定量检验的分析性能验证..ppt

定量检验的分析性能验证 浙江省立同德医院 王 伟 引言 • 依据卫生部《医疗机构临床实验室管 理办法》第三十条款 • CNAS-CL02：2008《医学实验室质量 和能力认可准则》（IOS15189:2007 ）第5.5条款 • 实验室应对方法学进行评价，以检查 其分析性能和对预期用途的适用性 • CNAS-CL02：《医学实验室质量和能 力认可准则》（IOS15189:2012,IDT） 第5.5条款 • 检验程序的性能特征宜包括：测量正 确度、测量准确度、测量精密度(含测 量重复性和测量中间精密度)、测量不 确定度、分析特异性（含干扰物）、 分析灵敏度、检出限和定量限、测量 区间、诊断特异性和诊断灵敏度 why 为什么要做性能验证？ • 性能验证是为了确保实验室开展的检 验项目，所应用的检测系统的分析性 能或检验项目的方法学(检验程序)能够 满足检测及临床要求，从而保证患者 标本检测结果准确可靠 进行性能验证的场所 • 按照实验室管理办法和认可准则的要 求，医疗机构临床实验室应承担所开 展检验项目的性能验证工作 where when 何时需要做性能验证？ • 以下情况应完成初次性能验证： • 新安装的仪器拟开展的项目；新开展 项目；同一项目的试剂变更厂家或检 验方法发生变更时；仪器校准、发生 故障维修后或更换主要的配件后，可 能对结果产生较大的影响时，可选择 其所开展的部分检验项目进行分析性 能验证。

when • 初次验证后，对精密度、正确度及可 报告范围等性能参数至少每12个月进 行一次评估，可通过评估如CV、均值 等室内质控数据的变化趋势（批间精 密度）、室间质评项目的结果的可接 受性（正确度）、临床医护人员对结 果的反馈（可报告范围）、小样本的 验证等多种方式进行若评估的结果 不可接受，则需重新进行性能验证 哪些人员可以进行性能验证试验 ? • 性能验证试验应由实验室有资质的检 验人员完成，必要时可由技术支持人 员协助完成试验；而性能验证报告必 须由资深的检验人员完成，并经科室 主任审核后归档保存 who 性能验证包括哪些方面 • 定量项目性能验证的内容包括但不限 于：精密度（批内、批间）；正确度 ；检测低限（灵敏度）；携带污染率 ；线性范围；可报告范围；生物参考 区间；检验结果量值溯源；测量不确 定度；等 what 如何实施性能验证？ • 准备工作 • 范围、材料、方案：应确定定量检测 的项目；所需的仪器、配套试剂、校 准品、质控品等材料；制定完整的性 能验证方案（尤其是各项性能参数的 判断标准的制定及其依据） how • 试验要求： • 仪器应进行校准或保养；要尽可能在 相同条件下进行各项试验；所有试验 均需在室内质控结果在控的情况下方 可进行。

性能验证试验 • 对于配套系统，一般验证以下内容 准确度---EP-15 精密度---EP-5 可报告范围---EP-6 参考区间---C28-A2 • 对于非配套系统，内容更多 一、精密度试验 精密度试验 • 在规定条件下，多次重复测定同一量 时各测定值之间彼此相符合的程度 • 包括：重复性、再现性、中间精密度 、实验室内精密度 精密度试验 • 在规定条件下，多次重复测定同一量 时各测定值之间彼此相符合的程度 • 包括： 重复性(repeatability) 中间精密度(intermediateprecision) 重现性(reproducibility) 实验室内精密度（within-labprecision) • 中间精密度: • 简单地说中间精密度是处于重复性条件与再 现性条件之间的条件下得到的精密度 • 实验室内精密度： • 同一实验室内，使用同样的设备，由不同操 作者在不同时间内获得的精密度，以前曾被 称为总精密度（不包括大的设备维护、仪器 校准和更换试剂批号） • 文件依据 • CLSI （原NCCLS）颁布的EP5-A2文 件《定量测量方法的精密度性能评价- 批准指南第二版》 • 用于评估试验的样品 • 一般常采用临床实验室收集的稳定和 冷冻贮存的血清(浆)库;当实验室收集 的样品不稳定或不易得到时，也可考 虑使用稳定的、以蛋白质为基质的商 品，如厂家的校准品和质控品。

一般 采用日常工作中的室内质控品 • 样品浓度 • 评估精密度时，建议评估高低二个浓度的精 密度当二个浓度的精密度有显著差异时， 建议增加为三个 浓度 • 所选浓度应为在测量范围内有医学意义的值 ，即至少有一 个浓度在医学决定水平 (medical decision levels)左右不要为了得 到较小的精密度，都选用较高值的样品，甚 至超出 测量范围也不应选用靠近最低检出 限的样品，此时所得 的精密度往往偏大 • 如没有医学决定水平，可在参考区间上限左 右选一个浓度 此外再根据检验项目的性质 性区间内选择一个值 • 试剂和校准品 • 评估批内精密度时，要求在整个评估 阶段，尽可能使用相同条件，应使用 同一种类同一批号的试剂和校准物,如 有可能,只进行一次校准使用不同批 号试剂和多次校准都会增加检验结果 的变异程度 测量重复性（批内精密度） • 试验方法：连续重复测定20/21次； • 结果计算：计算后20次检测结果的SD和CV ； • 判断标准：以能力验证/室间质评评价界限作 为允许总误差（TEa），批内精密度 <1/4TEa；或者符合试剂说明书的要求。

• 注意事项：若选择标本，则其浓度应尽可能 接近质控品或试剂说明书中评价该性能所提 供的标本浓度 测量再现性（批间精密度） • 试验方法：每天1次测试，连续测试20天； 或每天2次测试，连续测试10天；或每天4次 测试，连续测定5天; • 结果计算：剔除离群值后，计算20次检测结 果的SD和CV； • 判断标准：<1/3TEa；或者符合试剂说明书 的要求 • 注意事项：若选择标本，首先应考虑检测物 的稳定性，浓度要求同批内精密度；若检测 物不稳定，则必须使用质控品进行该试验 • 总误差（TEa） • 从CLIA’ 88允许误差表中查阅评价的该 项目的允许误差范围 • 没有CLIA 88允许误差范围的项目: • EQA的允许误差 • 试剂说明书提供 二、正确度与准确度 • 准确度(accuracy): 一次测量的结果 与被测量真值的接近程度 • 正确度(trueness): 真实度，大量测量 的均值与真值的接近程度 • 文件依据 • CLSI 颁布的EP15-A文件《用户对精 密度和准确度性能的核实指南》 • 实验方法 测定具有溯源性的标准物质物质 参加卫生部临床检验中心室间质评 样本室间比对：要求与使用相同检测 方法的、质量保证措施较好的、或已 获认可或的实验室，或与使用配套分 析系统的实验室进行比对 • 对3个不同水平的质控品每个测定2次 ，测定均值与靶值的偏差小于卫生部 临床检验中心室间质评的允许误差表 示准确度可以接受 三、可报告范围验证 •  线性范围（Linear Range)是指系统最终 的输出值（浓度或活性）与被分析物的浓度 成正比的范围。

•  分析测量范围（Analytical Measurement Range）方法直接测量标本，而不需要任何 的稀释、浓缩或者其它预处理等过程下，测 量结果总误差符合要求的分析物浓度的范围 •  临床可报告范围（Clinically Reportable Range)是方法可采用对标本的稀释、浓缩或 者其他预处理用于扩展直接分析测量下的分 析物值的范围 • 可报告范围（Reportable Range）： 实验室可建立或验证仪器或检测系统 测量相应的准确度实验结果值的范围 • • 文件依据 CLSI 颁布的EP6-A文件《定量测量方 法的线性评价》 • • 仪器 应有较好的测定精密度及不存在明显的携 带污染等对仪器应进行定期维护及校准， 保证其处于 正常状态 • • 试剂 应注意试剂有效期及批号，不可采用过期 试剂或 不同批号的试剂 • • 校准品 可采用与评价试剂配套的校准品校准品的 使用应严格按照产品说明，仪器校准步骤与 间隔应按 照本室的标准操作程序进行 • • 样品类型 为避免基质效应对结果的影响，选用 的样品应与临床实验样品相似，但不 可采用含有对测定方法具有明确干扰 作用物质的样品，如溶血、脂血、黄 疸或含有某些特定药物的样品。

样品 物浓度应包括试剂厂商提供的试剂所 能达到的线性范围 • • 样品制备 收集临床检测过程中的高值样品（H ）和低值样品(L)，若收集不到低值样 品，可用生理盐水或蒸馏水替代将H 和L样品按：1L、3L+1H、2L+2H、 1L+3H、1H关系各自配制(必要时可改 变比例)混合，形成系列评价样品 • • 样品测定 在进行线性范围确立时，应进行7-11 个浓度水平的样品测定，每个样品重 复测定2-4次进行可报告范围验证时 ，应进行5个浓度水平的样品测定，每 个样品重复测定2次如果测定方法本 身存在明显的携带污染，应根据实际 情况采取恰当措施尽量避免对测定结 果的影响 • • 结果分析 1、以预期值为横坐标，以实测值为 纵坐标进行线性回归，得到直线回归 方程Y＝aX+ b ， a在0.97～1.03范围 内，r2＞0.95 ； 2、偏倚在允许误差范围之内 • 可报告范围的高限=可接受最大稀释倍 数线性范围（AMR）上限值； • 可报告范围的低限：线性范围的检测 低限或功能灵敏度为可报告范围的低 限 四、参考区间的验证 • 验证已知参考区间在本实验室应用的 可接受性。

• • 实验方法 1、从健康人群中抽出20个参考个体 （最好能够覆盖各个年龄段），依照 实验室标准操作规程检测样本 2、发现离群值应弃用，并新的参考 个体代替，以确保测试结果不含离群 值 • 3、如果20例参考个体中不超过2例（10％ 的结果）的检测值在参考区间外，则已知的 参考区间可以接受若3例以上超出界限， 再选择20个参考个体进行验证，若少于或等 于2个检测值超过已知参考限，则已知参考 区间可以接受若又有3个以上超出参考限 ，则就应该重新检查所用的分析程序，考虑 两个样本总体生物学特征上可能存在差异， 并且考虑是否按照大规模研究指南建立自己 的参考区间 • 关键在于——筛选“健康人群” • 参考个体不应该是住院患者或者临床 病人，除非绝对需要诸如可能是必 需的小儿科或老年人的研究 需要排除 • 经常喝酒 • 近期患病 • 献血者 • 哺乳期 • 血压不正常 • 肥胖 • 吸毒 • 特殊职业 • 正在服用医生开方的药 物 • 滥用维生素 • 口服避孕剂 • 正在服用自购药物 • 怀孕 • 某些环境因素 • 近期手术 • 禁食或者非禁食 • 吸烟 • 遗传易感因素 • 近期接受输血 • 正在住院治疗或最近住 过院 • • 结果分析 按照实验方法评估参考区间的可接受 性。

五、携带污染的检测 • 为了监测生化分析仪的技术性能，评 价其携带污染率是否能达到有关标准 • 携带污染率：指不同浓度样品间连续 测定的相互影响，主要是高浓度样品 对低浓度样品的污染 • 实验方法 • 选择高值和低值两份血清，按3次高 值-3次低值顺序测定，记录测定结果 ，计算出均值和携带污染率 • 计算公式 • 携带污染率=(L1-L3)/(H3- L3)*100% 其中H3代表第三次高值， L1代表第一次低值，L3代表第三次低 。