水-中-细-菌-总-数及大肠菌群的检测方案.docx

水 中 细 菌 总 数 的 检 测及大肠菌群的测定一、 实验的目的要求1、学习并掌握水的细菌学检测方法2、了解水质状况与细菌数量在饮用水检测中的重要性二、实验原理细菌总数是指lml水样在营养琼脂培养基中，于37°C经24h培养后，所生长的 细菌菌落的总数 细菌总数是评价水质污染程度的主要卫生指标我国现行的 生活饮用水标准检验方法GB5750—85规定水样中细菌总数测定是lml水样在普通 营养琼脂培养基中37C经24小时培养所生长的细菌菌落的总数所测定的细菌总 数增多说明水被生活废弃物污染，但不能说明污染的来源因此必须结合总大肠 菌群数来判断水污染的来源和安全程度本实验应用平板计数技术测定水中细菌总数由于水中细菌种类繁多，它们 对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下， 使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落， 计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值目前一般是采用普通牛肉膏蛋白胨琼 脂培养基平板菌落计数法的优点：能测出样品中的活菌数此法常用于某些成品和生物制品检定以及食品、 水源的污染程度的检定等缺点：手续较繁，而且测定值常受各种因素的影响。

生活饮用水细菌卫生标准我国饮用水卫生标准：W 3个大肠菌群/1L饮水, W 100个细菌总数/1ml饮水（器和材料（三）实验器材（1） 菌落总数的测定：1）培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，无菌生理盐水2）器材：灭菌三角瓶，灭菌的具塞三角瓶，灭菌平皿，灭菌吸管，灭菌试管等 （2）大肠菌群的测定；1）培养基：伊红美蓝琼脂培养基：蛋白胨10g，乳糖10g, KHPO 2g, 2%伊红水溶液20M1, 0.65%美蓝24水溶液 10mL，琼脂 17g，水 1000mL, pH7.1制法：将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶于水中，校正pH后分装.121°C灭菌 15min备用临用时加入乳糖并熔化琼脂，冷至50-55C，加入伊红和美蓝溶液, 摇匀，倾注平板2）器材：灭菌三角瓶，灭菌的具塞三角瓶，灭菌平皿，灭菌吸管，灭菌试 管等四、实验内容：（一）、培养基的制备：实验前事先准备好培养基平板（方法见上），每小组2-4个平板二）、取水样：1、自来水的取样：先将自来水龙头用酒精棉擦拭，再用酒精灯火焰灭菌， 打开龙头放水1-2分钟，用无菌空三角瓶接取水样200毫升2、纯净水取样：用消毒酒精棉擦拭纯水机出口后，先放走部分水，再用 无菌空三角瓶接取水样200毫升。

3、池水、河水或湖水应取距水面10—15cm的深层水样，先将灭菌的带玻璃 塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中, 盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查，否则需放入冰箱 中保存三） 、接种培养：（要求无菌操作）用无菌吸管吸取1毫升水样，加入平板中（每个水样平行做两个平板），用无菌涂布器涂抹均匀，在培养皿侧面标注清楚后，置于37 °C恒温箱内经 24h-48小时培养后，统计细菌菌落的总数四） 、菌落记数：菌落计数及报告方法作平皿菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要时用放大镜检查以防遗漏在 记下各平皿的菌落数后，应求出同稀释度的平均菌落数，供下一步计算时应用 在求同稀释度的平均数时，若其中一个平皿有较大片状菌落产生时，则不宜采用， 而应以无片状菌落产生的平皿作为该稀释度的平均菌落数若片状菌落不到平皿 的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半皿计数后乘2以代表全 皿菌落数然后再求该稀释度的平均菌落数五、 实验注意事项六、 实验报告内容；1、记录实验方法和步骤2、列表说明检测结果1）自来水平板苗落数自来水中細菌总数122）饮用水平板自来水中细菌总数13、思考题：（1）从自来水的细菌总数结果来看，是否合乎饮用水的标准？（2）你所测的水样污秽程度水中大肠菌群的测定滤膜法滤膜法所使用的滤膜是一种微孔滤膜。

将水样注入已灭菌的放有滤膜的滤器 中，经过抽滤，细菌即被均匀地截留在膜上，然后将滤膜贴于大肠菌群选择性培 养基上进行培养再鉴定滤膜上生长的大肠菌群的菌落，计算出每升水样中含有 的大肠菌群数（MPN）1）准备工作：1）滤膜灭菌：将3号滤膜放入烧杯中，加入蒸馏水，置于沸水浴中蒸煮灭菌3次，每次15min 前两次煮沸后需换无菌水洗涤2-3次，以除去残留溶剂2）滤器灭菌：准备容量为500mL的滤器，用点燃的酒精棉球火焰灭菌，也 可用121°C高压灭菌20min3 ）培养： 将品红亚硫酸钠培养基放入37C培养箱内预温30-60min2)过滤水样：1)用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘部分，将粗糙面向上贴放于已灭菌的滤床上， 轻轻地固定好滤器漏斗水样摇匀后，取333mL注入滤器中，加盖，打开滤器 阀门，在一50kPa压力下进行抽滤2)水样滤完后再抽气约5s，关上滤器阀门，取下滤器，用无菌镊子夹取滤膜 边缘部分，移放在品红亚硫酸钠培养基上，滤膜截留细菌面向上与培养基完全紧 贴，两者间不得留有间隙或气泡若有气泡需用镊子轻轻压实，倒放在37°C培 养箱内培养 16-18h 3)结果判定：1) 挑选符合下列特征的菌落进行革兰氏染色，镜检。

① 紫红色，具有金属光泽的菌落② 深红色，不带或略带金属光泽的菌落③ 淡红色，中心颜色较深的菌落2) 凡是革兰氏阴性无芽胞杆菌，需再接种于乳糖蛋白胨半固体培养基， 37C 培养6-8h,产气者，则判定为大肠菌群阳性3) 1L水样中大肠菌群数等于滤膜法生长的大肠菌群菌落数乘以3。