雷公藤甲素—甘草次酸复方微乳的制备及其理化性质和体外释药特性研究.docx

雷公藤甲素—甘草次酸复方微乳的制备及其理化性质和体外释药特性研究摘要目的：建立雷公藤甲素-甘草次酸復方微乳的含量测定方法，优化其处方，并考察其理化性质及体外释药特性方法：采用超高效液相色谱法测定雷公藤甲素-甘草次酸复方微乳的含量，色谱柱为ACQUITYUPLCBEHC18，流动相为0.1%甲酸水溶液-乙腈〔梯度洗脱〕，流速为0.4mL/min，柱温为40℃，检测波长为218nm，进样量为5L采用水滴定法绘制伪三元相图，以油相、外表活性剂、助外表活性剂为指标优化处方；采用体外释放试验考察所制微乳的体外释放特性结果：雷公藤甲素、甘草次酸的检测质量浓度线性范围分别为1～40g/mL〔r=0.9997〕、10～400g/mL〔r=0.9998〕；定量限分别为0.5、0.8g/mL，检测限分别为0.1、0.2g/mL；精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于2%；加样回收率分别为100.32%～101.15%〔RSD=0.36%，n=6〕、99.78%～101.42%〔RSD=0.59%，n=6〕最优处方为以中链甘油三酯为油相，聚乙二醇羟基硬脂酸酯为外表活性剂，无水乙醇为助外表活性剂，水为水相，四者质量比为8∶28∶14∶50。

所制微乳为水包油型，外观透明澄清，其平均粒径为〔62.383.44〕nm，平均多分散指数为0.0960.001，平均黏度为〔26.841.10〕mPa-S所制微乳在24h内的雷公藤甲素、甘草次酸累积释放度分别为99.8%、99.7%〔pH2.0的磷酸缓冲盐溶液中〕，99.3%、99.4%〔pH7.4的磷酸缓冲盐溶液中〕，98.9%、98.4%〔pH9.0的磷酸缓冲盐溶液中〕；单方微乳中的雷公藤甲素和甘草次酸释放均快于复方微乳结论：所建含量测定方法操作简便、准确；所得优化处方稳定、可行；所制雷公藤甲素-甘草次酸复方微乳较单方微乳具有更好的缓释作用关键词雷公藤甲素；甘草次酸；复方微乳；超高效液相色谱法；伪三元相图；处方优化；体外释放度StudyonPreparationofTriptolide-glycyrrheticAcidCompoundMicroemulsionandItsPhysicochemicalPropertiesandinvitroReleaseCharacteristicsZHENGHeng1，LIXiaodong1，ZHAIXiaoying1，DONGShuying1，ZHANGDuo1，YANGRui2〔1.Dept.ofDermatology，CentralHospitalAffiliatedtoShenyangMedicalCollege，Shenyang110024，China；2.AcademyofTraditionalChineseMedicineofLiaoningProvince，Shenyang110034，China〕ABSTRACTOBJECTIVE：ToestablishcontentdeterminationmethodofTriptolide-glycyrrheticacidcompoundmicroemulsion，optimizetheformulaandinvestigateitsphysicochemicalpropertiesandreleaserateinvitro.METHODS：ThecontentofTriptolide-glycyrrheticacidcompoundmicroemulsionwasdeterminedbyUPLC.ThedeterminationwasperformedonACQUITYUPLCBEHC18columnwithmobilephaseconsistedof0.1%formicacidaqueoussolution-acetonitrile〔gradientelution〕attheflowrateof0.4mL/min.Thecolumntemperaturewas40℃.Thedetectionwavelengthwassetat218nm，andsamplesizewas5L.Pseudo-ternaryphasediagramsweredrawnbywatertitrationmethod.Usingoilphase，surfactantsandco-surfactantsasindex，theformulawasoptimized，andinintroreleasecharacteristicswasinvestigatedbyinvitroreleasetest.RESULTS：Thelinearrangeoftriptolideandglycyrrhetinicacidwere1-40g/mL〔r=0.9997〕and10-400g/mL〔r=0.9998〕，respectively.Thelimitsofquantitationwere0.5and0.8g/mL；thelimitsofdetectionwere0.1and0.2g/mL.RSDsofprecision，stabilityandreproducibilitytestswerealllessthan2%.Averagerecoverieswere100.32%-101.15%〔RSD=0.36%，n=6〕，99.78%-101.42%〔RSD=0.59%，n=6〕.Theoptimalformulaincludedthatmediumchaintriglycerideasoilphase，polyethyleneglycolhydroxystearateassurfactants，ethanolasco-surfactants，wateraswaterphase，theproportionofthemwas8∶28∶14∶50.TheobtainedmicroemulsionwasO/Wtype，beingtransparentandclear，withaveragediameter，averagepolydispersityindexandaverageviscosityof〔62.383.44〕nm，0.0960.001and〔26.841.10〕mPa-S.Within24h，cumulativereleaseratesoftriptolideandglycyrrhetinicacidinobtainedmicroemulsionwere99.8%and99.7%〔inPBSpH2.0〕，99.3%and99.4%〔inPBSpH7.4〕，98.9%and98.4%〔inPBSpH9.0〕，respectively.Triptolideandglycyrrhetinicacidreleasedfasterinthesinglemicroemulsionthaninthecompoundmicroemulsion.CONCLUSIONS：Establishedcontentdeterminationmethodissimpleandstable.Theoptimizedformulaisstableandfeasible.Obtainediriptolide-glycyrrhetinicacidcompoundmicroemulsionshowbettersustained-releaseeffectthansiglemicroemulsion.KEYWORDSTriptolide；Glycyrrheticacid；Compoundmicroemulsion；UPLC；Pseudo-ternaryphasediagrams；Formulaoptimization；invitroreleaserate雷公藤為卫矛科雷公藤属植物雷公藤〔Tripterygiumwilfordii〕多年生藤本植物，味苦、辛，性寒，有剧毒，具有免疫抑制作用【1】。

雷公藤广泛应用于血管炎【2】、红斑狼疮【3】、湿疹【4】、银屑病【5】、系统性硬皮病【6】、过敏性紫癜【7】、结节性红斑[8]、皮肤淀粉样变[9]、白塞病[10]等皮肤病以及肾病[11]、类风湿性关节炎[12]的治疗，效果显著但雷公藤为有毒中药，其活性成分雷公藤甲素具有明显的生殖毒性[13]和肝肾毒性[14]有数据统计显示，雷公藤制剂用药后的不良反应发生率高达11.7%[14]古语云："甘草解百毒";现代研究说明，甘草可在一定程度上拮抗雷公藤的毒性并提高疗效，表达出了中药配伍减毒增效的中医药特色优势[11，15]为此，本研究将雷公藤的主要活性成分雷公藤甲素和甘草的主要活性成分甘草次酸制成雷公藤甲素-甘草次酸复方微乳，以期通过配伍来降低雷公藤甲素的毒性，并利用纳米制剂粒径小、生物相容性好的优势，到达减毒增效的目的在此根底上，笔者采用超高效液相色谱法〔UPLC〕测定了雷公藤甲素-甘草次酸复方微乳的含量，优化其制备处方，并考察所制微乳的相关理化性质及体外释放度，旨在为雷公藤相关制剂的开发以及临床用药平安性的提高提供参考1材料1.1仪器ACQUITYUPLCTM型UPLC仪，包括ACQ-QSM四元泵、ACQ-FTN自动进样器、ACQ二极管阵列检测器、Empower3色谱工作站〔美国Waters公司〕；XW-80A型微型旋涡混合仪〔上海沪西分析仪器厂〕；XS105型十万分之一电子天平〔瑞士Mettler-Toledo公司〕；DF-101S型集热式恒温磁力搅拌器〔巩义市英峪予华仪器厂〕；Milli-QReference型超纯水系统〔德国Merck公司〕；ZetasizerNanoZS90型激光粒度仪〔英国Malvern仪器公司〕；NDJ-1型旋转式黏度计〔上海天平仪器厂〕；透析袋〔截留分子量为8000～14000Da，北京索莱宝科技〕。

1.2药品与试剂雷公藤甲素对照品〔批号：111567-202102，纯度：99.8%〕、甘草次酸对照品〔批号：110723-202112，纯度：99.6%〕均由中国食品药品检定研究院提供；雷公藤甲素原料药〔南京泽朗医药科技，批号：130708，纯度：>98.0%〕；甘草次酸原料药〔大连美仑生物技术，批号：140113，纯度：>98.0%〕；大豆油〔营口渤海油脂工业，批号：20211205〕；油酸乙酯〔北京长城化学试剂厂，批号：101106〕；中链甘油三酯〔批号：111006〕、辛酸/癸酸甘油三酯〔批号：58653-35〕、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯〔批号：100501〕、二乙二醇单乙基醚〔批号：100302〕均购自法国Gattefosse公司；肉豆蔻异丙酯〔批号：120612〕、棕榈酸异丙酯〔批号：120908〕均购自浙江兰溪物美化工；聚氧乙烯氢化蓖麻油〔批号：145179〕、聚乙二醇羟基硬脂酸酯〔批号：29749816K0〕均购自德国BASF公司；聚山梨酯20〔批号：061016〕、聚山梨酯80〔批号：060409〕均购自英国CRODA公司；无水乙醇〔批号：20210311〕、丙二醇〔批号：20210504〕、聚乙二醇200〔批号：20210603〕、聚乙二醇400〔批号：202108006〕均购自天津市百世化工；磷酸〔批号：20210915〕、磷酸氢二钠〔批号：20210812〕、磷酸二氢钾〔批号：20210513〕、氢氧化钠〔批号：20210922〕、硼酸〔批号：20210706〕均购自国药集团化学试剂；氯化钾〔北京燕京药业，批号：1507031〕；亚甲蓝〔北京化学试剂公司，批号：070609〕；苏丹红Ⅲ〔德国Dr.Ehrenstorfer公司，批号：40517〕；乙腈、甲酸均为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为自制超纯水。

2方法与结果2.1雷公藤甲素-甘草次酸复方微乳的制备精密称取油相、外表活性剂及助外表活性剂各适量，置于具塞西林瓶中，室温下以磁力搅拌〔30r/min，下同〕，混合均匀，然后加雷公藤甲素原料药12.5mg、甘草次酸原料。