标准曲线知识.docx

标准曲线知识（液相色谱中通常说的线性关系）针对很多研究生对液相色谱之线性关系考察一知半解, 只知道要做这个，为什么要做？怎么做？怎么分析？等等, 并不清楚，下面采用示例做一个讲解示例：标准品浓度梯度与相应的峰面积浓度梯度峰面积01002299450167028904101105121310141509161690181852201911222002线性关系考察115000 5 10 15浓度梯度图1从低到高前7个数据线性图线性关系考察2从低到高前8个数据线性图线性关系考察3从低到高前9个数据线性图线性关系考察4从低到高前10个数据线性图线性关系考察5从低到高前口个数据线性图图6从低到高前12个数据线性图以上6个图均是基于表中数据所做的线性关系图解说：1•图 6 中的公式 y = 90.642X + 160.03：X指浓度，Y指在某液相条件下，当浓度为X时的峰面 积，他们的关系满足y = 90.642X + 160.03这个公式当X为 0时（空白）峰面积为160.03,为1时峰面积为160.03+90.642, 依此类推R2指相关系数，即浓度与峰面积的相关性，即峰面积是 否随浓度的增加而增加，如果浓度增加1倍，峰面积也增加 1倍，则他们完全相关；如果峰面积与浓度的增加没有规律， 则他们不相关。

R2在0~2之间，为0时完全不相关，为1时 完全相关，越高，相关性越高，方法越好一般来说，液相 线性关系要满足4个9,即IV $0.9999,有些特别难测的, 可以为0.999o2•以上6个图显示，图1至图3较好的满足了线性关系，但 随着浓度的增加，线性关系破坏（图4至图6）,浓度的增加， 并没有使峰面积增加相应的倍数说明一个问题，仪器测量 是有一个浓度范围的（所有仪器都一样），超过一定范围， 线性关系就不存在了，浓度与峰面积之间失去了其相关性, 所测数据用线性关系来衡量就会不准确PS：液相色谱的外标法（外标一点和标准曲线法）均是 基于线性关系来计算的，外标一点法计算方法为样品浓度（X 样）/标准品浓度（X标）=样品峰面积（Y样）/标准品峰面 积（Y标），当标准品浓度X标及2个峰面积Y样和Y标都知 道时，就可算出样品浓度X样，但线性关系不存在时，外标法就不准确了所以，我们所测得的样品浓度一定要性关系范内，超过就不准确了3.线性关系是用来衡量液相色谱仪上机条件（柱温、流速、 流动相等）的准确与稳定如否，以及衡量线性范围（什么范 围内呈线性关系，上限是多少）的，他只与标准品及其浓度 及上机条件有关，与做样品测定的提取条件等毫无关系，也 就是说标准曲线是独立测定的，不与你的样品提取条件有关。

但标准曲线相当于参照物，它是衡量样品浓度的标准，所以， 上机方法一旦确定，不管什么时候测线性关系，这个关系都 客观存在的（理论上讲，不同环境条件下，同样的上机条件， 标准曲线的截距和斜率是有差异的但由于液相色谱仪的先 进性使得其能够控制上机环境条件，线性关系变化不会很大, 只要测定时有对照品浓度做对照，使用外标一点法也可以相 对准确的测定样品浓度，因此没必要每次都做线性考察PS：相对来说，分光光度法是每次测定都应该做线性考察的由于线性关系是衡量这个方法的可行性的，肯定要在最 前面进行测定，上机条件一确定就得测，而不是等单因素试 验、正交试验甚至批量样品试验都做完了才测等这些做完 了再测，万一线性关系不好或者这些试验的浓度过高超过线 性范围了，那所测得的数据就是不准确的，那得全部重做 4•所以，当做提取溶剂及提取方法等其它单因素试验，出现 不同的处理峰面积不同时，只要有一个处理的峰面积超过了 线性关系浓度上限的峰面积，就得降低样品的浓度（少称样， 或者加大稀释倍数），不用管那些低浓度的，因为线性是有 一个范围的，通常较低浓度的一般都性范围内（当然， 也不是越低越好，原则是要性范围内）如果只是某个 处理如某溶剂的峰面积超限，也可以只降低那一个处理的浓 度，因为它的稀释倍数高一些，最终的含量是不会变的。

一 般来说，样品的浓度性范围的中间部分是最好的）总言之，只有测定样品的浓度性关系浓度范围内，测得的数据才有意义，否则是不准确的上限浓度的确定：对照示例，多做几个标准品梯度，从较低的几个浓度开始，逐步做线性关系考察，就能知道线性 关系的上限用上限浓度做对照，所测样品的峰面积不高于 上限标准品浓度的峰面积就行做线性关系时要有一个空白对照（标准品浓度为0）,空白对照指单单使用标准品的溶剂，而没加标准品（不是测定 样品的提取液，是标准品溶剂，如标准品用甲醇溶解就用甲 醇做空白即空白对照的溶济要与标准品使用的溶剂完全一 样）当然，样品测定时则用提取液做空白。