食品微生物检验技能试题及答案(DOC 27页)
30页1、食品微生物检验技能试题一一、有两管菌种,一管为金黄葡萄球菌,一管为大肠杆菌,但标签已脱落,请通过染色实验将其分开。(40分)1、 涂片、干燥、固定(10分)2、 染色(15分)3、 镜检(10分)4、 报告(5分)二、酱油中细菌总数的测定(60分)1、 实验准备(20分)2、 样品稀释与培养(20分)3、 菌落计数方法(10分)4、 菌落计数的报告(10分答案要点一、菌种区分1、涂片、干燥、固定(1)取两块洁净载玻片,分别在载玻片中央滴一滴生理盐水,用无菌操作分别挑取菌种于载玻片的水滴中,调匀涂成薄膜,直径1.5cm左右。(2)干燥 室温干燥或用电吹风吹干。(3)固定 涂片面上,在酒精灯上过火三次,使细胞质凝固,以固定细菌的形态,并使其不易脱落。但不能在火焰上烤,否则,形态会破坏。2、染色(1)初染 加草酸铵结晶紫染色液染色1分钟,用水冲洗。(2)媒染 滴加碘液冲去残水,并用碘液覆盖1分钟,水洗。(3)脱色 将载玻片上的水甩干净,在载玻片下衬以白色背景,滴加95%的酒精脱色,直洗至流出的酒精刚刚不出现紫色为止(0.5分钟),立即用水冲净酒精。(4)复染 用番红染液染1-2分钟,水洗。3
2、、镜检 干燥后,置显微镜下观察。 4、报告 球状、染成紫色者为金黄葡萄球菌,杆状、染成红色者为大肠杆菌。二、酱油中细菌总数的测定1、实验准备(1)酱油(2)1ml与10ml吸管将吸管洗净烘干,塞入少量脱脂棉,卷好防潮纸进行干热灭菌(160、2小时)或加压灭菌。(121、30分钟)(3)平皿 将平皿分为10个一卷,用防潮纸包好,同上述吸管一起进行灭菌。(4)备一瓶90ml和三管9ml的生理盐水,配以松紧适度的棉塞,用防潮纸将口部包好,同上述材料一起进行加压蒸汽灭菌,但需使灭菌后仍能保持原有毫升数(也可应用生理盐水灭菌后直接吸取的办法)。(5)培养基 蛋白胨牛肉膏氯化钠琼脂培养基。将培养基用碱液调至PH7.2-7.4,装入灭菌的试管中约15ml,进行加压灭菌后,保温45备用。2、样品稀释与培养(1)用10ml无菌吸管将酱油样品注入90ml无菌生理盐水内,充分摇匀,作成1:10的稀释液。应严格无菌操作。(2)用1ml无菌吸管,吸取1:10稀释液1ml,注入含有9ml无菌生理盐水的试管内,振荡试管混合均匀,做成1:100的稀释液。(3)另取1ml无菌吸管,按上项操作顺序做10倍递增稀释液,每递
3、增稀释一次,即换用一支灭菌吸管,配成1:1000和1:10000的稀释液。(4)再取三支1ml无菌吸管(或使用该稀释度的吸管),分别吸取1:10、1:100和1:1000的稀释液各1ml于平皿内,每个稀释度做两个平皿。(5)立即将15ml已冷却至45的培养基注入平皿内,并转动平皿,使其混合均匀。(6)待琼脂凝固后,用纸包好,反转平皿,置于37恒温箱内培养24小时后取出,计算平皿内细菌菌落数目,成以稀释倍数,即得每毫升样品所含菌落总数。4、菌落计数方法(1)从温箱中取出平皿,用蜡笔将皿底分为若干等分区域(若菌落稀少,也可不分)(2)以左手拇指、无名指、小指持握平皿,斜置自然光下,皿底以食指、中指衬托显出昏暗背景以利菌落观察,右手持蜡笔式钢笔计点菌落数,每数一区,于边上标记计数,再用放大镜检查,有无遗漏。合计各区菌落数即为一皿的菌落总数。如平皿菌落很多不易读数时,亦可选择代表区读计菌落数,然后再求出全皿菌落数。5、菌落计数的报告(1)平皿菌落的选择 选取菌落数在30-300之间的平皿作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平皿应采用两个平皿平均数,其中一个平皿有较大片状菌落生长时,则不宜采
4、用,而以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的菌落数。若片状菌落不到平皿的一半,而其余一半中菌落分布很均匀,则可于计数半皿后乘以2代表全皿菌落数。(2)稀释度的选择规定选择平均菌落数在30-300之间的稀释度,以平皿菌落数乘以稀释倍数,所得菌落总数作为报告。若有两个稀释度,其生长的菌落数均在30-300之间,则应视二者(高稀释度菌落数与低稀释度菌落数)之比大小来决定。若其比值小于2,应报告平均数;若大于2,则报告其中较小数字。若所有稀释度其平均菌落数均大于300,则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数进行报告。若所有稀释度其平均菌落数均小于30,则应按稀释倍数最低的平均菌落数乘以稀释倍数进行报告。若所有稀释度其平均菌落数不在30-300之间,其中一部分大于300或小于30时,则以最小接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数进行报告。(3)菌落数的报告 菌落数在100以内时,按实有数报告;大于100时,采用二位有效数字,在二位有效数字后面的数值,以四舍五入法计算,为了缩短数字后面的零数,也可用10的指数来表示。食品微生物检验技能试题二一、肉膏蛋白胨培养基的配制(60分)1、称量、加热溶解(
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