金黄色葡萄球菌-综述.doc

金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 (Staphyloccocus aureus Rosenbach) 是人类的一种重要 病原菌，隶属于葡萄球菌属（Staphylococcus） ，有“嗜肉菌“的别称，是革兰 氏阳性菌的代表，可引起许多严重感染而对于金黄色葡萄球菌在速冻食品中 的存在量，卫生部于 2011 年 11 月 24 日公布食品安全国家标准《速冻面米制品》 ，允许金葡菌限量存在 [ [简介简介] ] 金黄色葡萄球菌细胞壁含 90%的肽聚糖和 10%的磷壁酸其肽聚糖的网状结 构比革兰氏阴性菌致密，染色时结晶紫附着后不被酒精脱色故而呈现紫色，相 反，阴性菌没有细胞壁结构，所以紫色被酒精冲掉然后附着了沙黄的红色金 黄色葡萄球菌与青霉素的发现有很大的渊源当年弗莱明就是在他的金黄色葡 萄球菌的培养皿中发现有些球菌被杀死了，于是发现了青霉素而研究也表明 青霉素只对以金黄色葡萄球菌为代表的革兰氏阳性菌作用明显这也是由肽聚 糖层的厚度和结构造成的新出现的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌，被称作超级 细菌，几乎能抵抗人类现在所有的药物，但是万古霉素可以对付它 典型的金 黄色葡萄球菌为球型，直径 0.8μm 左右，显微镜下排列成葡萄串状。

显微图 像金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性金黄色葡 萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长 温度 37°C，最适生长 pH7.4,干燥环境下可存活数周平板上菌落厚、有光泽、 圆形凸起，直径 1~2mm血平板菌落周围形成透明的溶血环金黄色葡萄球菌 有高度的耐盐性，可在 10~15%NaCl 肉汤中生长可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、 蔗糖，产酸不产气甲基红反应阳性，VP 反应弱阳性许多菌株可分解精氨酸， 水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺 胺类药物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感对碱性染料敏感，十万 分之一的龙胆紫液即可抑制其生长 [ [流行病学流行病学] ] 金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄 物中都可找到因而，食品受其污染的机会很多美国疾病控制中心报告，由 金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌金黄色葡萄球菌肠毒 素是个世界性卫生难题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒，占 整个细菌性食物中毒的 33%，加拿大则更多，占到 45%，我国每年发生的此类中 毒事件也非常多。

金黄色葡萄球菌的流行病学一般有如下特点：季节分布，多见于春夏季； 中毒食品种类多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕 及凉粉等引起的中毒事件也有报道上呼吸道感染患者鼻腔带菌率 83%，所以 人畜化脓性感染部位，常成为污染源 一般说，金黄色葡萄球菌可通过以下途径污染食品：食品加工人员、炊事 员或销售人员带菌，造成食品污染；食品在加工前本身带菌，或在加工过程中 受到了污染，产生了肠毒素，引起食物中毒；熟食制品包装不密封，运输过程 中受到污染；奶牛患化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓时，对肉体其他部位的污染金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也 可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染金黄 色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶：a.溶血毒素：外毒素，分 α、β、γ、δ 四种，能损伤血小板，破坏溶酶 体，引起肌体局部缺血和坏死 b.杀死白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞 c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血液或血浆中的纤 维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬细胞的吞噬作用葡萄球菌形成的感 染易局部化与此酶有关 d.脱氧核糖核酸酶：金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核酸酶能耐受高温， 可用来作为依据鉴定金黄色葡萄球菌 e.肠毒素：金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠炎的蛋白质性肠毒素， 分为 A、B、C1、C2、C3、D、E 及 F 八种血清型。

肠毒素可耐受 100°C 煮沸 30 分钟而不被破坏它引起的食物中毒症状是呕吐和腹泻此外，金黄色葡萄球 菌还产生溶表皮素、明胶酶、蛋白酶、脂肪酶、肽酶等 [ [引发病症引发病症] ] 金黄色葡萄球菌肠炎是金黄色葡萄球菌引起的，多因原发疾病长期用抗生 素引起肠道菌群失调所致，抗生素敏感菌株受到抑制，耐药的金黄色葡萄球菌 株趁机繁殖金黄色葡萄球菌为侵袭性细菌，能产生毒素，对肠道破坏性大， 所以金黄色葡萄球菌肠炎起病急，中毒症状严重，主要表现为呕吐、发热、腹 泻呕吐常在发热前出现，发热很高轻症大便次数稍多，为黄绿色糊状便； 重症大便次数频数，每日可达数十次，大便呈暗绿色水样便，外观像海水，所 以叫海水样便粘液多，有腥臭味，有时可排出片状伪膜，将伪膜放入生理水， 脱落的肠粘膜即漂在水面上，对诊断帮助很大体液损失多，患儿脱水、电解 质紊乱和酸中毒严重，可发生休克挑选大便粘液部分涂片，在显微镜下检查 可见大量脓细胞，如经革兰氏染色，显微镜检查可见成堆的大量革兰氏阳性球 菌大便培养金黄色葡萄球菌生长，即可明确诊断 [ [球菌检验球菌检验] ] 第一，金黄色葡萄球菌的检验 样品处理：无菌取 25g 或 25mL 食品样品，放入 225mL 灭菌生理盐水中均质， 制成 10-1 稀释液。

增菌培养：将 10-1 稀释液接入 7.5%NaCl 肉汤或胰蛋白胨肉汤中，37°C 培养 24 小时 分离培养：将上述稀释液或培养液分别划线血平板和 Baird-Parker 平板， 置 37°C 培养 24~48 小时金黄色葡萄球菌在血平板上呈金黄或白色菌落，大 而凸起，表面光滑，周围有溶血圈在 Baird-Parker 平板上菌落为圆形，直径 2~3mm，颜色灰或黑色，周围有一浑浊带 染色观察：从平板上挑取可疑性菌落进行革兰氏染色，金黄色葡萄球菌为 革兰氏阳性，显微镜下呈葡萄状排列无芽胞、荚膜，直径 0.5~1μm 血浆凝固酶试验：吸取 0.5mL 兔血浆与 0.5mL 金黄色葡萄球菌试液浸液肉 汤 24 小时培养物充分混匀，置 36±1°C 培养，每隔半小时观察一次，连续观 察 6 小时，出现凝固，即将小试管倾斜或倒置时，内容物不流动，判为阳性 同时做阴阳性对照url]耐热核酸酶试验：将 24 小时肉汤培养物沸水浴处理 15min，用接种环划线刺种于甲苯胺兰-DNA 平板，36±1°C 培养 24 小时，在刺 种线周围出现淡粉色者为阳性本试验金黄色葡萄球菌为阳性 第二，金黄色葡萄球菌肠毒素检测 金黄色葡萄球菌肠毒素(Staphylococcal enterotoxin，SE)是一组可溶性单链蛋白，是金黄色葡萄球菌分泌的细菌外毒素，在结构和功能上有一定的相 似性。

经典的 SE 分为 SEA、SEB、SEC、SED、SEE 5 型[1]，其中 SEC 又可分为 SEC1、SEC2 和 SEC3 3 种亚型另外，有学者将中毒性休克综合征毒素(toxic shock syndrome toxin 1，TssT 一 1)称之为 SEF[2]近年来，随着分子生物学 新的检测技术的发展和应用，一些新的 SE 或与 sE 食物中毒有密切关联的相关 毒素相继被发现sE 是按其引起呕吐的性质来命名的，新发现的毒素中已经确 定与呕吐反应有关且已被命名为 sE 的分别是 SEG、SEH 和 SEI[3]， 而另一些与 SE 食物中毒密切相关的毒素 (SEJ、SEK、SEL、SEM、SEN、SEO、SEP、SEQ、SER、SEU 和 SEV)，致吐作用尚 未确定或还未通过动物模型来证实，将这些相关毒素命名为金黄色葡萄球菌 sE 类超抗原(Staphylococcal enterotox—in．1ike super antigens)， 因此上 述相关毒素也称为 SE1J—SE1V[4]不同金黄色葡萄球菌菌株产生 sE 的种类有很大差异，同一菌株可以产生多 种 sE另一方面，不同 sE 基因序列间的相似性较高，部分毒素基因存在密切 的连锁关系。

1 1 动物学实验动物学实验是较早采用的一种检测 SE 的方法，常选用幼猫和猴为受试对象， 喂食或腹腔注射含有 SE 的菌株培养液，动物会发生呕吐、腹泻等现象由于各 种动物对 sE 反应的敏感性不一致，灵敏性差，容易产生假阴性结果；其他非 sE 类物质可以对 sE 的作用产生干扰，也容易产生假阳性的结果另外实验用 动物来源困难，成本较高，这种方法的应用受到很大的限制 2 2 免疫学方法免疫学方法 2．1 反向被动胶乳凝结试验(reversed passive latex aggluti． nation，RPLA) 采用间接凝集反应的原理将特异性抗体吸附在 0．6～0．7 Ixm 的聚苯乙烯乳胶颗粒上当抗原和抗体发生特异性结合时，乳胶颗粒发生 凝集，通过观察乳胶颗粒凝集的数量和程度，判定待检样品中 sE 的含量优点 是操作简便、快速、灵敏度较高、成本较低；缺点是致敏乳胶常发生自凝，降 低了其检测的灵敏度，检测时需要孵育 18～24 h，通常只能检测 SEA、SEB、SEC 和 SED 4 种类型的 SEFujikawa 等” 采用高密度乳胶颗粒， 使孵育时间缩短到 3 h，检测的灵敏度可达 0．5 ／L。

2．2 酶联免疫吸附测定(ELISA) 是目前应用最为广泛的检测 sE 的方法，广泛 应用于各型 sE 的检测现已有各种商品化的 ELISA 试剂盒出售2002 年， Poli 等 利用 EIJSA 的方法检测 SEA 和 SEB，检测过程中使用 SEA 和 SEB 的多克 隆抗体，所得检测结果的线性范围在 0．05～1 g／L，能检测到分析缓冲液中 最低浓度为 0．05 L 的 SEA 或 SEB，检测到人尿液中最低浓度为 0．1 L 的 SEA 或 SEB目前，ELISA 检测中较多采用单克隆抗体，进一步提高了 ELISA 检测的 水平ELISA 检测 SE 时，葡萄球菌 A 蛋白、内源性酶类、基质蛋白可以导致假 阳性反应的发生据文献报道，不同检测样本中所含无关抗原引起的交叉反应 使得假阳性反应的发生频率较高，可达 13％ ～85％ ELISA 检测过程需要的 时间较长，完成整个检测需要 3 h商品化的试剂盒只能检测到 SEA～ SEE，不 能检测新型的 sE，且无法同时检测多种类型的 sE近年来，将传统的 ELISA 方 法与其他的方法相结合，如化学发光法等，可以达到提高检测的灵敏度。

2．3 免疫荧光技术(immunofluorescence technique)等 使用 Cy5 荧光染料标 记 SEB 检测抗体，用荧光微量滴定板检测器(fluorescence mierotiter plate reader)检测荧光强度，与传统的 ELISA 相比，检测时间明显缩短，有着广阔的应用前景2OO4 年，Alefantis 等 利用夹心 ELISA 的原理，在磁珠微粒上包被 捕获抗体，检测抗体标记上荧光染料(Alexa fluor647)，加入待测物质后可以 形成结合紧密持久的抗原抗体夹心复合物，这样可以大大减少抗体孵育时间和 洗涤时间用波长 635 nlTl 的红色激光激发，荧光物质产生的波长为 665nnl 的荧光可以用分光光度计进行检测与传统的 ELISA 相比，检测孵育次数和时 间减少，完成整个检测的时间仅需 40—50 min，检测时问大大缩短，检测的灵 敏度高，可以检测到浓度为 100 I L 的 SEB2002 年，Peruski 等 应用时间分 辨荧光测定(time—resolved fluorescence assay，TRF)检测 SEB检测抗体 标记有稀土元素铕(Europium，Eu”)，向检测抗体中加入增强溶液可使铕分解 产生荧光信号，铕分解生成的微胶粒，能够将信号扩大近 100 万倍，。