转化生长因子β在妊娠期肝内胆汁淤积症患者胎盘上的表达及意义

1、四川大学博士学位论文转化生长因子-在妊娠期肝内胆汁淤积症患者胎盘上的表达及意义姓名：艾瑛申请学位级别：博士专业：妇产科学指导教师：曹泽毅刘淑芸20030501博士学位论文转化生长因子13及其受体在妊娠期肝内胆汁淤积症患者胎盘上的表达及意义导师：曹泽毅教授刘淑芸教授研究生：艾瑛摘要l目的】妊娠期肝内胆汁淤积症(Intrahepaticcholestasisofpregnancy，ICP)是妊娠期特有的疾病，对胎儿危害极大，其病因和发病机理尚不明确。近年来有研究发现该病的发生与妊娠期母儿间的免疫耐受免疫排斥平衡紊乱有关。转化生长因子0(transinggrowthfactor日，TGF一13)在妊娠期起着重要的免疫调节作用。本文探讨了胎盘TGFB的表达在ICP发病中的意义。方法采用免疫组织化学染色技术(SP法)检测ICP患者和正常妊娠胎盘组织中TGF-Bl、2、3三种亚型和两种功能型受体(TGF一8RI和TGFBRII)的表达水平；通过体外培养胎盘组织，了解TGF一目2对胎盘产生IFN-和TNF一0L的影响；胎盘培养上清液中IFNY和TNF一代的浓度用ELISA法测定。结果(1)ICP患者

2、胎盘绒毛TGFB2表达的平均面积、染色强度和IOD值均明显小于正常妊娠组(Po05)：ICP组新生儿出生体重较正常妊娠组小，差异有统计学意义(PO05)。见表2，图7一扣。表2正常妊娠组和ICP组绒毛表面合体滋养细胞TGFBl的表达(mean4-sd)组别平均面积(um1)平均强度IOD值正常妊娠组145254-1782O33-+0094660899ICP组148252532034+01247731002博士学位论文陌组TGFBl的表达水平正常妊娠组ICP纽4，胎盘绒毛TGFB2的表达正常妊娠组和ICP组绒毛表面合体滋养细胞胞浆均可见棕黄色阳性染色，绒毛间质也有少量着色。ICP组胎盘绒毛TGFB2表达的平均面积、染色强度和IOD值均明显小于正常妊娠组，差异有统计学意义(P005)。见表5，图19211。表5正常妊娠组和ICP组绒毛表面合体滋养细胞TGF一口RI的表达(mean_sd)700鸯600500两组TGFBRI的表达水平正常妊娠组ICP组7胎盘绒毛TGFBRII的表达F常妊娠组和ICP组绒毛表面合体滋养细胞胞膜和胞浆均可见棕黄色阳性染色，部分合体滋养细胞尤其是表达强度高的细胞可

3、见细胞核的阳性染色(即核阳性现象)，绒毛间质也有着色。ICP组胎盘绒毛TGF一8RII的表达面积和IOD值高于正常妊娠组(PO01，PO05)。见表6，图2l一2。表6正常妊娠组和ICP组绒毛表面合体滋养细胞TGFBRII的表达(mean_+sd)组别平均面积(um)平均强度IOD值正常妊娠组142691172O45O046320296ICP纽152021334+04500868129878与丁F常妊娠组比较P005，与正常妊娠组比较P00170量65两组TGF-口RlI的表达水平正常妊娠组ICP组8ICP组TOFB2TGF一8R表达的IOD值与母血TBA的相关性本实验中ICP患者胎盘绒毛组织TGFB2的表达(10D值)与母血TBA呈负相关，而TGF一0RII的表达(IOD值)与母血TBA值无相关性。见表1。表7ICP患者胎盘绒毛组织TGFB2TGFSRH的表达(tOD值)与母血TBA相关性项目例数相关系数rPTGF一13228O824O05博士晕往论文9TGF一0三种亚型表达水平的比较正常妊娠胎盘TGF一132表达的面积、强度、IOD值均明显大于TGFB1和TGF一03(PO01)，

4、ICP胎盘虽然TGFB2表达面积小于TGFBl和TGF一03，但综合表示其表达水平的IOD值三者间差异无统计学意义。表8胎盘绒毛组织TGFB三种亚型的表达：和TGFp2比较PO0TGFB三种弧型的表达水平正常妊娠组IffP绀_-_-_-_-_-_第一部分结粜图1正常妊娠胎盘绒毛HE染色100倍图3正常妊娠胎盘绒毛HE染色400倍图5ICP胎盘空舀i照foo倍图2ICP患者胎盘绒毛间隙狭窄HEXl00倍图4ICP胎盘绒毛血管合体膜增厚HE400倍图6ICP胎盘空白对照z咖D传第部分结果Iit7TGFB1在正常胎盘绒毛图8TGFB1在ICP胎盘绒毛上的表达100倍卜的表达100倍图9F6FB1在正常胎盘绒毛上的表达400倍圈10rGJFB1在ICP胎盘绒毛上的表达x400倍第一都静结果网1】TGFB2在正常胎盘绒毛上的表达X100倍圈13TGFB2在正常胎盘绒毛_|二的表达X400倍图127GF一口2在ICP胎盘绒毛上的表达100倍图14TGFB2在ICP胎盘绒毛上的表达X400倍黎一瓿分锆聚图15TGFB3在正常胎盘绒毛上的表达X100倍图17TGFB3在正常胎盘绒毛=的表达400倍图1

5、6TGFB3在1CP胎盘绒毛上的表达100倍图18TGFB3在ICP胎盘城毛上舯表运)(400倍第一部分站果图19TGFRI在正常胎盘绒毛上的表达100倍图21TGFRI在正常胎盘绒毛上的表达400倍27圈20TGFRl在ICP胎盘绒毛上的表达100倍图22TGFRI在ICP胎盘绒毛上的表达x400倍镶一部分结果图23TGFRII在正常胎盘绒毛J：的表达100倍陶25TGFRII在正常胎盘绒毛E的表达X400倍图24TGFR在IcP胎盘绒毛上的表达100倍图26TGFRII在ICP胎盘绒毛二的表达X400倍博士学位论文论讨转化生长因子一B(transinggrowthfactorB，TGFB)是一种在人体内大部分组织和器官中均有广泛表达的二聚体肽类生长因子，在人类主要有TGF一日1、TGF一02和TGFB3三种亚型，通过与其受体结合发挥生物学作用。体内存在I、II、III型TGFB受体，其中I型和II型为介导TGFB作用的功能型受体，对TGFB有较高的亲和力；III型受体对TGFB亲和力较低，且目前尚未发现它介导的TGFB的作用。“+TGFB有多种生物学效应，在免疫调节、创伤修复、胚胎

6、发生、细胞凋亡及造血调控等方面有不同功能“”。近年来更注意到它具有很强的免疫抑制作用，是目前已知最强的淋巴细胞增殖与功能的内源性抑制剂，其作用是环孢霉素的1万一lO万倍汹1，它可以抑制T细胞增殖、活化，诱导其凋亡：影响B细胞的增殖、分化、成熟，抑制其免疫球蛋白产生：抑制细胞毒性T淋巴细胞(CTL)、自然杀伤细胞(NK)、淋巴因子活化杀伤细胞(LAK)、巨噬细胞的活性；下调树突状细胞(DC)、巨噬细胞的抗原呈递功能；抑制外周血单个核细胞产生IFNY和TNF-a；拮抗炎性细胞因子如IL-I13、tFNY、TNFa等的作用抑制原始造血干细胞增殖，从而使机体的非特异性免疫作用下降“。在异体器官移植中它还能通过抑制MHCII类抗原的表达、干扰DC的分化成熟，诱导供体特异性免疫耐受”。在异体心脏移植“、胰岛细胞移植“41中就观察NTTGF一13有对抗免疫排斥反应的作用，使移植物存活时间延长。胚胎对于母体而言，是一种同种半异体移植物，妊娠的成功，有赖于母胎问免疫平衡的存在和维持。既往研究已表明正常妊娠时母体的免疫功能下降，免疫耐受性增强。“ato胎盘在妊娠的免疫耐受中起着非常重要作用，它除了在母儿界

7、面作为免疫屏障外，还分泌各种蛋白、类固醇激博士学位论文素、细胞因子等参与全身的免疫调节“7“。TGFB就是其中一种重要的免疫调节因子。在妊娠期，胎盘滋养细胞产生TGFB，除了对胚胎和胎盘的生长发育、胎盘绒毛侵入宫内膜起作用外，更重要的是可通过其免疫抑制作用，防止母体对胎儿的排斥“”“1“1。原来把cD。+T辅助细胞根据其分泌细胞因子的不同分为三个亚群即THl，TH2和THOo”1，对THI，TH2型细胞因子的大量研究表明正常妊娠是一种”TH2现象“，即妊娠期母体是趋向于TH2型细胞因子参与的体液免疫，而避免THl型细胞因子参与的细胞免疫31。妊娠期间母体免疫平衡从THl向TH2方向转换，使胎儿免受母体排斥，THIffTH2型细胞因子的平衡失调与多种妊娠并发症的发生有关“1”。“。现有人将能分泌TGF-0的C04+T细胞亚群称为TH3细胞，妊娠期的THlTH2细胞因子的平衡已扩展为THiHTH2、TH3因子间的平衡，TH2细胞因子和TH3细胞分泌的TGF-13是对维持正常妊娠有利的细胞因子。“”。3。TGF一0可以抑制不利于妊娠的THI细胞因子，使母体免疫反应倾向于产生有利于妊娠的TH2

8、细胞因子，能降低蜕膜NK细胞的活性，使胚胎免受母体NK细胞和细胞毒性T淋巴细胞攻击的攻击，“。1它还调节子宫内膜一滋养细胞的凋亡嘲、抑制粘附分子的产生。，而凋亡发生的异常和粘附分子的过度表达也与妊娠中的免疫排斥有关”“。“：。因此，TGFB的表达异常，会导致母胎间的免疫平衡紊乱，使免疫保护作用减弱、免疫排斥反应增强。已有不少研究发现妊高征、自然流产等病理妊娠中就存在着TGFB的表达异常“”“1。ICP的病因、发病机理目前仍不清楚。近年来有研究发现ICP患者体内Ts细胞减少【6】；CD4+CD8+比值增高，IgG水平下降7】；粘附分子表达异常910】；THlTH2型细胞因子平衡出TH2向THl方向偏移；Fas系统的表达异常幢1。这些都提示CP的发生与母体免疫功能的紊乱有关，表现为免疫排斥反应增强，免疫保护反应减弱。30博士学位论工本实验通过免疫组织化学染色(sP法)检测了ICP患者胎盘上TGFB1、2、3三种亚型和两种功能型受体(TGFBRI和TGF一0RII)的表达，发现与_F常妊娠相比，ICP患者胎盘TGFp2表达明显减弱，TGFBRII表达增加，而TGFBl、3和TGFBRI与F常

9、相似。一般认为，TGFB1、2、3三种亚型功能相似，但有人认为在母儿界面起免疫抑制作用的主要是TGF-02“。Clark等汹3发现鼠的蜕膜存在一种免疫抑制因子，能保护胎儿免受母体免疫细胞的攻击，该因子的结构和生物活性都与TGFB2相似；以后的实验发现在发生妊娠丢失的小鼠的母儿界面TGFB2显著下降，对其进行免疫保护可使TGFB2表达增加，流产率降低；“6删Lea等“”发现复发自然流产患者的胎盘附着部位缺乏产生TGF-B2的抑制细胞。这些研究都提示：母儿界面TGFB2表达异常与妊娠失败有关。因此有学者提出的THlTH2、TH3平衡中的TH3因子主要是TOF一82。“5。3”我们在ICP患者的胎盘上也发现了TGFB2表达减弱，且与反映病情程度的生化指标TBA呈负相关，进一步证实了ICP患者存在母胎免疫耐受平衡紊乱。TGFB2的减少，可能导致母儿界面、K细胞、巨噬细胞等免疫细胞活化，不利于妊娠的THl细胞因子增加，使母胎间的免疫平衡向免疫排斥方向倾斜，对母儿造成免疫损伤。但其具体通过什么环节起作用尚待进一步研究。介导TGFB发挥作用的受体主要是TGF-0R1年flTGFBRII，TGFB必须同时与这两种受体结合才能激活信号转导，而与一种受体结合是无效的。当TGFBRI水平不变，提高TGF-BRII的表达水平则会降低对TGF一0的敏感性，这可能因为TGF一0RII表达增加可促进TGF一8RII二聚体形成，而TGFBRII二聚体能隐蔽TGFDRII，使其不能与TGFBRI结合成四聚体，进而影响TG卜B信号传递。“ICP患者胎盘TGFB2表达减少，而TGFBRII表达增加，使受体对TGFB的敏感性降低，更影响了其作用博士学位论支的发挥

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