红外分光光度法鉴别维生素C片.docx

近红外分光光度法测定果蔬中维生素 C 的含量摘要目的要建立维生素c片快速、专属的鉴别方法方法以无水乙醇为溶剂进行提 取,采用红外分光光度法(溴化钾压片)进行定性鉴别结果维生素C片与维生素C 对照品的红外吸收光谱完全一致,并与国家药典委员会颁布的《药品红外光谱集》 中的维生素C光谱一致该方法专属性强、快速、简便，测定条件允许范围较宽, 抗干扰能力强，无需对样品进行特别处理，可用于测定微量维生素CAbstractThe purpose of the article is to establish a rapid and specific method of identifying Vitamin C tablet. The method uses ethanol as solvent extraction, and infrared spectrophotometry (KBr tablet) for qualitative identification. The results is that the infrared absorption spectrum of vitamin C tablets is in accordance with vitamin C reference substance and "Drug infrared spectra collection" of vitamin C promulgated by the National Pharmacopoeia Commission. The method is specific, rapid, simple and allows a wide range of anti-interference ability, doing without special handling of samples, which can be used for determining the minim amout of vitamin C.关键词 水果 维生素 C 红外分光光度法Keywords fruit Vitamin C Near infrared spectrophotometry前言VC具有抗坏血病的效应，所以又称抗坏血酸(Ascorbieaeid) •它是人体不可缺 少的一种重要营养物常存在于新鲜的蔬菜和水果中．由于抗坏血酸参与体内一系 列代谢和反应，能促进胶原蛋白和粘多糖成，增加微血管的致密性，降低其通透 性及脆性，增加机体抵抗力.缺乏时，引起造血机能障碍、贫血、管壁通透性增 加，脆性增强和血管容易破裂出血，严重时肌肉、内脏出血死亡，这些症状在 I 临床上通常坏血病.因此抗坏血酸不仅是人体所必须的由外界提供的营养物质， 同时也是维持正常生命过程所必的一类有机物•人正常每天最低需要量为75mg, 长期缺乏抗坏血酸会导致某种营养不良症状及相应的疾病，所以， VC 对维持人体 健康十分重要•对部分食 人们合理膳食，正确补充营养素有一定意义。

材料与方法1 实验原理Folin B试剂有很强的氧化活性，能将还原型L 一抗坏血酸氧化成L 一脱氢抗坏 血酸，L 一脱氢抗坏血酸的最大吸收波长位于920nm，在较大的浓度范围内，遵循 朗伯一比耳定律可以测定水果中还原型抗坏血酸的含量2 仪器与试剂UV 一 3150型紫外可见近红外分光光度计：日本岛津公司：Plus420A型酸度计： 美国ORION公司；FSH—II型高速匀浆机：江苏金坛；恒温培养箱：上海跃进：pH3 的三氯乙酸溶液：准确称取 5mg 三氯乙酸（分析纯），加入适量蒸馏水溶解，定量 转移到100mL的容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度；Vc标准溶液（100tzg/mL）：准 确称取60°C真空干燥2h的10mgVc （:［北京鼎国，Sigma分装），加入适量pH3.三 氯乙酸溶液溶解，定量转移到 lOOmL 的棕色容量瓶中，用 pH3 三氯乙酸溶液稀释 至刻度，暗处保存；Folin B试剂：以上试剂均为分析纯：水为二次离子交换水3 实验方法取两支10mL具塞比色管，其中一支加入适量的Vc，另一支不加；然后分别依次 jJHJk2mL的Folin B试剂，用pH3三氯乙酸溶液稀释至刻度，摇匀，反应5min 后, 以试剂空白为参比，使用lcm玻璃吸收池在920nm波长处测定吸光度A值。

平行3 次，取平均值二 结果与讨论1 测量波长的选择0. 5 按试验方法以试剂为空白，将显色后的溶液在 400—600 nm 区 0.间内绘制 吸收曲线，如图I所示.结果表明最大吸收波长为:520 ■- nin，实验选用520 nin为测定波长.@1吸收曲线FlgJ Absorption spectra2 显色剂加入量试验结果表明，0．004 mol／L 2，2'一联毗啶用量在 8．0—10．0mL 范围内 吸光度达到最大且稳定．本法用量为 9 mL．3 反应时间与温度的影响分别考察了反应时间与反应温度对体系吸光度的影响，结果表明，室温度时定容5 —10 rain 之内即可显色完全，且显色在 100 rain 内相当稳定．本文选择在室温 下反应 10 min．4 离于对试剂的选择当CTMAB加入5 mL时对2, 2' — bipy—Fe2+— VC形成络合物的吸光度和吸收波 长无显著影响，而加入三乙醇胺则可使显色体系的吸光度增大．5 掩蔽剂及用量选择在试验中发现，被抗坏血酸还原后剩余的Fe3+也可以与2, 2' —联吡啶生成有色 配合物，并在光还原作用下还原为Fe2+与2，2' —联吡啶的配合物，因此需要用 掩蔽剂来掩蔽剩余的Fe3+，本实验选用1 mol / LNaF溶液作为掩蔽剂，进一步研 究表明， 0．25mL 以上的 lmol／LNaF 溶液即能达到掩蔽作用．故本文选用 lmL 的 l mol/ L NaF 溶液作为掩蔽剂．6 标准曲线制备按试验方法对标准系列进行显色测定，结果表明：VC质量浓度在0. 088一7. 0 mr, /L范围内符合比尔定律；回归方程为：A=0. 003 25+231 49. 455 03c（mol / L）， 相关系数为0. 999 91；表观摩尔吸光系数占=2. 40X104L. mol〜.cm〜.7 干扰离子的影响当相对误差控制在±5％以内，对 1. 0 mg/ L 的抗坏血酸进行测定时，下列倍数 的物质不干扰： Na+， Cl 一， K+， N03 一， Zn2+（1000 倍）， M92。

S04“， A13+（500 倍）， I' （100 倍）， VitaminBI， VitaminE（100 倍），常见离子中 Ca2+（1000 倍）， Ba2+对抗坏血酸的测定产生干扰，但在样品中Ba2+与Ca2+的含量一般比较低.通 常不需要分离处理，可以直接测定.1 mL的l mol / L NaF可掩蔽Fe…，体系选 择性较好.8 样品分析样品制备和测定分析（1） VC药片.分别将市售VC白片和VC黄片各一瓶倒人玻璃研钵中研细，充分混 匀后，准确称取VC白片0. 019 841 g和黄片0. 0138 6 g置于2个100 mL的容 量瓶中，用pH 3三氯乙酸溶液浸取并定容•充分摇动使其粉末分散约l-2 min 后, 立即用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，精密移取过滤液1. 50 mL于50 mL比色管中 定容，按试验方法进行测定结果如表 1.表1药片中维生素C含量测定结果Tab. 1 The determination results of content of vitamin C in medical tablet（n=6）样品 本法测定值g/100g|加入量/ug|回收率/ % | RSD/ %VC白片68.0290102.80.701VC黄片57.8989103.70.325(2) 食物样品.称取去皮猕猴桃30. 853 9 g和黄瓜25. 425 8 g浸在一定量的 pH 3三氯乙酸溶液中，用捣碎机捣碎混匀并过滤.取过滤后的猕猴桃果汁置于500 mL的容量瓶中、黄瓜过滤液置于100 mL的容量瓶中，并用pH 3三氯乙酸溶液稀 释至刻度.充分摇动1—2 min,立即用干燥滤纸滤去初滤液，精密分别移取猕猴 桃过滤液1. 00 mL和黄瓜过滤液5. 00 mL于50mL比色管中定容，按试验方法进 行测定，结果如表 2.表 2 食物中维生素 C 含量测定结果Tab. 2The determinatlon results of content of vitamin C in foods(n--6)样品本法测定值加入量/ug回收率/ %RSD/ %猕猴桃0. 238g/100g0.20098.20.541黄瓜10.03mg/100g0.200104.91.41鲜橙多58.50mg/100ml0.20096.31.08(3) 饮料.移取鲜橙多10. 00 mL在一定量的pH 3三氯乙酸溶液中，置于100 mL的容量瓶中，并用pH 3三氯乙酸溶液稀释至刻度.充分摇动1—2 min,精密 移取过滤液2. 50 mL于50 mL比色管中定容，按试验方法进行测定，结果如表2.三 结语(1) 从表2中看出，水果中猕猴桃的维生素C含量较为丰富，在日常生活中应多 食用这类水果，补充身体所需营养素.(2) 从表l和表2中方法的精密度、回收率以及标准曲线的线性关系来看，用分 光光度法测定抗坏血酸是可行的.但是由于抗坏血酸本身性质不稳定，容易降解， 因此在进行样品处理时应注意尽快将样品捣碎浸取在缓冲溶液中.(3) 水果中含有的铁都是以有机物形式存在的，不与 2， 2'一联吡啶直接络合， 则不影响测定结果.水果中的VC在空气中极易被氧化，样品处理时必须用保护剂 防止VC被氧化.保护剂不能用草酸，因草酸具有还原性，本法用三氯乙酸缓冲溶 液作保护剂.参考文献：[1] Manish H. Rantachandran K N & Gupta V K .Talunta.1994.(41):1623[2] Tunmalapalli C M,Williems J C & Stem T N [J],anallem,1994.(27):209L[3] 许卉，贺萍 .催化褐色光度法测定海洋生物中痕量硒 [J]. 分分析化学， 2003,331 (10)；1244[4] 赵丽杰，赵丽萍•催化动力学光度法测定痕量钒(V) [J],沈阳工业大学学报， 2006,28(14);478[5] 刘长增，高灵敏•催化光度法测定痕量锰[J].进化检验，化学分册.2001,37 (8) ;3691[6] 丁良，单金缓，王秀梅，催化动力学光度法测定抗癌中草药仲痕量硒，溴酸钾、罗丹名，B体系[J].光谱学与光谱分析.2004(24);1419[7] Mousavi M F Ghinswand A R & Jahanshsai A R, Tanbanta, 1998,(46);1011[8] 李威平，施青红，刘文涵。

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