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氯仿甲醇提取贝氏柯克斯体残存组分q热疫苗的免疫原性和免疫保护性的实验研究

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  • 上传时间:2019-12-15
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    • 1、2 0 0 7 年中国微生物学会学术年会 1 0 5 氯仿一甲醇提取贝氏柯克斯体残存 组分Q 热疫苗的免疫原性和免疫 保护性的实验研究 孙长俭温博海 ( 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物 生物安全国家重点实验室,北京) 贝氏柯克斯体( C o x i e l l ab u m e t i i ,又称Q 热立克次体) 为Q 热病原体。该病原体为 专性细胞内寄生菌,可通过气溶胶传播,对人和动物的感染性极强,是一种重要的生物 战剂生物恐怖剂。人、畜对贝氏柯克斯体普遍易感,畜牧相关从业人员是高危人群。 不管是预防贝氏柯克斯体自然感染还是防生物武器生物恐怖均需要有效的Q 热疫苗 对易感人群进行免疫接种。 本研究采用贝氏柯克斯体国内分离株在鸡胚大量繁殖,从感染鸡胚中分离、纯化贝 氏柯克斯体,用甲醛灭活纯化贝氏柯克斯体,制备全细胞疫苗( w c v ) 。同时采用氯仿 一甲醇提取w c v ,制备氯仿一甲醇提取残存组分疫苗( C M R ) 。采用高压气相色谱测 定了两种疫苗的脂肪酸,发现C M R 较W C V 减少了1 1 种脂肪酸,其中4 种为不饱和脂 肪酸,4 种为支链脂肪酸,7

      2、0 为C 原子数1 8 的较长链的脂肪酸。另外,两种疫苗的 支链脂肪酸与直链脂肪酸、不饱和脂肪酸与饱和脂肪酸的比值也明显不同。通过蛋白 单相及双向电泳分析两种疫苗蛋白,它们的蛋白电泳图谱和主要高丰度蛋白点的蛋白 丰度均无明显差异。 采用C M R 和W C V 免疫B l a h C 小鼠,间接免疫荧光法分析免疫小鼠血清特异性抗 体水平,结果显示C M R 与W C V 一样均能诱导高水平特异性抗体产生。C M R 加A l ( O H ) 3 佐剂免疫小鼠,该免疫小鼠特异性抗体水平显著高于C M R 单独免疫。用M r I - I 法体外分析免疫小鼠脾脏淋巴细胞增殖,结果显示C M R 诱导小鼠脾脏淋巴细胞增殖水 平显著高于W C V ,而W C V 对小鼠淋巴细胞增殖有一定程度的抑制。免疫小鼠体内、外 细胞因子的测定结果显示,C M R 疫苗能诱导T N F a 、I N F 一y 及I L 一1 0 等多种细胞因 子的分泌。 用I 相贝氏柯克斯体毒株( 包括疫苗制备株和国外分离株) 攻击免疫小鼠,用荧光 定量P C R 分析小鼠脾脏贝氏柯克斯体的含量。结果显示C M R 与W C

      3、 V 一样能有效保 护小鼠抵抗贝氏柯克斯体的攻击。用小剂量C M R 加A l ( O H ) 3 佐剂免疫小鼠,其免疫 1 0 6 2 0 0 7 年中国微生物学会学术年会 保护效果与高剂量C M R 单独免疫相当。 用大剂量W C V 免疫小鼠,在接种部位出现皮下结节,小鼠的脾脏明显肿大,组织 病理学检查脾脏有不同程度的网状内皮增生。检查免疫小鼠肝脏功能指标,A L T 和 A S T 均明显升高。而相同大剂量C M R 免疫小鼠则无上述病理学变化。 W C V 疫苗是目前唯一得到美国F D A 批准应用的Q 热疫苗,虽然其具有良好的免 疫保护效果,但其明显的副作用使得其应用受到严格限制。本研究结果证明采用国内 分离株制备的C M R 疫苗与W C V 疫苗的免疫保护效果相当,C M R 疫苗的良好免疫保护 效果与其高效诱导机体的体液和细胞免疫应答相一致。但是,C M R 疫苗的副作用明显 小于W C V 。C M R 疫苗的低毒性是由于氯仿一甲醇提取W C V 后,清除引起机体损伤的 某些脂类或显著降低某些脂类含量密切有关。 通讯作者温博海简历: 博士生导师,中国人兽共患病病原学

      4、专业委员会副主任委员,中国人兽共患病杂志 副主编。 1 9 7 8 毕业于江西医学院医学系,1 9 9 4 年第三军医大学研究生毕业,毕业后留校从 事医学微生物学教学与科研。1 9 9 0 年赴美国O h i o 州立大学分子遗传系和病原生物学 系做访问学者,1 9 9 6 年回国任第三军医大学微生物学教授,2 0 0 1 年调任军事医学科学 院微生物流行病研究所立克次体学专业实验室主任。 长期从事立克次体等胞内寄生茵的致病性与免疫性以及新病原茵的分离与鉴定等 方面的研究,在JC l i nM i c r o b i o l 、M i c r o b i o l o g y 、I n tJS y s tB a c t e r i o l 、A n nNYA c a dS c i 、A c t a V i r o l 、E x p e rM o lP a t h o l 、中华微生物学和免疫学杂志、中华流行病学杂志、中国人兽共患 病杂志等国内外著名杂志上发表研究论文8 0 余篇,获军队科技进步二等奖2 项。目前 的研究方向为分子细茵学和抗感染免疫,主要从事立克次体感染疫苗以及立克次体病 原茵的分离与鉴定等研究。 禽致病性大肠杆菌耐药性及毒力 相关基因的分子流行病学 秦爱建金文杰邵红霞 ( 扬州大学江苏省动物预防医学重点实验室,江苏扬州,2 2 5 0 0 9 ) 多年来,大肠杆菌病一直困扰着畜牧业的健康发展,特别是禽大肠杆菌病对养禽业 的影响越来越严重,每年造成的经济损失数以亿计,由于缺乏有效的疫苗,禽大肠杆菌

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