2DEAE纤维素梯度层析课件.ppt

DEAE — DEAE — 纤维素梯度层析实验纤维素梯度层析实验 一一 实验原理实验原理 DEAE-DEAE-纤维素是以纤维素为母体接有二乙基氨基乙基（纤维素是以纤维素为母体接有二乙基氨基乙基（DEAEDEAE）活性基团的）活性基团的弱碱性阴离子交换剂弱碱性阴离子交换剂, ,它在离子交换层析中可用于蛋白质、核酸、激素、酶等它在离子交换层析中可用于蛋白质、核酸、激素、酶等大分子的分离与纯化对于某些组分比较复杂或性质比较相近的蛋白质样大分子的分离与纯化对于某些组分比较复杂或性质比较相近的蛋白质样品在采用一般的恒溶剂系统进行离子交换柱层析时，往往不容易分离，这品在采用一般的恒溶剂系统进行离子交换柱层析时，往往不容易分离，这时可采用梯度洗提（装置见图时可采用梯度洗提（装置见图1-21-2）即用一定的样品离子在不同的离子强度）即用一定的样品离子在不同的离子强度（或（或pHpH）溶液中对一定的离子交换剂的平衡常数不同，在洗提过程中，通过）溶液中对一定的离子交换剂的平衡常数不同，在洗提过程中，通过不断改变洗提的离子强度不断改变洗提的离子强度pHpH不变）不变）[ [根据实验的具体情况，也可同时改变离子根据实验的具体情况，也可同时改变离子强度和强度和pH]pH]，以逐步改变样品中各组分与离子交换剂的交换能力，最后得到分，以逐步改变样品中各组分与离子交换剂的交换能力，最后得到分离，这种层析方式即称为梯度洗提层析。

洗提剂的梯度产生如图所示，当离，这种层析方式即称为梯度洗提层析洗提剂的梯度产生如图所示，当A1=A2A1=A2时，产生线形梯度；当时，产生线形梯度；当A1>A2A1>A2时，产生凹型梯度；当时，产生凹型梯度；当A1

毫升，混匀即可2 2）、）、Buffer BBuffer B的配制：的配制： 取取Buffer A 50Buffer A 50毫升，加氯化钠（毫升，加氯化钠（1.0M1.0M））2.92.9克，溶解混匀克，溶解混匀即可3 3）、）、CEACEA样液的配制：样液的配制： 20.0mg CEA+1ml Buffer A20.0mg CEA+1ml Buffer A五五 方法与步骤方法与步骤 1 1 树脂的处理树脂的处理 2 2 装装 柱柱 [ [ 柱柱 高高 10.0cm ]10.0cm ] 3 3 平平 衡衡 [ [ 流流 速速 0.8 ml / mi n; 30.0 min 0.8 ml / mi n; 30.0 min ] ] 4 4 上上 样样 [ [ 上样体积上样体积 1.0ml ]1.0ml ] 5 5 洗洗 涤涤 [ 1.0ml[ 1.0ml××2 2次次; ; 再自动洗涤再自动洗涤15 min15 min ] ] 6 6 洗洗 脱脱 [ [ 梯度混合仪梯度混合仪 A A –– B B杯杯, ,各倒入各倒入 A - BA - B溶液溶液60ml 60ml 最后一个峰已回到基线时，继续最后一个峰已回到基线时，继续洗脱洗脱1010分钟分钟 ] ] 7 7 收收 集集 8 8 测测 定定•思考题思考题•1 1、、DEAE-DEAE-纤维素最佳吸附纤维素最佳吸附PHPH范围是多少？范围是多少？•2 2、、DEAE-DEAE-纤维素再生最适酸、碱浓度是多少？纤维素再生最适酸、碱浓度是多少？。