transwell实验(整理版)
10页1、第一节 概念这里想明确两个概念,一个是Transwell,另一个是肿瘤细胞侵袭模型。1Transwelltrans-这个词根有转移、转运、穿过等意思,well有小室的意思,可以从字面上理解,这是一类有通透性 的杯状的装置,根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍,可以认为这是一种膜滤器(Membrane filters ),也可认为是一种有通透性的支架(permeable supports )。更准确地说,Transwell应该是一种实验技术这项技术的主要材料是Transwell小室Transwell chamber, Transwell insert),其外形为一个可放置在孔板里的小杯子,不同厂家对Transwell会有不同的命名,而 不同型号也可有不同形状,不同大小,根据实验需要,可有不同选择。但无论是何种外形,其关键部分都是一致的,那就是杯子底层的一张有通透性的膜,而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。这层膜带有微孔,孑b径大小有0.1-12.0pm,根据不同需要可用不同材料,一般 常用的是聚碳酸酯膜(polycarbonate membrane )。下图是一个
2、Transwell装置的纵切面 Fig2寺;Il i椅 f|!i pI yc i e e:e pbt iiT-e将Transwell小室放入培养板中,小室内称上室,培养板内称下室,上室内盛装上层培养液,下室内盛装 下层培养液,上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。我们将细胞种在上室内,由于聚碳酸酯膜有通透性,下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞,从而 可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。Fig3应用不同孑径和经过不同处理的聚碳酸酯膜,就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种 方面的研究。下面参考guxuefeng战友和cosmosci战友的帖子具体来谈谈孔径的选择,当然不同细胞其体积不同,具 体选择时要考虑到细胞大小。这里主要谈几种大家常用的实验:(1).共培养体系:小于 3.0um 孔径条件下,细胞不会迁徙通过,因此,若研究不涉及细胞运动能力,不需要细胞穿过聚碳酸酯膜,则应选择3.0|im以下孔径。常用0.4、3.0|im。我们实验室用的是0.4pm。Fig4将细胞A种于上室,细胞B种于下室,可以研究细胞B分泌或代谢产生的物质对细胞A的影响。(2).趋化性实验
3、可用 5.0、8.0、12.0pm 膜,上室细胞可穿过聚碳酸酯膜进入下室,计数进入下室的细胞量可反映下室成 分对上室细胞的趋化能力。 细胞B对细胞A的趋化作用:将细胞A种于上室,细胞B种于下室,可以研究细胞B分泌或代谢产生 的物质对细胞A的趋化作用。 趋化因子对细胞的趋化作用:将细胞种于上室,下室加入某种趋化因子,可研究该趋化因子对细胞的趋 化作用。(3) .肿瘤细胞迁移实验常用8.0.12.0pm膜,上室种肿瘤细胞,下室加入FBS或某些特定的趋化因子,肿瘤细胞会向营养成分 高的下室跑,计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的迁移能力。(4) .肿瘤细胞侵袭实验常用8.0.12.0pm膜,原理与肿瘤细胞迁移实验类似。上室种肿瘤细胞,下室加入FBS或某些特定的趋化因子,肿瘤细胞会向营养成分高的下室跑,但与肿瘤细Fig5胞迁移实验不同的是,聚碳酸酯膜上室侧铺上一层基质胶,用以模仿体内细胞外基质,细胞欲进入下室, 先要分泌基质金属蛋白酶(MMPs )将基质胶降解,方可通过聚碳酸酯膜。计数进入下室的细胞量可反映 肿瘤细胞的侵袭能力。第二节 Transwell 侵袭实验我的课题涉及TranswelI
4、侵袭实验和Transwell迁移实验,其他方面的Transwell应用我不太清楚,因此 这里主要谈谈 Transwell 侵袭实验。1实验用品:Fig6 Transwell 小室:多种厂家可提供,论坛里常用的是Costar、Corning、BD生产的小室,我们实验室用的是Chemicon 公司的ECM550系列,另有Boyden chamber、Millipore公司的millicell和雕弓满月射天狼战友介 绍的 Thincert。 这些厂家提供的小室,有的已铺好基质胶,买来就可以用,很方便,但也比较贵,我们实验室用的 Chemicon公司的ECM550系列是已经铺好胶的,质量很好,但是非常贵,24孔板配套的小室,每 个价格约130元,不推荐给大家。BD也有已包被好的,价格不清楚。Coster和Corning公司生产的 小室,是论坛里比较常用的,好像是要自己铺胶,但据说每个小室成本只有 40 左右,应该比较适合 中国国情。下面是一些战友提供的价格,具体建议大家联系代理商咨询。linanping1979战友提供的价格:coster 的24孑L板的transwell的价格是456元RMB
《transwell实验(整理版)》由会员鲁**分享,可在线阅读,更多相关《transwell实验(整理版)》请在金锄头文库上搜索。
消防应急处理预案专题范文(三篇).doc
调酒师职业技能鉴定所(考场)设置标准
幼儿园托班学期班务计划(三篇).doc
安装技术员职责范文(3篇).doc
知识型员工激励存在问题及对策研究 ——以X保险公司为例
试用期员工转正工作总结标准范本(二篇).doc
高级电焊工考试试题题库附答案参考97
委托贷借款合同样本简易版
人音版小学音乐一年级下册教学计划)
2018-2019年度舟山市本级行政事业单位物业管理定点采购项目
业务员到总监的成功心法连载(一)
2022年村务监督委员会工作总结范文
2022初中班主任总结7篇 班主任工作总结2022年初中毕业班
2023年借款委托书15篇
在全县青年文明号授牌仪式上的讲话市级青年文明号授牌仪式流程
2022年关于当保险任务人员的心得5篇
教科室科研主任的竞聘演讲稿精编(4篇)
第二学期德育工作总结范文(5篇)
发挥学生主体意识促进英语交际能力
幼儿园小班秋季开学工作计划_1.doc
2023-09-05 21页
2023-11-16 2页
2024-01-13 3页
2023-07-24 5页
2023-08-17 133页
2022-08-13 167页
2023-07-02 19页
2023-02-21 12页
2023-12-01 16页
2022-12-11 8页