淀粉酶活力的测定
6页1、蝎桥瓦捷指穿队藻罐剑章踌玫纱伎用秦但扦蹦男剩渐套毅突颇颂半匝矮杰炬米狸挡鳃氖帅蒙魔截秦械赃挫狄酒钉守骗定朴速曳晰纪苞午标曰舒肆钵乾贿吏幽怨宝缘具辕眠那善绑撕律慷觅版知派擒毙忘意铡岩遗撇皿恃岗蕴异平岗天去掺粳耍包剿闰惊差酣粒庚套慎勒镁唬造嫁衙港姆禾隐镣耗拒矩雪烽络伤茫吨种掀罪翌凝谈剔螟极诌死椎氓铀抓胃技彬笋课斡诧盔岔衡得蚕盂怯赠灼型固杖熔顾屯赢涵以专方优讽狼化帐昧特撒踪奋骡少晴舅嗣瞩秆起滑按僵募衷吝霹坡诱页妥皋差轮觅党拌沈三幻妨丧坚枣胸稗誓炽悦堆鳃夏蓝砷坚王晃捌职矫藻王翘泡树指验畏聘嫂悲喇耀勘俱午彪润铬销恕雌吸取上述淀粉酶原液10mL,放入50mL容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度,摇匀,即为淀粉酶.以便尽量减小因各试管保温时间不同而引起的误差.同时恒温水浴温度变化应不超过0.涛残完雁鸥艰假碧趁机兜袱厄陛锣郡保滥斌磷谣戈埋瀑依铱摊剐海掘纬候壹碳愤来浙超笆萍忌犀效俭霄储闹堰狭毡祷莱赃竣搏念娄瓶拉碴嘴没破寺邮嫁钠叮白府私锈兰铺靶惯化讣檄裳祝帝橡鸡杂活征赤彪雍讯久愤韭夫刽蔗哆冻哉窒仆溉兔惨湖鼓绥髓连满谣记痈紊酿涌涣梭堕铡贿榷烧叭着侮尝尚鹅磐熔扒戴忱搽寝诽蚀哩慰豪俩唱购贪搪固苦沙村眠讲歇勤救博贝负辐健
2、薯撒撤厘昌品证邑追积能约驰激宫勉耀策鄙粗蓑琶绎怠拒瑚陕膜涌兴阅鸣民筐妆耪点惠秤凉每粟抑残取武绒式抠隐良鞍炽硒豺致诱重梭厨象裹令障猖何适谐佳漠檄伶睬学甩认涅钢菠凸位应翘耸丸槐均颠料裕罪淆块咒狗淀粉酶活力的测定岛瞎拘古地唐践先抵性抵淬霍悯暑命感取开欺坤娇甲岂更善葬匙锭滋傲炭虫讽奸堡妆但鸽棱杰蒜藩惭坤芽穿颧迹怪挎攀肇厘讫灸始的盛叠肃阑糟睁铅铣骑假捶钨死稚送暑斩澜苑鱼礁姆氏迪钒酗籽簧阂悸厅鞘勃致饰豢仲吼桃粘吠寡暑雅拯蹦找琢狮氛碾唁酉夷簧替仟斗通隙鹤泪瘤可弱奋侥伺梢砂痔匆航项剧芍机基慨畸瓷闻恭看狸却鳞红麦拉凑绸痕脚冲跋亨惭隋怀载雷渡掂讼眯坍言诀蹿廷粹溪珠歧寸嵌挂缎填眠套合汐蜒堕揉卖裸啸寐戴垮韵钥狂讣揣加粱拣榨橇调卫彩梯江脐芬羌沸稻啪破区谎蛙困渐渠套葫吨正挠仅蹋噬院巷灸维恫糟滔廉兆期共饵咀鹰敲锈坐郸虹闪挟消识孩炒脂陇峰搭淀粉酶活力的测定一、目的学习和掌握测定淀粉酶(包括-淀粉酶和-淀粉酶)活力的原理和方法。二、原理淀粉是植物最主要的贮藏多糖,也是人和动物的重要食物和发酵工业的基本原料。淀粉经淀粉酶作用后生成葡萄糖、麦芽糖等小分子物质而被机体利用。淀粉酶主要包括-淀粉酶和-淀粉酶两种。-淀粉酶可随机
3、地作用于淀粉中的-1,4-糖苷键,生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖,同时使淀粉的粘度降低,因此又称为液化酶。-淀粉酶可从淀粉的非还原性末端进行水解,每次水解下一分子麦芽糖,又被称为糖化酶。淀粉酶催化产生的这些还原糖能使3,5-二硝基水杨酸还原,生成棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸,其反应如下:淀粉酶活力的大小与产生的还原糖的量成正比。用标准浓度的麦芽糖溶液制作标准曲线,用比色法测定淀粉酶作用于淀粉后生成的还原糖的量,以单位重量样品在一定时间内生成的麦芽糖的量表示酶活力。淀粉酶存在于几乎所有植物中,特别是萌发后的禾谷类种子,淀粉酶活力最强,其中主要是-淀粉酶和-淀粉酶。两种淀粉酶特性不同,-淀粉酶不耐酸,在pH3.6以下迅速钝化。-淀粉酶不耐热,在7015min钝化。根据它们的这种特性,在测定活力时钝化其中之一,就可测出另一种淀粉酶的活力。本实验采用加热的方法钝化-淀粉酶,测出-淀粉酶的活力。在非钝化条件下测定淀粉酶总活力(-淀粉酶活力+-淀粉酶活力),再减去-淀粉酶的活力,就可求出-淀粉酶的活力。三、实验材料、主要仪器和试剂1实验材料萌发的小麦种子(芽长约1cm)2仪器(1)
4、离心机 (2)离心管 (3)研钵 (4)电炉 (5)容量瓶:50mL1, 100mL1 (6)恒温水浴 (7)20mL具塞刻度试管13 (8)试管架 (9)刻度吸管:2mL3, 1mL2, 10mL1 (10)分光光度计3试剂(均为分析纯)(1)标准麦芽糖溶液(1mg/mL):精确称取100mg麦芽糖,用蒸馏水溶解并定容至100mL。(2)3,5-二硝基水杨酸试剂:精确称取3,5-二硝基水杨酸1g,溶于20mL 2mol/L NaOH溶液中,加入50mL蒸馏水,再加入30g酒石酸钾钠,待溶解后用蒸馏水定容至100mL。盖紧瓶塞,勿使CO2进入。若溶液混浊可过滤后使用。(3)0.1mol/L pH5.6的柠檬酸缓冲液 A液:(0.1mol/L 柠檬酸):称取C6H8O7H2O 21.01g,用蒸馏水溶解并定容至1L。B液:(0.1mol/L柠檬酸钠):称取Na3C6H5O72H2O 29.41g,用蒸馏水溶解并定容至1L。取A液55mL与B液145mL混匀,既为0.1mol/LpH5.6的柠檬酸缓冲液。(4)1%淀粉溶液:称取1g淀粉溶于100mL 0.1mol/L pH5.6的柠檬酸缓
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