寄生虫病学粪便检查_Microsoft__文档.doc

寄生虫病学粪便检_Microsof t_Word_文档寄生虫病学粪便检查一、 概述粪便检查是蠕虫病生前诊断的重要方法之一因为绝大多数的寄生性蠕虫都是寄生在消 化道内的，所以它们产生的卵、幼虫或节片也都是随着宿主的粪便排出体外的二、 实验目的1、 学会用涂片法、沉淀法和漂浮法来检查粪便中的蠕虫卵和球虫卵囊等2、 在显微镜下辨别虫卵和卵囊，并且能与粪便中的非寄生性物质相区别三、 实验方法及器材方法：1、在显微镜下辨别虫卵和非寄生性物质2、直接涂片法3、饱和盐水漂浮法4、水洗沉淀法5、离心沉淀法6、尼龙筛淘洗法器材：双日显微镜带虫卵的羊粪带虫卵的牛粪玻片盖玻片四、 操作过程1、 在显微镜下辨别虫卵和非寄生性物质用工具挑取-•粒绿豆或者黄豆大小的粪便置于玻片上涂匀盖上盖玻片直接低倍镜辨别虫卵和非寄生性物质2、 直接涂片法：滴水（在我玻片上滴上1 — 2滴甘汕水或清水）一取样（用工具挑取一粒绿豆或者黄豆 大小的粪便）一与水混合一搅拌均匀一将粗的粪渣拨去一摊匀（厚薄程度以能透视下面的 字体为宜）一镜检（三片以上）优点：该方法操作简便、快速且不需要很多仪器设备，对各种虫卵都有检出的可能 缺点：捡出率很低。

甘油水：甘油：水=1 : 13、饱和盐水漂浮法（1）、原理：应用比重较虫卵大的溶液作为漂浮液，使虫卵或卵囊等漂浮于液体表 面，以便于我们收集2）、优缺点：优点：操作简便，特别是对大多数的线虫卵及球虫卵囊等比重较轻 的虫卵，木办法具有特别的效果，检出率很高因此，在兽医预防和诊断的工作中应用十 分广泛缺点：对比重较大的虫卵（如吸虫卵、棘头虫卵）检出的效果很差A、取粪样（5 - 1 Og）置于容器内一加少量的饱和盐水一搅拌成糊状一再加盐水（约 1 0 — 2 0倍）搅拌均匀一过滤一静置（3 0 - 4 0分钟）用铁丝圈沾取粪液上浮膜一镜 检4、 水洗沉淀法1） 原理：寄生虫虫卵的比重比水重，可自然沉于水底因此可利用自然沉淀的方法， 将虫卵集中于水底便于检查沉淀法多用于比重较大的虫卵如吸虫卵和棘头虫卵的检查2） 优缺点：优点：多适用于检查吸虫卵、棘头虫卵和绦虫节片，特别是在同一种粪样收集量较多的 时候，多采用该方法，该方法操作简便缺点：对比重较小的虫卵检出率则非常低，如线虫、球虫卵囊等取样（10 —50g）—置于容器内一先加少量的清水一搅拌成糊状一再加水（20—30倍） —搅拌均匀一过滤（40—60目）一将制备好的粪液置于容器内一加满水一静置（20—30 分钟）一倒去上清液（约2/3）—再加水一搅拌一静置（随着粪液逐渐变稀，静置的时间 可以相对缩短，但不能少于5分钟上）一反复操作至液体透明为此一倒去上清液，留下少 量的水一吸取沉淀物镜检（所取的沉渣不能太浓，否则在镜检时视野模糊）。

5、 一离心沉淀法取样（3g） —加清水（10 — 15ml） 一搅拌一过滤（40 — 60目）一称量一离心（1500 — 2500转/分，时间为1—2分钟）一吸去上清液一再加水一搅拌一称量一再离心（一般离 心两次）一吸去上清液一吸取沉淀物镜检6、 尼龙筛淘洗法优缺点：该方法操作迅速、简便，特别是对比重较大的虫卵检出率很高，但对比重较小 的虫卵检出率几乎为零操作方法取样（5-50g） 一加清水（10倍）一搅拌一过滤（经两层过滤，一层为40 — 60日金属 筛，另一层为260目尼龙筛）一将第一•层留下的粗粪渣倒去一将尼龙筛中混浊的粪液用清 水淘洗（直至液体透明为此）一滤干尼龙筛中的水一收集沉渣（用少量的水沿网壁淋洗） —置于烧杯中一静置一倒去上清液一吸取沉淀物镜检五、作业1、 描绘镜检时所见到的虫卵；2、 比较实验中所用粪检方法的优缺点1材料与方法1. 1实验材料六安市附近某养鸡场提供一只典型球虫病鸡1.2试剂和仪器2. 5%重铭酸钾溶液、饱和食盐水溶液、生理盐水、吸管、40 U铜丝筛、260 H尼龙筛、 研钵、平皿、双目生物显微镜（型号:XS-200,江南光电集团）、低速离心机（型号： 800,江苏天由有限公司）、电热恒温培养箱等。

1.3卵囊的分离与培养取病鸡盲肠，刮取其内容物利黏膜，研碎后加生理盐水搅匀，经40目铜丝筛和260 U 尼龙筛过滤，滤液2000r/min,离心lOmin,收集沉淀沉淀置2. 5%重铭酸钾溶液中,在 29C恒温培养箱内培养成熟，然后将成熟的卵囊液置4C冰箱中保存备用1.4球虫卵囊的接种1.4. 1显微镜镜检球虫卵囊数取冰箱中在4C保存的胞子化卵囊悬液，2000r/min, lOmin,弃上清，同上速度和时间 离心3、4次，洗去重铭酸钾;加饱和食盐水漂浮，吸取上层漂浮液于另一离心管中，加人 大量生理盐水离心沉淀，弃上清，再加生理盐水离心（速度和时间同上），然后将最终沉淀 （卵囊悬液）做倍比稀释用牙签沾取稀释后的卵囊液，点在载玻片上，显微镜下观察，利用血球记数板记数，观 察卵囊中子泡子的成熟程度，卵囊中有4个子弛子形成，说明此球虫」经具有感染性1.5虫种鉴定观察1.4.1中获得卵囊形状、颜色、大小等特征，记录最短抱子化时间，并分别随机测 量50个抱子化卵囊，抱子囊大小，并将测量数据进行差异显著性检验（F检验）参阅有关文献进行虫种鉴定［3-8］。