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鸭瘟病毒UL28基因的克隆、鉴定及序列分析

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1、农业生物技术学报，2010年，第18卷，第8期，第737745 010， 8，737究报告 A 瘟病毒定及序列分析娄昆鹏程安春汪铭书朱德康。贾仁勇罗启慧孝跃t 1 t)安625014；2动物疫病与人类健康t安625014 通讯作者，程安春：63铭书：63要对已构建的鸭瘟病毒(合析得到了克隆载体，获得完整基因。经测序、一步用核酸探针斑点杂交确认完整片段(于号运用生物信息学分析软件2、用果显示，其具有疱疹病毒员的典型特征，包含1个保守结构域：疱疹病毒加工和组装蛋白(并含有多个与功能相关的磷酸化和N糖基化位点，编码多肽疏水区大于亲水区，是一种膜外蛋白。【一疱疹病毒1的亲缘关系最近。关键词鸭瘟病毒，隆，序列分析 a25014， a 25014，63 630 396967479682010040 NA 2)t CR 8一T he CR it by to 2 NAby 2，so to he of 8 it of it a of of it to In 8 in 28 039696747968201004018 基金项目：本研究由教育部“和创新团队发展计划”创新团队项目(国家自然

2、科学基金项目(0771598)、现代农业产业技术体系建设专项资金资助(No高等学校科技创新工程重大项目培育资金项目(06050)共同资助收稿日期：200903一受日期：20090538 。鸭瘟(P)，又名鸭病毒性肠炎()，是危害鸭、鹅及其他雁形目禽类的一种急性、接触性、败血性传染病，以血管损伤、消化道出血坏死、淋巴器官受损和实质性器官退形性变化为主要特征(005)。该病首次报道于荷兰。 1959年，黄引贤在我国首次发现该病的存在目前已成为严重威胁养鸭业的主要疫病之一。鸭瘟病毒属于疱疹病毒科，暂时被列为疱疹病毒亚科，根据国际病毒分类委员会(八次报告属的分类地位尚未确定。鸭瘟病毒为线性双链分子生物学研究相对落后于其它疱疹病毒，基因组结构尚未公布。目前，对et 2006；Li et 2006；et 2007)。迄今为止，国内外还没有基因编码蛋白在鸭瘟病毒的组装复制过程中扮演着重要的角色(et 因此研究具有重要的理论和实际意义。本研究依托动物疫病与人类健康四川省重点实验室构建的鸭瘟病毒(基冈文库和测序获得的号为设计特异性引物，克隆了因完整片段，并将序列与其他具有代表性种属的疱疹病毒，以期为依据系统的序列分析和密码子偏爱性分析将对后续的表达载体选择和表达蛋白功能研究提供指导意义 1结果与分析 11核酸序列的测定分析选取实验室构建的的重组菌抽提质粒并测序，测序片段拼接后用 12 ，该相似性。 12 据设计的扩增引物，以提取的板增出的预期条带见图1。扩增产物经胶回收纯化后，连接至细胞到的克隆命名为隆基因测序长度为2 412 预期一致。该序列已提交录号为后培植克隆菌并抽提质粒进行2)和双酶切鉴定 (图3)。 500 3000 2000一】200 800 5M 2412 图1 ：： 242质粒：1： CR ：1：500 5000 图3质粒：和双酶切 8：+ 印湖瑚跏姗 3， l 鸭瘟病毒定及序列分析 3 核苷酸探针能与NA质粒与鹅细小病毒(伪狂犬病毒 (鸭病毒性肝炎病毒(鸡传染性喉气管炎病毒 (鸡马立克氏病毒(s 番鸭细小病毒 (未接毒的鸭胚成纤维细胞(提的核酸杂交均呈不显色的阴性(图4)。 14生物信息学分析 141 用发现含有名为疱疹病毒加工和组装蛋白保守区(图5)，可以看 00 位氨基酸这个蛋白家族的成员在

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