酶学性质研究.docx

    酶学性质研究    1.6 酶学性质研究（1）pH 的影响：分别测定粗酶液在pH3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0下的酶活力，确定其最适反应pH 值；将粗酶液用上述pH 缓冲液稀释后，45℃水浴保温4小时后，测定其剩余酶活力2）温度的影响：分别在40~95℃下测定酶活力，确定其最适反应温度；将酶液在40～90℃范围内的不同温度下保温60 min 后，测定其剩余酶活力3）金属离子的影响：在酶液中分别添加各种金属离子，使其浓度为4 mmol ／L ，然后测定酶活力2.5 纤维素酶粗酶液酶学性质2.5.1酶反应的最适pH 值和酶的pH 稳定性粗酶液在不同pH 值下测得的酶活及在不同pH 值下处理4小时后测得的相对酶活示于图11结果表明，CMCase 在pH 3.5～4.5有较高的酶活力，最适反应pH 值为4.0；β-Gluase 在pH 4.5～5.5酶活力较高，最适反应pH 值为5.0，同样方法测得FPA 最适反应pH 为5.0可见，该菌株所产的各组分纤维素酶是酸性酶图11表明，该菌产CMCase 在pH3.0～6.0的范围内，β-Gluase 在pH3.5～5.5的范围内，酶活力均可保持在80％以上，说明该菌株所产酸性纤维素酶可在较宽的pH 值范围内保持其酶活力的稳定性。

2.5.2 酶反应的最适温度和酶的热稳定性在不同温度下直接进行酶促反应测得的酶活及在不同温度下热处理60 min 后于最适反应温度和最适pH 下测得的相对酶活(以4℃保存的酶液活力为100%)示于图12结果表明，CMCase 、β-Gluase 及FPA 最适反应温度均为65℃c e l l u l a s e a c t i v i t y ( U .m l -1)pHr e l a t i v e y a c t i v i t y （%）c e l l u l a s e a c t i v i t y ( U .m l -1)temperature ( o C )r e l a t i v e y a c t i v i t y （%）图11 pH 值对酶活力及酶稳定性的影响Fig.10 Effects of pH value on Cellulase activity andstability 图12 温度对酶活力及酶稳定性的影响 Fig.11 Effects of temperature on activity andstability of cellulase图12表明，温度低于60℃时，CMCase和β-Gluase能保持90％以上的酶活性，酶液在80℃下保温1小时，CMCase仍保持10%的活性，70℃热处理1小时，β-Gluase活性仅损失60%。

但两种酶在温度超过65℃后，酶对热的耐受性急剧下降2.5.3金属离子对酶活性的影响考察了14种金属离子对酶活性的影响，以不添加金属离子的酶液酶活为100%计算相对酶活，结果见表1结果表明，Fe2+、Mn2+对两种酶活有明显的激活作用，Mg2+对酶活有一定的激活作用，Hg2+、Cu2+和Ag+三种重金属离子对酶活有强烈的抑制作用，而所考察的其他金属离子在实验浓度范围内对酶活无明显影响表1 金属离子对酶活性的影响Table 1 Effects of metal ion on cellulase activityMetalHg2+Cu2+Ag+Pb2+Co2+Zn2+Fe3+Ni2+Al3+Ca2+Ba2+Mg2+Fe2+Mn2+ ionCMCase12.1 28.7 42.2 51 92.5 98.6 92.1 105 100 99.5 103 123 143 134（%）β-Gluase15 20.5 57.4 60 102 104.6 101 99.7 94.9 109 103 114 145 125（%）3 小结  -全文完-。