Claudin4蛋白在胃癌中表达及临床病理学意义.pdf

C l a u d i n ．4 蛋自在胃癌中搬临床病理学意义C l i n i c o p a t h o l o g i c a lS i g n i f i c a n c eo fC l a u d i n 一4i ng a s t r i cc a r c i n o m a导论文课题起止时间：2Q ! Q 生羔Q 月二至Q 12 生至旦中国医科大学( 辽宁)20 12 ‘年3 月中国医科大学研究生学位论文独创性声明／㈣本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果．据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任论文作者签名：w f v ．nf -中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学．本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学．学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。

学校可以公布学位论文的全部或部分内容( 保密内容除外) ，以采用影印、缩印或其他手段保存论文．论文作者签名：塞盆壶． 指导教师签名：—啤日期：∥肌r ’D ^目录一、摘要中文论著摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·l英文论著摘要⋯⋯．，．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3二、英文缩略语⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5三、论文．前言⋯⋯．：⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·6材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯7讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯? ⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··1 3结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯¨⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯·16四、本研究创新性的自我评价⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1 7五、参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”18六、附录综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·2 1在学期间科研成绩⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．3 4翌| 【谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3 5个人简介⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3 6·中文论著摘要·C l a u d i n ．4 蛋白在胃癌中表达及临床病理学意义目的应用免疫组织化学方法检测c l a u d i n - 4 在胃癌组织及相应癌旁组织中表达的水平，分析其表达与胃癌临床病理学因素之间的关系，并探讨c l a u d i n - 4 在胃癌中表达的临床意义。

’‘材料与方法一、临床病例资料收集1 9 9 8 年1 月到2 0 0 4 年1 2 月在中国医科大学第一附属医院肿瘤外科行胃癌根治性手术的3 2 9 名胃癌患者的术后病理标本及相关病理资料纳入患者均符合以下条件：1 ) 所有患者均行胃癌根治性手术；2 ) 所有切除标本均经病理学检验；3 ) 患者的临床资料完整二、实验方法’免疫组织化学染色采用福州迈新公司M a x Ⅵs i o 矗瑚两步法C l a u d i n - 4 R 抗人单克隆抗体购I n v i t r o g c n ( Z y m e dL a b o r a t o r i e sI n c ．，C A ) 公司正常结肠上皮组织作为阳性对照，相同标本以P B S 代替一抗作为阴性对照免疫组化染色结果-采用双评分半定量法进行评分，判定标准如下：染色强度( o ，未着色；1 ，淡红色；2 ，红色；3 ，深红色) ，阳性细胞率( o ， 7 5 ％) ．两评分相乘，以小于4 分记为低表达组，大于等于4 分为高表达组进行分组分析三、统计分析所有数据均应用S P S S 统计软件( v e r s i o n17 ．0 ；S P S Sf o rW ' m d o w s ，C h i c a g o ，I L ，U S A ) 进行分析。

C l a u d i n - 4 的表达与胃癌临床病理因素之间的关系应用卡方检验方法，与预后结果的分析采用K a p l a n - M e i e r 和C o x 回归方法P 7 5 ％) ．两评分相乘，以小于4 分记为低表达组，大于等于4 分为高表达组进行分组分析评分不一致结果将被记下，并重新进生评分，直至达成一致结果三、统计分析所有数据均应用S P S S 统计软件( v e r s i o n17 ．O ；S P S Sf o rW ' m d o w s ，C h i c a g o ，I L ，U S A ) 进行分析C l a u d i n - 4 的表达与胃癌临床病理因素之间的关系应用卡方检验方法，与预后结果的分析采用K a p l a n - M e i e r 和C o x 回归方法P 6 0性别男女病理生理学特征肿瘤大小( c l n )5肿瘤部位上部中部下部．组织学类型未分化组口D ，t n 3 )生长方式膨胀型中间型浸润型T 分期T 1 ／2飞3 | 41 9 21 3 72 3 89 11 9 91 3 03 l5 32 4 51 0 12 2 87 68 11 7 29 62 3 31 0 0 ( 5 2 ．1 )5 4 ( 3 9 ．4 )9 9 ( 4 1 ．6 )5 5 ( 6 0 ．4 )1 0 2 ( 5 1 ．3 )5 2 0 0 ．0 )9 ( 2 9 ．0 )31 ( 5 8 ．5 )11 4 0 6 ．5 )2 4 ( 2 3 ．8 )13 0 ( 5 7 ．0 )2 3 ( 3 0 ．3 )2 2 ( 2 7 ．2 )10 9 ( 6 3 ．4 )5 1 ( 5 3 ．1 )1 0 3 ( 4 4 ．2 )9 2 ( 4 7 ．9 ) 0 ．0 2 58 3 ( 6 0 ．6 )13 9 ( 5 8 ．4 ) 0 ．0 0 33 6 ( 3 9 ．6 )9 7 0 8 ．7 ) 0 ．0 5 57 8 ( 6 0 ．0 )2 2 ( 7 1 ．0 ) 0 ．0 3 32 2 ( 4 1 ．5 )1 3 1 ( 5 3 ．5 )7 7 ( 7 6 ．2 ) 0 ．0 0 09 8 0 3 ．O )5 3 ( 6 9 ．7 ) 0 ．0 0 05 9 ( 7 2 ．8 )6 3 ( 3 6 ．6 )4 5 0 6 ．9 )：0 ．1 4 71 3 0 ( 5 5 ．8 )淋巴结转移无10 14 8 ( 4 7 ．5 )5 3 ( 5 2 ．5 ) 0 ．9 0 5_ 一_ —————————- _ —————————————- —_ —_ ————————_ —————_ - _ _ _ ————_ - _ —一N o r r r 谊jI n t e 鲫n a lD y s p l a s i aC a n c e rE x p a n d i n gI n t e r m e d i a t eI n f i l t r a t i v e s t o m a c hm e t a p l a s z a图2 ：C l a u d i n - 4 在正常胃粘膜，肠化生胃粘膜，异型增生及胃癌组织( 含膨胀型，中间型和浸润型) 中的表达情况。

∞∞∞柏∞∞∞∞∞∞O^ ‘11111∞o∞8-o．10cII-CjZ的高表达与低表达组相比预后较差 P = 0 ．0 2 3 ，F I G ．3 A ) ；B ．中间型中低表达组术后5 年生存率为7 6 ．4 ％，与膨胀型术后5 年生存率( 6 4 ．5 ％) 相接近，而高表达组术后5 年生存率4 6 ．6 ％接近于浸润型的术后5 年生存率( 5 0 ．7 ％) 后5 年生存率( 5 0 ．7 ％) 见图3 B ) 讨论C l a u d i n 蛋白家族在保持T J s 功能上起着重要作用，其表达水平经常表现出组织特异性的特点最近越来越多的相关研究表明c l a u d i n s 在不同肿瘤组织中出现异常表达或异位表达情况【2 5 2 9 1 在不同的c l a u d i n 亚型中，c l a u d i n ．4 在不同肿瘤组织中的表达经常发生改变C l a u d i n ．4 是c l a u d i n 家族中一个膜蛋白亚型，对于细胞膜的封闭及控制细胞旁路离子转运具有重要作用【1 0 】在相关研究中关于c l a u d i n - 4 在癌前病变中的研究较少C u n n m g h a m 等人．[ 3 0 1报道c l a u d i n - 4 在正常胃粘膜中的表达率仅为1 5 ％，而在肠化生和异型增生的组织中c l a u d i n - 4 的表达水平均达到了1 0 0 ％。

M a t s u d a 等人【2 7 】同样报道了c l a u d i n - 4 存在于肠化生粘膜中，而不存在于正常胃粘膜中，这与我们在癌前病变中的染色结果十分相似C l a u d i n - 4 在正常胃粘膜中的高表达率很低，仅为1 3 ．3 ％，而在肠化生和异型增生中其高表达率接近于1 0 0 ％．因为C L D N - 4 在小肠和结肠粘膜中高表达【1 1 1 ，因此其在胃粘膜肠化生上皮中的高表达易于理解然而在正常组织与异型增生组织中的表达差异性确不是十分清楚异型增生上皮细胞以显著的细胞异型性，异常分化和异常的组织结构为特点这些形态学上的主要特征可能与c l a u d i n - 4 的表达增高相关具体的机制仍需要进一步的研究总之，c l a u d i n - 4 可作为胃粘膜肠化生与异型增生的一个分子生物学标志物在目前的研究中，我们发现c l a u d i n - ．4 的表达降低与组织分化程度相关分化组比未分化组具有较高的c l a u d i n - 4 高表达率L e e 等人．【I 明报道c l a u d i n - 4 的表达降低与破坏腺管结构和去分化相关，这与我们的研究结果相似。

组织学生长方式是胃癌生物学表现的一个重要因素依据生长方式和浸润程度，M i n g [ 1 】将胃癌分为两型：膨胀型和浸润型然而，通过肿瘤组织对周围组织的浸润程度，日本胃癌协会将胃癌分为三型：腓a ，肿瘤呈现膨胀型生长，与周围组织界限较清楚；I N F b ，肿瘤呈现中间型生长方式，介于膨胀型与浸润型之间；I N F c ，肿瘤呈现浸润型生长，与周围组织无明显界限【3 2 】这与我们的临床实践更加接近，确实存在难以分型的中间型( 图4 ) 与膨胀型和中间型比较，浸润型癌的c l a u d i n - 4 表达显著降低C l a u d i n - 4 与预后的关系仍存有很多争议在我们的研究中并未发现c l a u d i n - 4与预后具有相关性我们研究与S o i n i 等人．【1 4 】的研究相同( 研究包括1 1 8 个样本) 然而，R e s n i c k 等人【1 3 ] 在1 4 6 例样本研究发现中c l a u d i n - 4 的表达增高是预后因素不好的表现，而O h t a n i 等人【1 9 】在1 2 4 例样本中研究发现c l a u d i 。