阴性杆菌在血平革兰阴性杆菌在血平 皿和麦皿和麦 康凯平皿上均康凯平皿上均 生长良好生长良好 革兰阳性球菌仅在

8、血革兰阳性球菌仅在血 平皿上生长良好平皿上生长良好GNRGNR#675,000 cfu/ml50,000 cfu/ml100,000 cfu/mlEllen Jo Baron 2007; Use with proper attributionGPCGPC8#1#2常规：接种沙氏平皿和常规：接种沙氏平皿和 Mycobiotic培养基。培养基。30C 空气孵育四周。空气孵育四周。对于皮肤癣菌：接种对于皮肤癣菌：接种 Mycobiotic和和DTM培养基培养基组织，皮肤刮取物或指甲：将组织，皮肤刮取物或指甲：将 一小块完整的标本插入琼脂表一小块完整的标本插入琼脂表 面面#3重要的真菌：组重要的真菌：组 织活检，痰，脑织活检，痰，脑 脊液，血培养脊液，血培养皮肤癣菌：皮肤皮肤癣菌：皮肤 刮片，指甲刮片刮片，指甲刮片 ，根部的头发，根部的头发不要研磨组织：不要研磨组织： 使用解剖刀将其使用解剖刀将其 切成小块切成小块#4真菌培养真菌培养 重要病原菌：新型隐球菌，人芽囊原虫重要病原菌：新型隐球菌，人芽囊原虫，皮肤癣菌，和，皮肤癣菌，和 其他真菌（考虑标本来源和病人情况）其他真菌（考虑标本来源和病人

9、情况）拭子仅用于酵母菌的分离拭子仅用于酵母菌的分离 接种血平皿和沙氏平皿接种血平皿和沙氏平皿#6Ellen Jo Baron 2008; Use with proper attribution将标本研于一滴将标本研于一滴 10%KOH，加盖玻片后，加盖玻片后 镜检真菌镜检真菌接种后接种后7天内每日观察平皿天内每日观察平皿 ，之后每周两次，之后每周两次光滑菌落酵母菌光滑菌落酵母菌毛状菌落丝状真菌毛状菌落丝状真菌用通气胶带粘贴平皿的侧面用通气胶带粘贴平皿的侧面 或两边或两边#59抽吸物和组织标本的厌氧培养抽吸物和组织标本的厌氧培养 主要致病菌主要致病菌: 金黄色葡萄球菌、化脓链球菌、其他金黄色葡萄球菌、化脓链球菌、其他-溶血链球菌、铜绿假单胞菌、其他革兰阴性杆 菌、 梭状芽孢杆菌、 梭菌属、拟杆菌属、其他厌氧菌溶血链球菌、铜绿假单胞菌、其他革兰阴性杆 菌、 梭状芽孢杆菌、 梭菌属、拟杆菌属、其他厌氧菌 非致病菌非致病菌: 凝固酶阴性葡萄球菌、少量棒状革兰阳性杆菌凝固酶阴性葡萄球菌、少量棒状革兰阳性杆菌用酒精消毒皮肤后或者在手术时 采集标本用酒精消毒皮肤后或者在手术时 采集标本 将抽吸物或组织置于厌氧转运小 玻璃瓶中将抽吸物或组织置于厌氧转运小 玻璃瓶中 拭子不能用于厌氧培养拭子不能用于厌氧培养 将体液置于血培养瓶和将体液置于血培养瓶和ACD管中管中#1#2#3在在CO2孵箱中将孵箱中将 BAP Use with proper attribution#5.如果为组织，在无菌的小盘上将如果为组织，在无菌的小盘上将 其捣碎，然后在含硫肉汤中将其其捣碎，然后在含硫肉汤中将其 研磨成匀浆研磨成匀浆将研磨后的组织接种于将研磨后的组织接种于BAP, Mac, Bru, BBE, CM肉汤肉汤, Use with proper attribution11#1 特殊药敏试验（琼脂扩散法）特殊药敏试验（琼脂扩散法）# 1 MRSA总使用直接悬液接种平 板总使用直接悬液接种平 板用用CLSI的标准来解读不的标准来解读不 同的药物和抗生素组合同的药物和抗生素组合 的药敏结果的药敏结果苯唑西林苯唑

《临床微生物基础操作规程》由会员n****分享，可在线阅读，更多相关《临床微生物基础操作规程》请在金锄头文库上搜索。