野百合碱处置大鼠肺动脉高压模型的塑造.doc

野百合碱处置大鼠肺动脉高压模型的塑造肺动脉高压尤其是特发性肺动脉高压(IdiopathicPulmonaryArteryHypertension,IPAH)是一种预后极差的疾病,其发病机制不明,医治棘手野百合碱(Monocrotatine,MCT)属于豆科植物野百合属，它所引发的肺动脉高压(PulmonaryArteryHypertension,PAH)大鼠是一种较为理想的肺动脉高压动物模型[1,2],在MCT-PAI动物模型大鼠血清中已发觉内皮素-1(ET-1)、心钠素(ANP及血栓素2(TXB2明显升高，而环鸟苷酸(CGMP降钙素基因相关肽(CGRP及6-酮-前列腺素(6-keto-PGF1a)明显下降[3]但不清楚这些炎症介质的改变是PAH发病的起始缘故，抑或是PAH的结果作者观看MCT所致PAH大鼠血清对肺动脉压力、肺血管重塑的阻碍,以了解炎症机制在PAH发病进程中的作用1材料与方式实验动物与MCT容液配制雄性WisterSD大鼠140只，体重150〜180g,由中国医学科学院北京协和医院实验动物中心提供；MC■结晶(美国产)溶解在盐酸(HCL)溶液，用碳酸氢钠(NaHC03调整pH为的溶液。

MCT肺动脉高压动物模型成立MCT注射大鼠（单剂腹腔注射60mg/kg-1）20只为MCT-PAH动物模型组（MCT组），以相同剂量等张生理盐水以相同方式注射正常大鼠10只为对照组（IS组）；两组大鼠正常饲养，每隔7d取各组大鼠1只处死，行大体病理观看，且取血标本及肺组织保留；对照组在第28天（IS28），实验组在第28天（MCT28、第42天（MCT42各取大鼠5只行右心导管检查及肺动脉病理观看对照组用大鼠血浆（DB和实验组用大鼠血清（SB制备DB制备：取成年雄性WistarSD级大鼠20只，体重150〜180g在每只大鼠的尾静脉处切一约1mm勺切口，同时滴入肝素钠和生盐水（1:2）溶液〜，取血〜，别离取20只大鼠尾静脉血20mlSB制备:取成年雄性WistarSD级大鼠20只，体重150〜180g一次性腹腔注射MCT50mg/kg-1饲养至14d,别离取20只大鼠尾静脉血20ml取得肝素抗凝大鼠血后，立刻以1500〜2000r/min离心15〜20min后取上清液，储藏-70C冰柜保留实验与分组将实验大鼠分为对照组（D组）35只，实验组（S组）35只S组从大鼠阴茎静脉注入SB的血浆液，D组用一样剂量一样方式注入DB的血浆液。

两组大鼠别离做好标志，饲养到第7天后每隔2〜4d每组处死大鼠1只,做大体病理观看,第17、2二、53、60天，每组取5只大鼠进行肺动脉血流动力学测定后，处死实验大鼠，取双侧肺组织，10%甲醛液固定保留观看指标右心导管检查：将乌拉坦（北京产）配制成12%浓度，称取大鼠体重，以kg腹腔内注射,麻醉后分离右边颈内静脉,置入微导管（北京协和医院提供）,连接Gould（美国产）心电监护仪，缓慢推送导管至右心房、右心室、肺动脉，显现典型稳固的压力曲线波时，记录右心室压（RVP、肺动脉收缩压（PAP及压力曲线纸速为5mm/s计算平均肺动脉压（mPAP肺动脉病理标本制作：切开大鼠左侧胸腔，取左侧肺组织,切除其上附着的纵隔组织后置入10%甲醛液固定，肺门横断取材、石蜡包埋，制片，HE染色统计学处置3 各项数据以（x士s）表示，采纳SPSS统计软件进行单因素方差分析及q查验2结果MCT处置大鼠肺动脉压力（表1、及病理改变对照组大鼠在整个实验期全数生存（10只），而MCT处置大鼠实验进程死亡4只大体病理：对照组大鼠肺组织呈淡红色，未见出血点、瘀点、瘀斑；单剂注射MCT大鼠在MCT714、2一、2八、3五、42天肺组织表现变惨白，均见不同程度的瘀点瘀斑，随时刻延长更趋明显。

实验组SB7、9肺表面大体正常，SB1二、14、17、1九、2一、23、27双侧肺表面变白都可见点状出血灶、瘀斑，右肺中、后叶明显光镜检查：观看对照组肺动脉血管，内皮细胞扁平持续，细胞散布均匀，大小厚薄较一致实验组肺动脉内膜增生，中层增厚（图一、2），并随时刻的延长日趋严峻（图3、4），SB60动脉中膜厚度比例已达正常对照组的两倍之多（图5）电镜检查：对照组正常肺动脉内皮细胞扁平牢牢地粘附在基底膜上，细胞的游离面显现微绂毛突起实验组SB17肺动脉壁增厚，滑腻肌增生，滑腻肌细胞核固缩（图6）;SB22滑腻肌细胞增宽，胶原纤维增生（图7）;SB53内皮细胞基底部变窄，向血管腔内突出，部份核固缩，空泡拱桥样改变（图8）;SB60弹力板粗不匀，内皮细胞空泡形成，血管壁增厚（图9）两组肺动脉血流动力学检测结果见表2表1MCT处置大鼠肺血流动力学与右心肥大指数的转变（略）表2实验组与对照组肺动脉平均压与右室压的比较（略）讨论MCT被肝脏激活为亲电子的MCT引发肺血管内皮损伤及后续的肺血管重塑［4］MCT可重复诱导严峻的进展性肺动脉高压在本研究中被证明，肺动脉压力几乎增加了3倍，同时观看到右室肥厚和大鼠体重的下降，光镜下观看到肺血管重塑明显，表现为内膜增生中层增厚及机化。

而且MCT单剂注射后有4只大鼠完成实验前因严峻右心衰竭死亡对MCT-PA模型和PAH患者研究发觉，许多炎症因子与肺动脉收缩、细胞增殖、微血栓形成有着紧密的相关性［5］目前较公认炎症因子有：TXA二、PGI二、NO（—氧化氮）、ET-15-HT（5-羟色胺）、VIP（肠道血管活性肽）、VEGF（血管内皮生长因子）及肾上腺髓质素但上述炎症因子与肺动脉高压发病相关研究的对象往往是MCT-PA动物模型MCT诱导大鼠的PAH机制是MCT直接对肺动脉毒性作用抑或后继炎症反映的综合作用，故仍不清楚炎症因子的改变是肺动脉高压的标志抑或病因也不能证明炎症因子可直接致使PAH早在1991年EstepJE等［6］用］14C］标记MCT研究MCT60mg/kg-1腹腔内注射24h时组织散布，红细胞、肝脏、肾脏、肺脏及血浆组织MCT水平别离为4九、2五、九、10、2nmol/g-1，以为红细胞作为MCT代谢产物的载体将毒性的MCT产物从肝脏运输到肺，产生肺组织毒性作用本研究利用MCT处置大鼠14d后的血清作为炎症因子复合体，能够排除MC啲直接毒副作用对肺血管的损害，以观看炎症因子是不是可能引发肺血管的重构与正常大鼠的血浆液（DB组）对照，发觉SB17已显现肺动脉内膜增生、中层增厚、腺泡小动脉的机化，这种病理改变而且在SB2二、53、60更趋明显。

提示炎症因子的复合液能够直接引发肺动脉内皮细胞损害及血管的重塑SB17、2二、53、60的MPAPRVP与DB组相较，虽有上升趋势，但两组不同无显著性,说明肺动脉压力的升高比MCT-PA大鼠缓慢些本研究第一次证明了MCT处置的血浆能够引发肺血管的重塑，提示炎症因子在特发性肺动脉多发病机制中可能起着重要的作用，哪些炎症因子可引发肺动脉高压应做深切的研究参考文献】1 曾志羽,黄海,李醒三.非洛地平对野百合碱所致大鼠肺动脉高压的作用.中华结核和呼吸杂志，2002,25(8):461〜464.2 陈瑞芬,周光德,曹文军,等.野百合碱诱导实验性肺动脉高压病理形态观看.电子显微学报，2002，21(1):1〜4.3 孙燕妮，刘忠令.野百合碱诱发肺动脉高压大鼠血管活性物质的转变.中国药理学通报，2001，17(5):573〜573.PanLC，LameMW，MorinD，，1991，110(2):336〜346.HarrisonW，JosephLoscalz.PulmonaryArterialHypertension.NJEM,2004,351:1655〜1665.4 EstepJE,LameMW,MorinD,etal.[14C]monocrotalinekineticsandmetabolismintherat.DrugMetabDispos,199119(1):135〜139.。