western转膜条件
17页1、.western转膜条件蛋白来源:RAW264.7 总蛋白蛋白名称(可保密):一些转录因子蛋白分子量:4070 KDWB用膜类型、孔径:0.45 NC转膜方式(恒压、恒流):湿转 恒流400 mA转膜时间:6090 minPS.其实吧,以我的经验来看,除非目的蛋白特别小,或者特别大,不然转膜时间真的不是那么重要,曾经因为失误,转了15 min就拆下来了,但从丽春红染色来看,跟平常实验也没有太大的区别。蛋白来源:内皮细胞 总蛋白蛋白名称(可保密):occludin & AKT蛋白分子量:65 KD & 56 KDWB用膜类型、孔径:0.45 PVDF转膜方式(恒压、恒流):湿转 恒压 100 V转膜时间:6070 min设备名字是“Bio-Rad mini”。蛋白来源:乳鼠心肌细胞和成年鼠心肌组织 总蛋白和核蛋白蛋白名称(可保密):保密蛋白分子量:65 KD & 55 KDWB用膜类型、孔径:PVDF(预先用甲醇处理)转膜方式(恒压、恒流):半干转 恒压 12 V转膜时间:30-40 min设备:“Bio-Rad mini”建议:最开始做过湿转(过夜的那种),太费事费时,效果也不如半干转
2、。蛋白来源:293T细胞蛋白名称(可保密):蛋白分子量:95 KD & 35 KDWB用膜类型、孔径:PVDF转膜方式(恒压、恒流):湿转 恒压 90 V-110 V,控制电流不要超过300 mA。转膜时间:70 min蛋白来源:肿瘤手术标本蛋白名称(可保密):转录因子蛋白分子量:33 KDaWB用膜类型、孔径:PVDF膜转膜方式(恒压、恒流):350 mA 恒流转膜时间:150 min精品.转膜设备:湿转 Bio-Rad说明:相同条件曾用于数个30-70 KDa的蛋白,都能成功转上,不过没有试缩短时间效果如何;实验时没为转膜条件苦恼,倒是电泳时胶的浓度及时间根据不同分子量而有区别。蛋白来源:成纤维细胞蛋白名称(可保密):smad3蛋白分子量:54 KDaWB用膜类型、孔径:PVDF膜转膜方式(恒压、恒流):350 mA 恒流转膜时间:150 min转膜设备:湿转 Bio-Rad蛋白来源:胰腺癌细胞蛋白名称(可保密):蛋白分子量:16 KDa and 42 KDaWB用膜类型、孔径:PVDF膜转膜方式(恒压、恒流):120 V 恒压转膜时间:90 min转膜设备:湿转 Bio-Rad蛋
3、白来源:大鼠血管平滑肌细胞蛋白名称(可保密):保密蛋白分子量:72 KD,42 KD 和22 KDWB用膜类型、孔径:一般的PVDF膜转膜方式(恒压、恒流):湿转,恒流一张膜0.26 A,两张膜0.3 A。转膜时间:90 min设备:“Bio-Rad mini”建议:转膜缓冲液最多用3次,最好现用现配,我们用的没有加SDS,转的时候最好能用冰块一类的东西降一下温,这样转的效果要好一些,转的时候一定要把三明治每层之间的气泡除去,同时使滤纸大于膜,膜大于胶,以免烧坏电极。蛋白来源:大鼠PBMC蛋白名称(可保密):保密蛋白分子量:55 KDWB用膜类型、孔径:0.22的PVDF膜转膜方式(恒流):湿转转膜时间:60-90 min设备:“Bio-Rad mini”建议:转膜液用过两三次之后转膜效果就很差了 其它按照常规就好了其实0.22的膜一般不怕转过头 以我们的经验,转膜时间、电压其实也有很大范围的调整 ,并不是非要固定于哪一个最合适,曾经做过一张膜转,17 KD的和170 KD的,按照170 KD的条件,17 KD的转膜也很好的。蛋白来源:人非小细胞肺癌细胞系精品.蛋白名称(可保密):保密
4、蛋白分子量:大于250 kDWB用膜类型、孔径:millipore PVDF膜 0.45 um转膜方式(恒压、恒流):湿转,恒流0.3A。转膜时间:180min设备:“Bio-Rad ”建议:电转保持电压在70 V以上,保持低温,如果电压低过70就需要换缓冲液了。蛋白来源:白血病细胞蛋白名称(可保密):保密蛋白分子量:28 KDWB用膜类型、孔径:0.45的NC膜转膜方式(恒流):湿转,90 min,0.25 A设备:“Bio-Rad ”建议:海绵厚度要合适,一次转磨用的海绵太薄,导致三明治没夹紧,转膜后拿出来一看,marker都变得七扭八歪。但是有前辈说垫的海绵太厚可能将胶压断,没经历过,不知道是不是会有这种情况。蛋白来源:肿瘤细胞蛋白名称(可保密):磷酸化蛋白蛋白分子量:10-200 KDaWB用膜类型、孔径:millipore PVDF膜 0.45 um转膜方式(恒压、恒流):120 v 恒压转膜时间:120 min转膜设备:湿转 Bio-Rad建议:转膜缓冲液只用2次,基本都转上,5%BSA封闭,减少背景。蛋白来源:胰腺细胞蛋白名称(可保密):*蛋白分子量:90-130 KDa
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