氨基酸的纸层析法.docx

氨基酸的纸层析法一、 实验目的学习氨基酸纸层析法的基本原理掌握氨基酸纸层析的操作技术二、 实验原理纸层析法（paper chromatography）是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法， 利用样品在两种互不相容的溶剂中分配系数的不同达到分离的目的纸层析所用 展层剂大多由水和有机溶剂组成展层时，水为静止相，他与滤纸纤维亲和力 强；有机溶剂为流动相，它与滤纸纤维亲和力弱将样品在滤纸上确定的原点处 展层，由于样品中各种氨基酸 在两相中不断进行分配，且他们的分离系数各不 相同，所以不同的氨基酸随流动相移动的速率也不相同，于是各种氨基酸在滤 纸 上就相互分离出来，形成距原点不等的层析点分配系数（K）=溶质在流动相中的浓度C/溶质在固定相中的浓度CS 比移值（Rf）=从原点全层析点中心的距离/原点至溶剂前沿的距离三、 实验仪器与试剂1、 实验仪器试剂瓶、天平、通风橱、容量瓶、量筒、层析滤纸、直尺与铅笔、毛细管、层析缸、电热吹风机、烘箱、培养皿（喷雾器）2、 实验试剂：10%异丙醇：量取50ml异丙醇，于500ml的容量瓶中定容0.01mol/L的氨基酸标准溶液：赖氨酸标准溶液：称取赖氨酸标准品0.146g混合溶于100ml 10%异丙醇中。

谷氨酸标准溶液：称取谷氨酸标准品0.147g混合溶于100ml 10%异丙醇中脯氨酸标准溶液：称取脯氨酸标准品0.115g混合溶于100ml 10%异丙醇中苯丙氨酸标准溶液：称取苯丙氨酸标准品0.165g混合溶于100ml 10%异丙醇 中混合氨基酸标准溶液：量取赖氨酸标准溶液，谷氨酸标准溶液，脯氨酸标准溶液，苯丙氨酸标准溶液各20ml，混匀层析溶剂：正丁醇：乙酸：蒸馏水=4:1:5（350ml/缸，现用现配）0.25%茚三酮显色液：称取0.25g茚三酮，溶于100ml丙酮中四、试验步骤1、 滤纸的准备取15x15cm的层析滤纸条一张，在底端2 cm处用铅笔与直尺画一横线，在 此线上每隔2.5cm做一标记，记作五种氨基酸的点样位置2、 点样取毛细管在每个点样处精确点样，其直径约2-3nm为宜，点2-3次为佳大 约为毛细管管长的1/4-1/3）必须在每一滴样品干后再滴第二滴，在操作过程中 应戴上乳胶手套，以避免污染滤纸3 、层析向层析缸缸底的培养皿中倒入层析溶剂，液层约厚1.5cm将点好样的滤纸 放入层析缸中，注意点样端朝下，盖好盖子，并用回形针将其固定当溶剂上升 至离滤纸顶端约2cm时（大约1h），立即取出并用铅笔与直尺画一条直线标出溶 剂前沿的位置，再用吹风机将其吹干。

4 、显色将层析滤纸放在盛有0.25%的茚三酮显色液的培养皿中浸润（或用喷雾器）， 不要超过前沿放在60-65^的烘箱中烘10min，即能显出各种氨基酸的色斑五、结果与分析原点距离到溶剂前沿（cm）数f值J皇-?._赖氨酸谷氨酸脯氨酸苯丙氨酸原点到层析点中心距离（cm）Rf六、注意事项1、 点样过程中应戴上乳胶手套，以避免污染滤纸2、 点样量不宜过多，2-3次即可，否则影响分离效果，产生拖尾现象（太浓，斑点易 扩散或拉长）3、均匀喷上0.25%茚三酮显色液，注意使溶液不倒流。