TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒说明书
10页1、TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒(通用)(BIOTIN标记POD法,适用于细胞、组织样本)一 TUNEL检测原理凯基TUNEL细胞凋亡检测试剂盒是用来检测细胞在凋亡过程中细胞核DNA的断裂情况,其原理是生物素(biotin)标记 的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT Enzyme)的作用下,可以连接到凋亡细胞中断裂的DNA的3 -OH末端,并 可与连接了的辣根过氧化酶的链霉亲和素(Streptavidin-HRP )特异结合,在辣根过氧化酶底物二氨基联苯胺(DAB) 的存在下,产生很强的颜色反应(呈深棕色),特异准确地定位正在凋亡的细胞,因而在普通显微镜下即可观察和计数 凋亡细胞;由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂,因而没有3-OH形成,很少能够被染色。本试剂盒适用 于组织样本(石蜡包埋、冰冻和超薄切片)和细胞样本(细胞涂片)的凋亡原位检测。二TUNEL试剂盒组分组份20 assays50 assays100 assays储存条件Equilibration Buffer1.0 mL2.5 mL5.0 mL-20CBiotin-11-dUTP20p L50p L100
2、p L-20CTdT Enzyme80p L200p L400p L-20C50XProteinase K珈L100p L200p L-20CStreptavidin-HRP10p L25p L50p L4C避光DAB2mg5mg10 mg-20C注意事项1使用前请认真阅读本说明书,提前准备好相关试剂。2因本试剂盒中组分均为微量,使用前请离心集液。3为避免试验误差、降低试剂的损耗,建议使用精密度高的进口微量移液枪及枪头。4 TdT酶反应液最好在使用前根椐样本数量集中配制,再分别滴加于各样本片上,避免每个样本单独配制而产生的试剂 损耗。5另因DAB为固体粉末,使用前加入适量PBS溶解,配制成20XDAB(10 mg/ml)后,按下述方法显色使用。6用户自备:二甲苯、多聚甲醛、PBS、H2O2、TritonX-100、柠檬酸钠、复染染液:苏木素或甲基绿等、盖玻片、载 玻片、染色缸。三操作流程概览高灵敏度:可以单一检出初期的凋亡细胞。高特异性:能特异性染色凋亡细胞。快速操作:整体操作约需3小时。用途广泛:可应用于组织切片、细胞样本等。方便观察:使用光学显微镜观察实验结果。高正确性:有阳性对照
3、片的制备方法,可以确认试剂盒的有效性四检测样本的预处理TUNEL检测时样本的预处理是试验的关键所在,本说明书推荐的条件仅为普遍情况,用户需根据自已的样本材料及首次 试验结果来调整各个条件(参照Page9),如处理时间、处理浓度等,来优化出适合自身样本的试验条件,从而做出客 观的试验结果。1细胞样本的准备.自螭细胞样本涂片或爬片)4浸入固定液,室遍(157250)固定15固走瑟 物净聚幡溶于PH7R的PBSJ中,篮细绸P PPBS漂洗浸入封闭液中,辞 (15725V)封团lOifiin P(封闭液=物)H溶于甲醇)PPBS漂洗浸大通透液中,冰上政工)ISfSSmm+J通困虱a.l%THMnX-UH溶于叮嘲糠腰讷,霍维S睡)P进入痴I己反应详见Page 8) P操作注意事项:1. 为防止样本脱落,请使用硅烷(Silane)处理的载玻片或采用多聚赖氨酸铺片。2. 固定好的样本可以在-20-C的70%乙醇中放置30分钟一晚,以改善细胞的渗透性。3. 使用PBS清洗细胞样本时,不要直接加在细胞样本上,以防止细胞样本的脱落。4. 进行PBS清洗时,以5分钟清洗3次为标准。5. 固定液、PBS、封闭
4、液、通透液、染色缸需用户自备,请按上述方法配制。2石蜡组织切片的预处理例了二甲礴蜡2次,SitmVtk;乙醇水台100%、95%. 90%.Tim) u派人蛋白酶K工作嬴 如方(反成1530蛔旧 蛋白2uL 50XPr(rteinase K+9811L PBS) W浸大封翎液中,济 (15-251C )封闭lOiiiin 封闭液=龄bH?O扁于单醇)4PBS漂洗二次/进入耘记反应详匣Page 8) 4PBS漂洗二次丫PBS漂洗二次丫*注意事项:蛋白酶K处理的使用浓度、处理时间及温度,都因组织的类型不同而有所不同,需要自已摸索优化上述条 件,如有问题,请根据本说明书Page 9的常见问题的原因及推荐解决方案来调整条件。例如:如果凋亡细胞染色 较弱时,可用高浓度的Proteinase K (400“g/ml)处理5分钟。(本试剂盒的50XProteinase K浓度为1mg/ml)o其它替代方法:石蜡切片的预处理也可根据实际情况可采用下述三种替代方法之一,即蛋白酶K处理的步聚改用下述 方法,其余步聚均相同:替代方法匚将脱蜡及水合好的切片浸入通透液中8-10 min (通透液:0.1%Tri
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