新型重组人内毒素结合肽突变体的设计与构建

1、第三军医大学研究生学位论文独创性声明 秉承学校严谨的校风和科研作风，本人申明所呈交的论文是我本人在 导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别 加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究 成果，也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料， 与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明 并表示谢意。 申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。 论文作者签名：社日期：礁乌丝巫旦 第三军医大学研究生学位论文版权使用授权书 本人完全了解第三军医大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在 攻读学位期间论文工作的知识产权单位属第三军医大学。本人保证毕业离 校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为第三军医大学。学校有 权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查 阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容( 保密内容除外) ，可 以采用影印、缩印或其他手段保存论文。 论文作者签名：三冬越选 指导教师签名：舀垒少 日 期：冱! 益色痘至旦 英文缩写一览表 英文摘要 中文摘要 论文正文新

2、型重组人内 U 一 刚舌 第一部分重组人内 实验材料 实验方法 实验结果 讨论 第二部分重组人内 实验材料 实验方法 结果 讨论 全文总结 致谢 参考文献 文献综述内毒素拮抗肽 参考文献 攻读硕士学位期间发表的 第二军医人学硕十学位论文 英文缩写 B p C D C D R D N A d d H 2 0 E D T A G H H R P I L 一6 I P T G K a n K D L B L P S L B P L A L F M M i n M L M W O D P C R P A G E S D S T A E T r i s 英文缩写一览表 英文全称 中文全称 B a s ep a i r碱基对 C l u s t e ro fd i f f e r e n t i a t i o n分化群 C o m p l e m e n t a r i t yd e t e r m i n i n gr e g i o n 互补决定区 D e o x v r i b o n u c l e i ca c i d脱氧核糖核酸 D o u b l ed i s t i l l a

3、t e dw a t e r双蒸水 E t h y l e n e d i n i t r i l ot e t r a a c e t i ca c i d 乙二胺四乙酸 G r a m 克 H o u r 小时 H o r s e r a d i s hp e r o x i d a s e辣根过氧化物酶 I n t e r l e u k i n 6白介素一6 I s o p r o p y l t h i o 一1 3 一D g a l a c t o s i d e 丙基硫代一p D - 半乳糖苷 K a n a m y c i n 卡那霉素 K i l o d a l t o n s千道尔顿 L u r i a - B e r t a n im e d i u mL B 培养基 L i p o p o l y s a c c h a r i d e 脂多糖 L i p o p o l y s a c c h a r i d eb i n d i n gp r o t e i n 脂多糖结合蛋白 L i m u l u sa n t i L P Sf a c t o r鲎抗内

4、毒素因子 M o l L摩尔浓度 M i n u t e分钟 M i l l i l i t e r 毫升 M o l e c u l a rw e i g h t 分子量 O p t i c a ld e n s i t y光密度 P o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n逆转录多聚酶链反应 P o l y a c r y l a m i d eg e le l e c t r o p h o r e s i s聚丙烯酰胺凝胶电泳 S o d i u md o d e c y ls I - t l f a t e十二烷基磺酸钠 T r i s a c e t a t e ( b u f f e r ) T r i s Z _ _ , 酸电泳缓冲液 T r i s ( h y d r o x y m e t h y l ) a m i n o m e t h a n e三羟甲基氨基甲烷 l 第三军医人学硕士学位论文 T L R 一4 T B S T B S T T Eb u f f e r G G l y AA l a VV a l LL e

5、 u II l e FP h e PP r o W T r p S S e r C C y s MM e t NA s n Q G i n D A s p E G l u K L y s R A r g T h eT o l l l i k er e c e p t o r s - 4 T r i s b u f f e r e ds a l i n e T r i s b u f f e r e ds a l i n e T w e e n T r i s C 1 ，E D T Ab u f f e r G l y c i n e A l a n i n e V a l i n e L e u c i n e I s o l e u c i n e P h e n y l a l a n i n e P r o l i n e T r y p t o p h a n S e r i n e C y s t e i n e M e t h i o n i n e A s p a r a g i n e G l u t a m i n e A s p a r t i ca c i d G

6、 l u t a m i ca c i d L y s i n e A r g i n i n e 2 钟型样受体4 T r i s 缓冲液 T r i s 吐温缓冲液 乙二胺四乙酸缓冲液 甘氨酸 丙氨酸 缬氨酸 亮氨酸 异亮氨酸 苯丙氨酸 脯氨酸 色氨酸 丝氨酸 半胱氨酸 蛋氨酸 天冬酰胺 谷氨酰胺 天冬氨酸 谷氨酸 赖氨酸 精氨酸 第三军医大学硕士学位论文 g n i n ga n d ；o n s t r u c t i o no ft h er e c o m b i n a n tmutantD a nC O U s t r U C t i O nO It l l em u t a n to f0 t h u m a ne n d o t o x i nb i n d i n gp e p t i d e A -_- - - 一 B a c k g r o u n da n do b j e c t i v e A b s t r a c t L i p o p o l y s a c c h a r i d eb i n d i n gp r o t e i n ( L B

7、 P ) i sav i t a lc a r r i e rp r o t e i nm o l e c u l a rw h i c h c a nb i n dw i t hL i p o p o l y s a c c h a r i d e ( L P S ) a n di t sC - t e r m i n a lb i n d st h eC D14 ，t h e nf o r m sa t r i a d - - c o m p l e xo fL P S - L B P - - C D l 4a n dt r i g g e r sT L R 4 - - M D 2 - M y D 8 8c o m p l e xt o i n i t i a t e i n t r a c e l l u l a rs i g n a lt r a n s d u c t i o n ，S Oa st ol e a dt h ea c t i v a t i o no fn u c l e a rf a c t o r k B ( N F - k B ) a n dc y t o

8、 k i n er e l e a s e M a n ys t u d i e sh a v es h o w nt h a tt h ed e r i v e dp e p t i d e so fn a t u r a lp r o t e i n s ， s u c ha sL B P , B P Ia n dL A L F , h a v et h ea b i l i t yo fb i n d i n ga n dn e u t r a l i z i n ge n t o d o x i n ，t h e n i n h i b i tL P S - i n d u c e di n f l a m m a t o r yr e s p o n s ei nv i t r oa n dv i v o A tt h es a m et i m e ，t h e yh a v ea c o m m o nf e a t u r et h a tt h ed o m a i no ft h o s en a t u r a lp r o t e i n sb i n d i

9、n gw i t hL P Sa r er i c hi n p o s i t i v ec h a r g ea n dh y d r o p h o b i ca m i n oa c i d s T h em o l e c u l a rs t r u c t u r eo fL P Sc o n t a i n s n e g a t i v e l yc h a r g e dp h o s p h a t eg r o u p sa n dh y d r o p h o b i cl o n g - c h a i nf a t t ya c i d s ，w h i c ha r e e a s i l yc o m b i n e dw i t hap o s i t i v e l yc h a r g e da n dh y d r o p h o b i cm o l e c u l a r T h e r e f o r e ，b y r e p l a c eo ft h ea m i n oa c i d s ，I n c r e a s i n gt h en u m b e ro fp o s i t i v ec h a r g ea n dh y d r o p h o b i c i t y m a yl e a dt oi n c r e a s et h ea c t i v i t yo fp e p t i d e st or e s i s te n d o t o x i n H o w e v e r , d i f f e r e n ta m i n o a c i d sh a v ed i f f e r e n te l e c t r i cc h a r g ea n dh y d r o p h o b i c i t y , a n yr e p l a c e m e n to far e s i d u eo f a m i n oa c i dC a nc h

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