体外诊断试剂生产质量控制要点.ppt

体外诊断试剂生产和质量控制要点主讲人:顾燕黎上海科华生物工程股份有限公司体外诊断试剂产品介绍一酶联免疫诊断试剂产品l乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法）二快速诊断试剂产品l人类免疫缺陷病毒抗体检测试剂盒（胶体金法）三PCR核酸诊断试剂产品l乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒（PCR-荧光探针法）四临床化学诊断试剂产品l葡萄糖试剂盒（液体单试剂）（氧化酶法）一.酶联免疫诊断试剂产品【产品名称】乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法）【包装规格】96人份/盒【预期用途】本试剂盒采用酶联免疫法原理检测HBsAg，适用于血清 或血浆类标本酶联免疫法反应原理l双抗体夹心法l双抗原夹心法标本抗-HBs抗-HBs-HRPHBsAg乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶 联免疫法）的原理采用抗-HBs包被反应板，加入待测样本，经孵育后，加入抗-HBs-HRP，当样本中存在HBsAg时，该HBsAg与包被抗-HBs结合并与抗-HBs-HRP结合形成抗-HBs-HBsAg-抗-HBs-HRP复合物，加入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应试剂盒组份1. 微孔反应应板2. 酶结结合物3. 阳性对对照4. 阴性对对照5. 洗涤涤液6. 显显色剂剂A7. 显显色剂剂B8. 终终止液9. 封片10. 说说明书书主要生产设备微孔反应应板包被机微孔反应应板全自动动封闭闭生产线产线灌封流水线线超声波洗瓶机全自动进动进 口分装机生物安全柜酶标仪标仪横枕式包装机生产工艺流程图合并分装纯化包被结酶纯化配制配制配制抗-HBs血清酶标用抗 -HBs抗-HBs-HRP酶结合物反应板包板用单 抗-HBs单抗-HBs腹水正常人血清 、阳性血阴、阳性 对照显色剂、终止 液、洗涤液TMB、硫酸 、吐温20成品半成品滴配半成品检 定成品检定外购原辅料控制l原辅料必须从合格供应商目录所载厂家购入 。

l采购的生产用原辅料，均应符合药品的标准 、包装材料标准、生物制品规程或其它标准 ，不得对产品的质量产生不良影响 自制主要原料生产和质量控制要点l 工艺用水l 抗原l 抗体l 酶标记物基因工程HBsAg生产和质量控制要点生产工序质量控制要点细胞培养基因工程细胞株，经接 种复苏后，进行细胞 传代培养无菌操作，培养基的配 制，细胞培养温度，细 胞的形态及传代速度纯化收集的细胞培养上清液 经抗-HBs 亲和层析柱 等纯化层析柱填料的使用次数 ， 所用缓冲液的pH值 ， 上样、平衡、洗脱速 度基因工程HBsAg质量标准l效价： ELISAl纯度：采用SDS-PAGEl功能性实验 ：阴性对照、阳性对照、阴性参 考品符合率、最低检出量、精密性、稳定性l蛋白浓度：用双缩脲法测定单抗-HBs生产和质量控制要点生产工序质量控制要点细胞复苏及 传代培养单克隆抗体细胞株，经接种复 苏后，进行细胞传代培养无菌操作，培养基的配 制，细胞培养温度腹水制备福氏不完全佐剂免疫，7-10天后 单克隆抗体细胞悬液注射于F1 代小鼠 ，10天后采集小鼠腹水 ，离心，制得单抗-HBs腹水。

对数生长期细胞接种腹水纯化用制备的单抗-HBs腹水，经饱 和硫酸铵二步沉淀，经离子交 换层 析柱纯化即为单 抗-HBs层析填料的使用次数， 所用缓冲液的pH值， 上 样、平衡、洗脱速度 纯化的得率单抗-HBs质量标准l纯度 ：采用SDS-PAGE法l蛋白含量 ：采用Lowry法l效价 ：ELISA效价l功能性检测：免疫活性、稳定性多抗-HBs生产和质量控制要点生产工序质量控制要点抗血清制备用福氏佐剂和纯化 HBsAg抗原 制成乳化胶 乳剂注射实验动 物 ，经 多次免疫后，采集动物 血清动物的选择，乳剂 配制的均一性纯化抗血清，经亲和层析柱 粗提后，正常人全血清 等多种亲和层析柱等纯 化制得亲和柱的制备及使 用次数，所用缓冲 液的pH等的控制， 纯化的收率多抗-HBs的质量标准l纯度 ：SDS-PAGE法检定l蛋白含量 ：Lowry法l效价 ：对流电泳法测定效价l功能性检测：免疫活性、稳定性多抗-HBs-HRP生产和质量控制要点生产工序质量控制要点酶的活化 HRP与 NaIO4反应，再加入 乙二醇制成活化的酶溶 液 辣根过氧化物酶 RZ值≥3.0 及活化 时间的控制 酶的偶联 酶溶液液加入抗-HBs抗体pH,温度及时间的 控制还原酶反应液加入NaBH4溶液还 原。

还原时间的控制纯化 饱和硫酸铵纯化纯度控制辣根过氧化物酶质量标准l溶解性 ：应符合要求lPH值 ：应符合要求l活性测定 ：应符合要求lRZ值：应≥3.0 多抗-HBs-HRP质量标准l免疫活性l稳定性试验生产产工序生产产要点质质量控制点反应应板制备备1包被液的配制pH值值的控制2*反应应板的包被包被液量的准确性，反应应板包被放置 的温度、湿度及时间时间 的控制3反应应板的洗涤涤、 加封闭闭液液量的准确性4*反应应板的封闭闭房间间温度的控制，封闭时间闭时间 的控制5反应应板的抽干抽干机的真空度、温度6*铝铝箔袋的热热封房间间的湿度控制，铝铝箔袋的密封性7*反应应板的抽检检应应符合相关质质量要求反应板制备生产和质量控制要点反应应板制备备包被液配制l质量控制点：包被缓冲液pH l测定方法：用pH计测定反应应板制备备反应应板的包被l质量控制点：包被液量的准确性 要求：100μl/孔 l操作：将待包被的微孔反应板放置传送带上，开始包被，每块包 被板应用目测法检查其96孔加液是否完整前10块包被板检查 加液量是否准确，检后的包被板放入报废专用盘内，作报废处理 连续100块包被板检查合格后，进入正常包被过程。

正常 包被过程中每100块包被板应抽1块作过程检查反应应板制备备反应应板的包被l质量控制点：反应板包被放置的温度及时间的控制要求： 2-8℃冷库包被过夜 l操作：包被板应堆放整齐，并用一次性塑料布覆盖 注明产品名称、批号和时间，放入2-8℃冷库包被过夜 反应应板制备备反应板的洗涤、加封闭液l质量控制点：液量的准确性要求:洗板液量：200μl/孔封闭液量：250μl/孔 反应应板制备备反应板的封闭l质量控制点：封闭温度：37±0.5℃ 封闭时间 ：2小时 l操作：将加好封闭液的包被板整齐堆放在托盘内，注 明批号、封闭开始时间和结束时间，放入恒温房到 达规定时间后，迅速取出包被板，转入下一道工序的 生产 反应应板制备备反应应板的抽干l质量控制点：抽干机的真空度、温度要求：真空度：低于100Pa，维持4小时以上温度：20±2℃ 反应应板制备备铝铝箔袋的热热封l质量控制点：房间的湿度：＜40%铝箔袋的密封性：端面刀封温度210±5℃ 中封刀封温度210±5℃ l操作：房间湿度控制：生产操作前提前2小时，打开去湿机进 行工作场地去湿，使车间湿度达到40%以下铝箔袋的密封性：袋袋检反应应板制备备反应应板的抽检检质量标准： 阴性参考品符合率：用国家参考品或国家参考品标化的参考品进行 检定，不得出现假阳性。

阳性参考品符合率：用国家参考品或国家参考品标化的参考品进行 检定，不得出现假阴性 最低检出量：用国家参考品或国家参考品标化的参考品进行检定， HBsAg adr、adw及ay亚型的最低检出量应符合要求精密性：用国家参考品或国家参考品标化的参考品进行检定，CV （%）应不高于15%（n=10）生产产工序生产产要点质质量控制点阴、阳性对对照的配制1阴性血清的灭灭活灭灭活的时间时间 ，温度2*阴性对对照的配制检测检测 阴性OD值值3阳性血清的灭灭活灭灭活的时间时间 ，温度4*阳性对对照的配制检测检测 阳性OD值值阴、阳性对对照制备备的生产产和质质量控制要点阴、阳性血清的灭灭活l要求：灭灭活时间时间 ：1小时时温度：60℃l操作：将血清置水浴箱内随时注意测量血清 温度，当血清温度到达60℃时，开始计时至 规定时间止 阴、阳性对对照的配制控制阴性对对照的配制l质控点：阴性对照OD值l要求：OD值≤0.050 阳性对对照的配制l质控点：阳性对照OD值l要求：OD值≥1.000 通用试剂制备的生产和质量控制要点生产产工序生产产关键键点质质量控制点显显色剂剂、终终止液、洗涤涤液等通用试剂试剂 的制备备1显显色剂剂B的配 制避光配制、分装溶液配制的pH、电导电导 的控制配制后12小时时内进进行分装2显显色剂剂A的配 制72小时时内进进行分装溶液配制的pH、电导电导 的控制3终终止液的配制比重控制 4洗涤涤液的配制pH、电导电导 的控制显显色剂剂B的配制l质质量控制点：1 溶液配制的准确性用pH计测计测 定溶液pH值应值应 符合要求用电导电导 率仪测仪测 定溶液电导电导 率应应符合要求2 配制、分装环环境：避光3 配制后溶液分装的即时时性：12小时时内进进行分 装显显色剂剂A的配制l质质量控制点：1溶液配制的准确性用pH计测计测 定溶液pH值值用电导电导 率仪测仪测 定溶液电导电导 率2配制后溶液存放：72小时时内进进行分 装终终止液的配制l质质量控制点：溶液配制的准确性：用婆美计测计测 定溶液的比重应应符合要 求洗涤液的配制l质质量控制点：溶液配制的准确性用pH计测计测 定溶液pH值值用电导电导 率仪测仪测 定溶液电导电导 率酶结结合物制备备生产和质量控制要点生产产工序生产产关键键点质质量控制点酶结结合物的制备备、滴配1酶稀释释液的配 制pH的控制2*酶结结合物的滴 配通过过比较较阳性参考品、阴性参考品、精密性以及最低检检出率情况，用方阵阵滴定法进进行EIA法测测定确定酶结结合物的浓浓度半成品检定质量标准l物理检查 l试剂空白l阴性对照l阳性对照 l阴性参考品符合率l阳性参考品符合率l最低检出量l精密性l稳定性实验 :试剂试剂 的分装、贴签贴签 生产产和质质量控制要 点除菌过滤l质量控制点：过滤 膜的起泡点实验l要求：滤器灭菌121℃30分钟；0.22μm 滤芯泡点≥3.5bar 分装l质量控制点：液量的准确性、试剂瓶的密封性要求：分装液量应大于等于标示量 ；分装好的试剂瓶应无漏液现象。

贴签贴签l质量控制点：批号打印的准确性要求：批号等打印正确、清晰l操作：贴瓶开始后，前30瓶应仔细检查瓶贴质量，包括 瓶贴位置，批号等打印是否正确、清晰，粘贴是否牢 固、平整等 合格后，每50瓶抽1瓶进行检查 合并包装生产产和质质量控制要点生产产工序生产产要点质质量控制点合并包装1包装盒的 压压印生产产日期、批号打印的准确性、清晰度2合并合并组组分的齐齐全性印刷类类包装品的物料平衡成品检检定质质量标标准l物理检查 l试剂空白l阴性对照l阳性对照l阴性参考品符合率l阳性参考品符合率l最低检出量l精密性l稳定性实验 成品入库入库l控制点：产品放行报告；入库数l要求：凭由质量管理部经理签署的成品出厂合格报告， 成品检定书办理入库手续，入库数应与成品出厂合格 报告中所报数量一致P2生物安全实验室管理l人员卫生进入P2实验室必须加穿洁净防护服，带一次性乳胶手套和一次 性口罩只允许工作人员进入，禁止非工作人员进入实验室l生物安全柜实验室的操作严格按操作规程进行操作，对存在感染性或潜在感 染性的操作须在生物安全柜内进行做好相应的消毒、使用记录 l消毒及灭菌所有直接或间接接触病原微生物的仪器、设备、器具，均需进行 消毒处理，能高压的选择121℃高压灭菌30分钟处理，不能高压的 选择1%次氯酸钠消毒。

实验中产生的具有感染性或潜在感染性的 穿透性利器废物置入黄色塑料利器盒中，其他非利器废物置入黄 色医疗废物塑料袋中l 实验室应指定专人负责感染性或存在潜在感染性材料的保藏，做 好标识，建立台帐二.金标产品【产品名称】l人类免疫缺陷病毒(。