氯仿甲醇提取贝氏柯克斯体残存组分q热疫苗的免疫原性和免疫保护性的实验研究
2页1、2 0 0 7 年中国微生物学会学术年会 1 0 5 氯仿一甲醇提取贝氏柯克斯体残存 组分Q 热疫苗的免疫原性和免疫 保护性的实验研究 孙长俭温博海 ( 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物 生物安全国家重点实验室,北京) 贝氏柯克斯体( C o x i e l l ab u m e t i i ,又称Q 热立克次体) 为Q 热病原体。该病原体为 专性细胞内寄生菌,可通过气溶胶传播,对人和动物的感染性极强,是一种重要的生物 战剂生物恐怖剂。人、畜对贝氏柯克斯体普遍易感,畜牧相关从业人员是高危人群。 不管是预防贝氏柯克斯体自然感染还是防生物武器生物恐怖均需要有效的Q 热疫苗 对易感人群进行免疫接种。 本研究采用贝氏柯克斯体国内分离株在鸡胚大量繁殖,从感染鸡胚中分离、纯化贝 氏柯克斯体,用甲醛灭活纯化贝氏柯克斯体,制备全细胞疫苗( w c v ) 。同时采用氯仿 一甲醇提取w c v ,制备氯仿一甲醇提取残存组分疫苗( C M R ) 。采用高压气相色谱测 定了两种疫苗的脂肪酸,发现C M R 较W C V 减少了1 1 种脂肪酸,其中4 种为不饱和脂 肪酸,4 种为支链脂肪酸,7
2、0 为C 原子数1 8 的较长链的脂肪酸。另外,两种疫苗的 支链脂肪酸与直链脂肪酸、不饱和脂肪酸与饱和脂肪酸的比值也明显不同。通过蛋白 单相及双向电泳分析两种疫苗蛋白,它们的蛋白电泳图谱和主要高丰度蛋白点的蛋白 丰度均无明显差异。 采用C M R 和W C V 免疫B l a h C 小鼠,间接免疫荧光法分析免疫小鼠血清特异性抗 体水平,结果显示C M R 与W C V 一样均能诱导高水平特异性抗体产生。C M R 加A l ( O H ) 3 佐剂免疫小鼠,该免疫小鼠特异性抗体水平显著高于C M R 单独免疫。用M r I - I 法体外分析免疫小鼠脾脏淋巴细胞增殖,结果显示C M R 诱导小鼠脾脏淋巴细胞增殖水 平显著高于W C V ,而W C V 对小鼠淋巴细胞增殖有一定程度的抑制。免疫小鼠体内、外 细胞因子的测定结果显示,C M R 疫苗能诱导T N F a 、I N F 一y 及I L 一1 0 等多种细胞因 子的分泌。 用I 相贝氏柯克斯体毒株( 包括疫苗制备株和国外分离株) 攻击免疫小鼠,用荧光 定量P C R 分析小鼠脾脏贝氏柯克斯体的含量。结果显示C M R 与W C
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