3 实验三蚕豆染色体组型分析01.ppt

遗传育种学实验,,中国海洋大学水产学院,实验三、蚕豆染色体组型分析,一、实验目的,掌握染色体制片技术；了解和认识某一物种染色体组的基本组成和染色体形态特征；计算染色体组型有关数据遗传育种学实验,,中国海洋大学水产学院,二、实验原理,遗传育种学实验,,中国海洋大学水产学院,各种生物的染色体数目是恒定的，大多数高等动、植物是二倍体，每一个体细胞含有两组同样的染色体，用2n表示每一个配子带有一组染色体，叫单倍体，用n表示两性配子结合后，具有两组染色体，成为二倍体生物染色体复制后，纵向并列的两个染色单体通过着丝粒联在一起，由于着丝粒在染色体上位置的不同，可以把染色体分成相等或不等的两个臂，造成中部着丝粒染色体，近中着丝粒染色体，近端部着丝粒染色体，端部着丝粒染色体等有的染色还含有随体或次缢痕这些染色的特异结构构成一个物种染色体组型染色体组型分析是细胞遗传学、现代分类学、进化理论的重要研究手段染色体分类一般采用Levan提出的标准，按臂比（arm ratio = 长臂长度/短臂长度）将染色体分为四类：,遗传育种学实验,,中国海洋大学水产学院,三、实验材料 蚕豆或洋葱根尖； 细胞中期分裂相显微摄影放大照片四、实验器具和药品 1. 器材 显微镜，载玻片，盖玻片，恒温水浴锅，温度计，烧杯，指管，镊子，解剖针，染色板，纱布，吸水纸 2. 药品Schiff试剂，1M HCl，冰乙酸，95%乙醇，70%乙醇，0.1%秋水仙素。

遗传育种学实验,,中国海洋大学水产学院,五、实验步骤,1、材料准备,,,,,,遗传育种学实验,,中国海洋大学水产学院,1%秋水仙素溶液（量以浸没其根尖为宜）用刀片或剪刀将上述处理的根尖剪下1cm左右，卡诺固定液室温固定2－24h，固定液量为根尖材料体积的15倍以上用95%乙醇冲洗根尖后置于70%乙醇中0- 4℃冰箱保存1—2年遗传育种学实验,,中国海洋大学水产学院,植物多采用压片方法制备从固定液中选取6—8个根尖放在盛有1M HCl的试管中，在60℃水浴中水解8min用刀片或解剖针切取根尖1mm于载玻片上,加入改良的苯酚品红，染色1-2min，根尖应呈深紫红色用刀片分割成4—5小块，用针尖拨碎分散开，加上盖玻片，复以吸水纸，用拇指或橡皮头玻璃棒用力均匀地敲打盖片，使根尖细胞成一单层细胞（材料呈云雾状），进行镜检2、染色体标本制备,遗传育种学实验,,中国海洋大学水产学院,3. 染色体二倍数（2n）的确定,镜下选取50—100个分散良好，形态清晰，数目完整的分裂相计数每个细胞的染色体数目，找出染色体数目的众数，并计算众数所占百分比，据此确定它的染色体倍数（2n）遗传育种学实验,,中国海洋大学水产学院,4. 染色体观察,选取5—10个数目完整，分散良好，长度适当（正中期），着丝粒清楚，两条染色体适度分开，形态清晰的分裂相显微拍照.在照片上记录染色体形态测量数据。

首先确认每条染色体的着丝粒位置，以此为界用毫米尺测量染色体的长臂和短臂长度，并参考众数，确定该物种的染色体分类组成以及观察染色体的其他形态特征，如有无异型染色体对，次缢痕，随体等遗传育种学实验,,5.核型分析,1、编号，测量染色体长臂长，短臂长，总长2、计算臂比，相对长度3、根据测量、计算结果将染色体配对、排列4.配对原则：臂比，相对长度接近的两条染色体配为一对5. 排列：根据染色体相对长度，从长到短依次编号排列，短臂向上，长臂向下遗传育种学实验,,中国海洋大学水产学院,染色体组型测量数据分析整理填入下表,遗传育种学实验,,中国海洋大学水产学院,,,,,随 体,次缢痕,着丝粒,,遗传育种学实验,,中国海洋大学水产学院,6. 选取其中形态最好，最有代表性的一个分裂相照片，依次剪下各单个的染色体，按表型特征将全部染色体配同源对（或同源组）配对的根据是随体的有无及大小，臂比是否相等，染色体长度是否相等7. 将染色体全部的同源对（或同源组）按以下规则依次整齐排列： ①全部着丝点对齐在同一水平线上，  ②短臂朝上长臂在下， ③按大小降序从左到右依次排队（等长的染色体，短臂长者排在前头）， ④具随体染色体、性染色体排放在最后（蚕豆染色体组型例外）；若有二对以上具随体染色体，则大随体染色体在前，小随体染色体在后。

8. 将排好的染色体对（组）按先后顺序粘贴在绘图纸上，编上序号；然后翻拍定型，使其成为核型照片；9. 画出标准化模式图：用坐标纸或绘图纸绘成染色体模式图遗传育种学实验,,中国海洋大学水产学院,六．思考题和作业什么是染色体组型？主要包括那些内容？你认为研究某物种染色体组型分析的关键是什么？提交良好的细胞分裂相照片3-5张蚕豆染色体组型分析结果----数据统计表，核型图, 核型公式 K(2n)=( )m + ( )sm + ( ) st + ( ) t + ( )( ) sat,遗传育种学实验,,中国海洋大学水产学院,。