氨基酸的薄层层析.docx

实验4 氨基酸的薄层层析实验原a薄层层析是一种将固定相在固体上铺成薄层进行层析的方法由于该方法具有操作简便、 层析展开时间短、灵敏度高、结果可视化等优点，已被广泛应用于生物化学、医药卫生、化 学工业、农业生产和食品等领域，对天然化合物的分离和鉴定也已广泛应用薄层层析时一般将固体吸附剂涂布在平板上形成薄层作为固定相当液相（展开溶剂） 在固定相上流动时，由于吸附剂对不同氨基酸的吸附力不一样，不同氨基酸在展开溶剂中的 溶解度不一样，点在薄板上的混合氨基酸样品随着展开剂的移动速率也不同，因而可以彼此 分开即通过吸附-解吸-再吸附-再解吸的反复进行，而将样品各组分分离开本实验应用硅 胶作为固相支持物，用羧甲基纤维素钠作为粘合剂，以正丁醇、冰醋酸及水的混合液为展开 剂，测定混合氨基酸中各分离斑点的Rf值（Rf值详见第一篇第三章第五节），以分离和鉴别 混合氨基酸的成分氨基酸的显色反应：茚三酮水化后生成水化茚三酮，它与氨基酸发生羧基反应生成还原 茚三酮、氨基醛，与此同时，还原茚三酮又与氨基茚三酮缩合生成蓝色化合物而使氨基酸斑 点显色一）样品1 .氨基酸标准溶液：（1 ） 0.01mol/L丙氨酸：称取丙氨酸8.9mg溶于90%异丙醇溶液至10ml。

2 ） 0.01mol/L精氨酸：称取精氨酸17.4mg溶于90%异丙醇溶液至10ml3 ） 0.01mol/L甘氨酸：称取甘氨酸7.5mg溶于90%异丙醇溶液至10ml2 .混合氨基酸溶液：将0.01mol/L丙氨酸、精氨酸、甘氨酸按等体积制成混合溶液二）试剂•寸-(二日01)迥理s氐参• z(日X9 )尝蚣哽• ImnmHlll)埋现nlllt&M.O (NA - s IOI 1 - U 01m(.av)圈氐彩氐Hh现 81.0 (.a v)圈||||&器-埋现圈lllt&M.O •寸 柬固症旺坦一、,sHH4n!?§(I - s 010108 堡-H •cn旺瞿凄、sffi、H 、拨帷、&彩§5嘿 luIOOOIHh现 * 摇懈螺H-EM旺寮器二 ONUWU)摇«螺由«旺寮 gso • z(.duc宜®• I成曹我 .q 农坦氐、£-用«( z) 其寞gys货羿二日8摇懈螺H-gM 旺寮g咨.号、片il -嫌羿(I)Tni£s ,lII一S.K羞tt(ll)世亚 T -affl勰K• 8 -星哽• L -»蕾田部• 9 忌区昌U层b强的边缘效应3 )干燥：将玻璃板水平放置，室温下c.应逐步加温，温度过高易导致放置0.5h，自然凉干。

4)活化：70确烘干60分钟涂层裂开2 .点样(1)标记：用铅笔距底边2cm水平线上a.用冷风吹干，避免破坏氨基酸均匀确定4个点并做好标记每个样品间最好从玻板背面吹相距1cmb.重复点样时必须等第一点样品(2 )点样：用毛细管分别吸取丙氨酸、精氨酸、甘氨酸及混合氨基酸溶液，轻轻接触薄层表面点样加样原点扩散直径不超过2mm点样后用电吹风a轻轻吹干，必要时重复加样b干后再点第二点3 .层析将薄层板点样端浸入展层-显色剂，展层-a.样点不能浸入到溶液中显色剂液面应低于点样线a盖好层析缸b.将层析缸盖涂上凡士林，防止盖b，上行展层当展层剂前沿离薄板顶端2cm时，停止展层，取出薄板，用铅笔描出溶剂前沿界线层析液挥发样品还卷方殉点样点些剂 ■畦报板图9-8薄层层析装置4 .显色 用热风吹干或在90C下烘干30min，即可显出各层斑点三）注意事项1 .吸附剂薄层层析用的吸附剂如氧化铝和硅胶的颗粒大小一般以通过200目左右筛孔为宜，如果 颗粒太大，展开时溶剂推进速度太快，分离效果不好反之，颗粒太小，展开时太慢，斑点 易拖尾，分离效果不好2 .点样点样的次数依照样品溶液的浓度而定，样品量太少时，有的成分不易显示，样品量太多 时易造成斑点过大，互相交叉或拖尾，不能得到很好的分离，点样后的斑点直径一般为0.2cm。

3.避免污染整个层析过程中，避免用手接触层析板，必要时戴上手套结果与讨论（一）结果1 .层析结果:溶剂打沼99丙tr指狙氨合基酸酸酸图9-9氨基酸薄层层析结果图2.数据记录按照下表记录各氨基酸色斑中心至样品原点中心距离（a ）及溶剂前缘至样品原点中心距离（b）色斑中心至样品原 溶剂前缘至样品原各斑点点中心距离（a） 点中心距离（b）丙氨酸甘氨酸精氨酸混合点1混合点2混合点3平均a值。