western转膜条件
.western转膜条件蛋白来源：RAW264.7 总蛋白蛋白名称（可保密）：一些转录因子蛋白分子量：4070 KDWB用膜类型、孔径：0.45 NC转膜方式（恒压、恒流）：湿转 恒流400 mA转膜时间：6090 minPS.其实吧，以我的经验来看，除非目的蛋白特别小，或者特别大，不然转膜时间真的不是那么重要， 曾经因为失误，转了15 min就拆下来了，但从丽春红染色来看，跟平常实验也没有太大的区别。蛋白来源：内皮细胞 总蛋白蛋白名称（可保密）：occludin & AKT蛋白分子量：65 KD & 56 KDWB用膜类型、孔径：0.45 PVDF转膜方式（恒压、恒流）：湿转 恒压 100 V转膜时间：6070 min设备名字是“Bio-Rad mini”。 蛋白来源：乳鼠心肌细胞和成年鼠心肌组织 总蛋白和核蛋白蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：65 KD & 55 KDWB用膜类型、孔径：PVDF（预先用甲醇处理）转膜方式（恒压、恒流）：半干转 恒压 12 V转膜时间：30-40 min设备：“Bio-Rad mini”建议：最开始做过湿转（过夜的那种），太费事费时，效果也不如半干转。 蛋白来源：293T细胞蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：95 KD & 35 KDWB用膜类型、孔径：PVDF转膜方式（恒压、恒流）：湿转 恒压 90 V-110 V，控制电流不要超过300 mA。转膜时间：70 min 蛋白来源：肿瘤手术标本蛋白名称（可保密）：转录因子蛋白分子量：33 KDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：350 mA 恒流转膜时间：150 min精品.转膜设备：湿转 Bio-Rad说明：相同条件曾用于数个30-70 KDa的蛋白，都能成功转上，不过没有试缩短时间效果如何； 实验时没为转膜条件苦恼，倒是电泳时胶的浓度及时间根据不同分子量而有区别。蛋白来源：成纤维细胞蛋白名称（可保密）：smad3蛋白分子量：54 KDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：350 mA 恒流转膜时间：150 min转膜设备：湿转 Bio-Rad 蛋白来源：胰腺癌细胞蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：16 KDa and 42 KDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：120 V 恒压转膜时间：90 min转膜设备：湿转 Bio-Rad蛋白来源：大鼠血管平滑肌细胞蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：72 KD，42 KD 和22 KDWB用膜类型、孔径：一般的PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：湿转，恒流一张膜0.26 A，两张膜0.3 A。转膜时间：90 min设备：“Bio-Rad mini”建议：转膜缓冲液最多用3次，最好现用现配，我们用的没有加SDS，转的时候最好能用冰块一类的东西降一下温，这样转的效果要好一些，转的时候一定要把三明治每层之间的气泡除去，同时使滤纸大于膜，膜大于胶，以免烧坏电极。 蛋白来源：大鼠PBMC蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：55 KDWB用膜类型、孔径：0.22的PVDF膜转膜方式（恒流）：湿转转膜时间：60-90 min设备：“Bio-Rad mini”建议：转膜液用过两三次之后转膜效果就很差了 其它按照常规就好了 其实0.22的膜一般不怕转过头 以我们的经验，转膜时间、电压其实 也有很大范围的调整 ，并不是非要固定于哪一个最合适，曾经做过 一张膜转，17 KD的和170 KD的，按照170 KD的条件，17 KD的转膜也很好的。蛋白来源：人非小细胞肺癌细胞系精品.蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：大于250 kDWB用膜类型、孔径：millipore PVDF膜 0.45 um转膜方式（恒压、恒流）：湿转，恒流0.3A。转膜时间：180min设备：“Bio-Rad ”建议：电转保持电压在70 V以上，保持低温，如果电压低过70就需要换缓冲液了。蛋白来源：白血病细胞蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：28 KDWB用膜类型、孔径：0.45的NC膜转膜方式（恒流）：湿转，90 min，0.25 A设备：“Bio-Rad ”建议：海绵厚度要合适，一次转磨用的海绵太薄，导致三明治没夹紧，转膜后拿出来一看，marker都变得七扭八歪。但是有前辈说垫的海绵太厚可能将胶压断，没经历过，不知道是不是会有这种情况。 蛋白来源：肿瘤细胞蛋白名称（可保密）：磷酸化蛋白蛋白分子量：10-200 KDaWB用膜类型、孔径：millipore PVDF膜 0.45 um转膜方式（恒压、恒流）：120 v 恒压转膜时间：120 min转膜设备：湿转 Bio-Rad建议：转膜缓冲液只用2次，基本都转上，5%BSA封闭，减少背景。 蛋白来源：胰腺细胞蛋白名称（可保密）：*蛋白分子量：90-130 KDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：250 mA 恒流转膜时间：150 min转膜设备：湿转 蛋白来源：原核表达蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：38 KDWB用膜类型、孔径：0.45 NC转膜方式（恒压、恒流）：湿转 恒压：100 V转膜时间：120 min精品. 蛋白来源：心脏蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：220 kDa，130 kDa，70 kDa，41kDaWB用膜类型、孔径：PVDF转膜方式（恒压、恒流）：恒压转膜时间：70 v120 min，180 min，5-6 h转膜设备：伯乐湿转建议改进方向（可选）：40 kDa一下，70 v ，60-90 min足够，40-70 kDa 90-120 min即可。70-120 kDa ，70 v，120-180 min足够，120-180 kDa ，180-240 min，180 kDa以上建议6 h。 蛋白来源：卵巢癌细胞膜蛋白蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：53 KDWB用膜类型、孔径：PVDF膜 0.45 um转膜方式（恒压、恒流）：恒压转膜时间：80 V 100 min转膜设备：湿转 Bio-Rad 蛋白来源：人宫颈癌HELA细胞总蛋白蛋白名称（可保密）：-actin蛋白分子量：42WB用膜类型、孔径：PVDF膜 0.45 um转膜方式（恒压、恒流）：恒压转膜时间：50 4 h转膜设备：湿转 Bio-Rad 蛋白来源：脑组织蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：16 KD、27 KD、32 KD、42 KDWB用膜类型、孔径：PVDF 0.22 um转膜方式（恒压、恒流）：半干转 恒流 1 mA/cm2或2 mA/cm2转膜时间：不定转膜设备：北京六一仪器建议：我共做了六个蛋白，所以总在想节约时间的方式。精品.在 预试时我会观察电压数与转膜效率的关系，所以我不会按时间来定何时转完，而是按电压来定。通过染胶来确定电压数与转移蛋白分子量上限的关系。这样有的5分 钟就转完了，不用多浪费时间。并且六一的半干转膜仪随着使用次数的增多，效率也会下降，所以时间和转膜效率（尤其是使用后期）的关系并不稳定，单纯依靠时 间有时会有问题。 蛋白来源：CHO cell蛋白名称（可保密）：酶原蛋白分子量：40 KDWB用膜类型、孔径：0.22的PVDF膜（Biorad）转膜方式（恒压）：100 V，湿转，转膜时间：60 min。设备：Tanon（上海天能）建议：1. 转膜液现用现配，用完倒掉。2. 转膜时间，电压可以适当调整。分子量大或者小一些的蛋白，采用此条件一样转膜效率很高。 蛋白来源：Hepg2蛋白名称（可保密）：EGFR蛋白分子量：170kdWB用膜类型、孔径：pvdf 0.45转膜方式（恒压、恒流）：24V转膜时间：2个半小时转膜设备：伯乐半干转 蛋白来源：肝癌细胞蛋白名称：HIF-1蛋白分子量：120 kDWB用膜类型、孔径：NC膜转膜方式（恒压）：80伏，湿转转膜时间：150分钟设备：“Bio-Rad mini”建 议：湿转，转膜液特别重要，否则会导致电压或者电流不稳影响转膜条带。转膜均现配先用，不重复利用。转膜时间一般是150分钟，80伏恒压。经李春红染 色，靠近蛋白胶的一侧膜上蛋白染色深，膜另外一面染色浅，说明蛋白未转过。该湿转条件自己做过的蛋白分子量范围：170-36 kD。 蛋白来源：心肌细胞总和膜蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：128 KD，100，60，55，43 KD精品.WB用膜类型、孔径：NC膜 0.2 um转膜方式（恒压、恒流）：恒压转膜时间：70 V 200 min转膜设备：湿转 Bio-Rad建 议：转膜液最好现配现现用，或配成母液，最好不重复使用，70 V电压下，电流约154 mA。甲醇可以加到150 ml。对大分子量如200 KD转膜时间延长6-8 h。蛋白来源：肺脏蛋白名称（可保密）：ICAM-1蛋白分子量：85110 KDWB用膜类型、孔径：0.22NC转膜方式（恒压、恒流）：湿转 恒流 300 mA转膜时间：120 min设备名字 Bio-Rad mini一抗用的santa cruz 1 mL包装的。 比例调整到1：800做出很好的条带。 效价会一直降低的。去年做的这个指标，今年夏天做就不行了。 蛋白来源：成纤维细胞蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：16 KDaWB用膜类型、孔径：0.2 um PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：0.2 A恒流转膜时间：65 min转膜设备：湿转 Bio-Rad 蛋白来源：成纤维细胞蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：28 KDaWB用膜类型、孔径：0.2 umPVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：0.25 A恒流转膜时间：60 min转膜设备：湿转 Bio-Rad 蛋白来源：人肿瘤细胞蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：80 KDWB用膜类型、孔径：0.45 um PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：半干转移系统恒流，勿超过0.85 mA/cm2，同时转多张膜电流需累加（串联）转膜时间：60-90 min设备：Bio-Rad精品.其实有些东西并不是非常严格的，要转移的目的蛋白分子量小，那么转移的时间就短一些，反之，则长一点；蛋白量充足，可以多转一会，蛋白量较少，则要少转一下，免得蛋白穿膜而过到了滤纸上而前功尽弃。 蛋白来源：人和鼠肝癌细胞总蛋白、胞浆、胞核蛋白蛋白名称（可保密）：*蛋白分子量：17-116 kdWB用膜类型、孔径：PVDF膜 0.45 um转膜方式（恒压、恒流）：恒流 200 mA转膜时间：3 h转膜设备：湿转 北京六一 24D mini 蛋白来源：CO COS7 293T蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：80 72 56 52 48 25 18KDWB用膜类型、孔径：0.45 um PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：湿转 90 V 电流约为230-280 mA之间。两张膜串联叠加。转膜时间：40 mi
