大鼠尿微量白蛋白(ALB)说明书
8页1、大鼠尿微量白蛋白(ALB)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用 目的:本试剂盒用于测定大鼠血清,细胞上清及相关液体样本中尿微量白蛋白(ALB )的含量。实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠尿微量白蛋白(ALB)水平。用纯化的大鼠尿 微量白蛋白(ALB)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入尿微量 白蛋白(ALB),再与HRP标记的尿微量白蛋白(ALB)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体 复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸 的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的尿微量白蛋白(ALB )呈正相关。用酶 标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠尿微量白蛋白 (ALB)浓度。试剂盒组成:试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2 片(48)2 片(96)密封袋1个1个酶标包被板1X481X962-8 C保存标准品:270 Ag/ml0.5ml X 1 瓶0.5ml X 1 瓶2-8 C保存标准品稀释液1.5ml X 1 瓶1.5ml X 1 瓶2-8 C保
2、存酶标试剂3 mlX 1 瓶6 ml X 1 瓶2-8 C保存样品稀释液3 mlX 1 瓶6 ml X 1 瓶2-8 C保存显色剂A液3 ml X 1 瓶6 ml X 1 瓶2-8 C保存显色剂B液3 ml X 1 瓶6 ml X 1 瓶2-8 C保存终止液3 ml X 1 瓶6ml X 1 瓶2-8 C保存浓缩洗涤液(20ml X 20 倍)X1 瓶(20ml X 30 倍)X1 瓶2-8 C保存样本处理及要求:1. 血清:室温血液自然凝固 10-20 分钟,离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上 清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次 离心。3. 尿液:用无菌管收集,离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清,保存过程 中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20 分钟左右(2000-300
3、0 转/ 分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS (PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞 浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分 钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备 用。标本融化后仍然保持2-8的温度。加入一定量的PBS (PH7.4),用手工或匀浆器 将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。分装后一份待 检测,其余冷冻备用。6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上 进行试验,可将标本放于-20C保存,但应避免反复冻融.7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤:1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标 准品100山,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50山,混匀;然后从第一孔、第二 孔中各取100山分别加到第三孔和第四孔,
4、再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50卩1, 混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50卩1弃掉,再各取50山分别加到第五、第六孔 中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各 取50山分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50山,混 匀后从第七、第八孔中分别取50卩1加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准 品稀释液50卩1,混匀后从第九第十孔中各取50卩1弃掉。(稀释后各孔加样量都为50卩1, 浓度分别为 180yg/ml, 120gg/ml, 60yg/ml, 30gg/ml, 15yg/ml)。2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样 品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40卩1,然后再加待测样品10山(样 品最终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混 匀。3. 温育:用封板膜封板后置37C温育30分钟。4. 配液:将30 (48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 (48T的20倍)倍稀释后备用。5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体
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