丹葛冲剂对脑缺血小鼠脑内凋亡相关基因bcl2、cfos的干预作用
52页1、北京中署禁大辱B E I J I N GU N I V E R S I T Y O F C H I N E S E M E D I C I N E 硕士研究生学位论文题目:丹葛冲莉对j 脚她小鼬内凋亡相关基因b c l 一2 、c - l o s 的干预作用专业研究方向硕士生导师中医临床基础金匮要略中风病的实验研究 厍宇尉中民教授o O 六年五月中文摘要中文摘要中风是中老年人的常见病,具有高发病率、高死亡率和高致残率的特点,严重威胁着人类的生命和健康。中风属于急性脑血管病,可分为出血性脑血管病,包括脑出血和蛛网膜下腔出血;以及缺血性脑血管疾病( A I C V D ) ,包括脑血栓形成、脑梗塞、腔隙性脑梗死和短暂性脑缺血发作( T I A ) 等。由于缺血性脑卒中的发病率远高于出血性脑卒中,因此,研究和防治缺血性脑卒中,减少死亡率和致残率,已成为当前医学的攻关重点,是卫生工作和科学研究的一项重要课题。在缺血性脑卒中急性期的治疗中,目前文献报道尚无特效的疗法,其治疗关键是尽早恢复血流,但是随之而来的再灌注本身亦可引起再灌注损伤,缺血的组织器官在恢复血流再灌时,不仅不能使组织、器官功能恢复
2、,反而加重组织、器官的功能障碍,甚至使缺血时的可逆损伤转化为不可逆损伤。目前许多研究证实中医中药在对缺血性脑血管病的治疗和防护方面取得了巨大的进展,尤其在对脑缺血再灌注损伤的防治方面显示出了极大的优势。在脑缺血再灌注损伤的过程中,凋亡起重要作用。目前大量的研究表明细胞凋亡的发生是由基因控制的,各种基因和蛋白在细胞凋亡中的作用各不相同,分为抑凋亡基因和促凋亡基因两大类。近年来,已开展了许多中药对脑缺血后神经细胞凋亡影响的实验研究,并且取得了较大成绩。本课题选用抑凋亡基因B c l 一2 和促凋亡基因c - f o s 作为研究对象,应用免疫组化法观察其在脑缺血再灌注小鼠神经细胞中的变化,及中药对其表达的影响,从而探寻中药对脑缺血再灌注损伤的防治机制。本文研究的中药丹葛冲剂,主要由丹参和葛根等药组成,具有活血化瘀、行血通络的作用,实验报道亦证实,丹参、葛根对缺血性脑血管病有非常好的疗效。本实验从分子生物学水平探讨中医药对脑缺血再灌注损伤的防治作用及机理,旨在为中医临床的治疗提供实验依据。本文分为文献篇和实验篇两部分,在文献综述部分,首先对近l O 年来中医药防治缺血性脑血管病所取的进展作一
3、回顾;其次,对脑缺血后神经细胞凋亡相关基因的研究进展作了全面综述;同时,对后世应用经方治疗中风作一概述;最后,试就金匮要略中风篇的学术渊源及其学术成就做一简要论述。在实验研究部分,本实验研究选用了小鼠实验性不完全脑缺血再灌注模型。首先,采用H E 染色法,观察丹葛冲剂对脑缺血再灌注后脑组织形态学的影响。其次,采用免疫组化法,研究观察小鼠脑缺血再灌注损伤后c f o s 、b c l 一2 的表达及丹葛冲剂对c f o s 、b c l 一2 表达的影响,探讨丹葛冲剂防治缺血性脑血管病凋亡方面的作用机制。中药丹葛冲剂作用于脑缺血再灌注损伤实验分为正常对照组,模型组即脑缺血再灌注组,中药组即丹葛冲剂组。实验各组( 除正常组外) 分别于造模后3 0 m i n 、6 h 、3 天、5 天( d ) 后取材,用免疫组化技术检测小鼠脑细胞缺血再灌注后c - f o s 、b c l 一2 表达的变化及观察H E 染色显示脑组织形态学的变化。!苎曼韭型翌堕壁垒尘璺堕堕塑圭塑差墨里! ! ! :! :! :垄! 堕王堡堡旦主要实验结果如下:1 中药组大脑皮层及海马中C - f o s 蛋白表达阳性细
4、胞不论从数量还是染色深度均明显低于模型组,提示丹葛冲剂对缺血再灌注诱导的c f o s 基因表达有部分抑制作用。2 中药组大脑皮层及海马中b c l 一2 蛋白表达阳性细胞不论从数量还是染色深度均明显高于模型组,提示丹葛冲剂可促进缺血再灌注后b c l 一2 基因的表达。3 脑组织病理形态学观察可见:( 1 ) 模型组:C A l 区、C A 3 区细胞数目减少,神经元变性或核固缩,深染,部分细胞轮廓消失。( 2 ) 中药组:C A l 区、C A 3 区细胞数目有所减少,但多于模型组,也出现神经元变性和核固缩,但存在的正常神经元远远多于模型组。结论:实验采用的不完全脑缺血再灌注模型,结果稳定可靠。研究表明丹葛冲剂对脑缺血再灌注损伤具有一定的保护作用。其作用机制表现在中药丹葛冲剂可有效下调脑缺血再灌注后促凋亡基因c f o s 的异常表达,上调抑凋亡基因b c l 一2 的表达。主题词:b c l - 2 ;c - f o s ;丹葛冲剂;脑缺血再灌注;小鼠英文摘要3E x p e r r i m e n t a lS t u d yo fE f f e c to n “D a n g
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