家兔DIC实验报告
5页1、实验2 急性DIC实验时间:5月23日【实验目的】1、学习复制急性DIC动物模型的方法。 2、了解实验室诊断DIC的常用方法及其意义。3、结合实验和血液学指标测定结果,联系理论知识加深理解DIC的病因及发生机制。【实验对象】家兔1只,雌(未孕)雄均可。体重 1.52.0 kg。【药品和试剂】1%普鲁卡因、3.8%枸椽酸钠液、2%兔脑粉浸出液(临用时配制)、饱和氯化钠液、生理盐水、1%鱼精蛋白液。【实验器材】兔台、哺乳动物手术器械一套(包括手术刀、普通剪刀、眼科剪刀、止血钳)、电热恒温水浴箱、台式离心机、721分光光度计、秒表、刻度离心管(10ml)、试管(1375mm、15100mm)、刻度吸管(2ml、5ml)、试管架、微量定量移液器(10l、50l、500l)、橡皮吸球、乳胶滴管、玻片、棉球、纱布、颈动脉插管(硅胶管)2根、动脉夹,注射器。【实验方法】1、将家兔仰位固定兔台、颈部剪毛、皮下1%普鲁卡因局部浸润麻醉,作正中纵切口(约34cm左右),常规暴露一侧颈总动脉,结扎其远心端,近心端用动脉夹夹闭;在结扎线下方剪口插入硅胶管并固定,松夹放血7ml至盛有3.8%枸椽酸钠液2ml的1
2、0ml刻度离心管中,立即混匀离心(3000rpm,5分钟),分离血浆,备作纤维蛋白原定量与3P试验。再松动动脉夹放血23滴于洁净玻片上,作凝血时间测定。2、复制DIC模型:用10ml注射器吸取2%兔脑粉浸液,按3ml/kg的量缓慢(以每分钟2ml的速度为宜)注入家兔耳缘静脉内,同时观察其反应,如出现呼吸急促、躁动不安,即停止注射,速行第二次采血(方法同1),如未出现反应可注射毕后采血。重复上述各项指标测定。4、整理并分析实验结果。【附 录】1、凝血时间测定(玻片法):放血23滴于洁净玻片上,同时按动秒表,用清洁废针头挑拨血滴,见有明显血丝出现,迅即停表,记录时间。2、纤维蛋白原含量测定(饱和盐水法):取15100mm试管一支,置0.5ml样本血浆,加入饱和氯化钠溶液4.5ml,立即混匀,于37水浴中孵育3分钟取出,再混匀后以721分光光度计,520nm滤光板比浊,读取光密度值;以生理盐水替代饱和氯化钠液作同样操作后为空白对照管调零,测出光密度,按下式计算; 3、3P试验:取1375mm试管一支,置0.5ml血浆,加入1%鱼精蛋白液0.05ml,轻轻摇匀,于37水浴中15分钟后取出,于黑
3、色背景下观察,如见絮状沉淀或胶冻状即为阳性,清澈则为阴性。【实验结果】组别CT(min)3P testOD520nmFbg(mg/dl)OD520nmFbg(mg/dl)正常注射后正常注射后N测D测1/2132618-0.1863720.0951903022122-+0.2054100.0931864055050/140-+0.2484960.112/0.116224/2325120220-+0.1202400.1022046024/-0.2314620.04284【讨论】1、家兔实验性DIC的致病原因:兔脑脊液属于组织因子,大量的兔脑脊液静脉注射后,激活家兔的外源性凝血系统,启动凝血过程,依次激活凝血因子FIX,FVIII,FX等和凝血酶,从而使血小板聚集,使纤维蛋白原变成纤维蛋白,促进凝血。此外,凝血酶反馈性激活FIX,FX,FXI,FXII等,扩大凝血反应。此为高凝期,微循环易形成广泛的微血栓。大量凝血酶的激活和微血栓的形成,大量消耗了血液中的凝血因子和血小板,可能继发性激活纤溶系统,造成凝血系统和纤溶系统不平衡,血液处于消耗性低凝期,有明显出血症状。DIC时产生的大量凝血酶和F
4、XIIa等激活纤溶系统,产生大量纤溶酶,导致纤溶亢进,形成大量纤维蛋白降解产物,抗凝作用明显,为继发性纤溶亢进,此时出血十分显著。(厉彬杰)2、CT测定的原理:新鲜血液离体后,因子被异物表面(玻璃)激活,启动了内源性凝血。由于血液中含有内源性凝血所需的全部凝血因子、血小板及钙离子,血液则发生凝固。血液凝固所需时间即为凝血时间(clotting rime,CT)。3、由实验结果分析,3.1发生DIC后,凝血时间变长。机制:凝血物质被消耗而减少:在DIC发生、发展过程中,大量血小板和凝血因子被消耗,使得血液中纤维蛋白原、凝血酶原、F、F、F及血小板明显减少,使凝血过程发生障碍。纤溶系统激活:血液中F激活的同时,激肽系统也被激活,产生缓激肽酶,使纤溶酶原变成纤溶酶,激活纤溶系统。纤溶酶除了可使纤维蛋白降解外,还可水解凝血因子,如:F、F、凝血酶、F等,使凝血功能发生障碍,使得凝血时间变长。纤维蛋白(原)降解产物形成:在凝血过程中,凝血酶使纤溶蛋白原转变为纤维蛋白单体,最终形成交联的纤维蛋白多聚体。纤溶系统激活后,纤溶酶分解纤维蛋白原,裂解出纤维肽A和纤维肽B,余下片段为X片段,继续被分解为D
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