重组人胰岛素 信息资料
31页1、CN1177928A 中文发明名称一生产人胰岛素出】主n 申请号CN94195231申请日1994.12.29公开(公告)号CN1177928A公开(公告)日1998.04.01IPC分类号A61K38/28; C12N15/17申请(专利权)人生物技术通用公司;发明人JR 哈特曼;S口德罗维茨;M 戈雷基;优先权号优先权日申请人地址美国新泽西州;摘要支持框选翻译简体中文- 英文 英文- 简体中文其他语种提供了改进且有效的通过折叠胰岛素原杂交多肽来生产重组人胰岛素的方法。摘要附图发明名称-Generation of human insulin出】主n 申请号CN94195231申请日1994.12.29公开(公告)号CN1177928A公开(公告)日1998.04.01IPC分类号A61K38/28; C12N15/17; C12N15/16申请(专利权)人BIO TECHNOLOGY GENERAL CORP;发明人HARTMAN J R;MENDELOVITZ S;GORECKI M;优先权号CN94195231优先权日1994.12.29摘要支持框选翻译简体中文-英文英文-简体中
2、文其他语种Abstract:An improved and efficient process for the production of recombinant human insulin by folding of a proinsulin hybrid polypeptide is provided.摘要附图1. 生产胰岛素的方法包括:(a) 在允许形成正确二硫键的条件下,折叠含胰岛素原的杂种多肽;(b) 使折叠的、二硫键键合的杂种多肽经酶促裂解以产生胰岛素;(c) 纯化胰岛素。2. 根据权利要求1的方法,其中步骤(a)还包括在约pH8.5- 12.0,约4-37将杂种多肽保温约 1-30小时。3. 根据权利要求2的方法,其中在存在抗坏血酸的条件下进行保温。4. 根据权利要求2的方法,其中pH为11.0-11.25。5. 根据权利要求3的方法,其中pH为11.0-11.25。6. 根据权利要求3的方法,其中在折叠混合物中,抗坏血酸的浓度为每摩尔SH基约2摩尔 抗坏血酸。7. 根据权利要求2的方法,其中所述保温时间为约5小时。8. 根据权利要求3的方法,其中所述保温时间为约5小时。
3、9. 根据权利要求1的方法,其中步骤(b)还包括:(I)将pH调到约8.8-9.0;和(ii)在16-37用胰蛋白酶和羧肽酶B裂解杂种多肽30分钟-16小时。10. 根据权利要求1的方法,其中步骤(c)还包括用DEAE- Sepharose层析和RP-HPLC纯化。11. 根据权利要求1的方法,其中步骤(c)还包括用超滤和CM -Sepharose层析纯化。12. 根据权利要求1的方法,其中步骤(c)还包括用DEAE- Sepharose层析和苯基-Sepharose层 析。13. 根据权利要求1的方法,其中用ATCC保藏号为69361的质粒pDBAST-LAT表达胰岛素原 杂种多肽。14. 根据权利要求1的方法,其中用ATCC保藏号为69363的质粒p入BAST-LAT表达胰岛素原 杂种多肽。15. 根据权利要求1的方法,其中用ATCC保藏号为69362的质粒pBAST-LAT表达胰岛素原杂 种多肽。16. 根据权利要求1的方法,其中通过处理含编码杂种多肽之DNA的细菌细胞,以便DNA 指导所述多肽的表达,从而得到步骤(a)的杂种多肽。17. 根据权利要求16的方法,其中从所述细胞中
4、回收杂种多肽。18. 根据权利要求16的方法,其中所述处理包括存在葡萄糖,甘油或半乳糖的条件下发酵。19. 根据权利要求17的方法,其中所述回收包括:(I)破坏所述细菌细胞的细胞壁或其片段以产生溶胞产物;(ii) 通过离心从溶胞产物中分离细胞内沉淀物;和(iii) 增溶所述沉淀物。20. 含有胰岛素原和与所述胰岛素原的N-末端相连的前导肽的多肽,其中所述多肽被折叠并 含有正确的二硫键。21. 根据权利要求20的多肽,其中所述前导肽衍生于CuZnSOD的N-末端。22. 根据权利要求21的多肽,其中所述前导肽含有62个氨基酸,其前为氨基酸Met,其后 为Arg残基。23. 根据权利要求20的多肽,其中所述胰岛素原含有通过单Arg残基与胰岛素A链共价相连 的胰岛素B链。24. 根据权利要求20的多肽,其中所述胰岛素原含有通过二肽Lys-Arg残基与胰岛素A链共 价相连的胰岛素B链。25. 根据权利要求20的多肽,其中前导肽的Cys残基已经被Ser残基所取代。说明书生产人胰岛素这是美国系列申请08/175298,1993年12月29日申请的接续申请。发明背景在本发明说明书中,用括号内的阿拉伯
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